一种农杆菌介导的油菜黑胫病菌的遗传转化方法技术

本发明专利技术提供了一种农杆菌介导的油菜黑胫病菌的遗传转化方法，属于植物病原真菌遗传转化技术领域，所述方法包括以下步骤：1)将含质粒pCHs‑GFP的农杆菌接种于LB液体培养基中培养，后转入含有150～250μg/mL乙酰丁香酮的CM液体培养基中重悬获得农杆菌菌液；2)收集油菜黑胫病菌的分生孢子与无菌水混合制备浓度为(0.5～9)×10

Agrobacterium-mediated transformation of Brassica napus

【技术实现步骤摘要】
一种农杆菌介导的油菜黑胫病菌的遗传转化方法
本专利技术属于植物病原真菌遗传转化
，尤其涉及一种农杆菌介导的油菜黑胫病菌的遗传转化方法。
技术介绍
油菜黑胫病(Phomastemcanker)，目前是制约许多国家油菜产业健康发展的重要因素之一。研究显示，在世界上许多黑胫病流行的油菜产区，病原复合种Leptosphaeriamaculans和Leptosphaeriabiglobosa两者共同存在，单独或共同侵染寄主作物，L.maculans可引起油菜茎基部腐烂并造成严重的产量损失。油菜黑胫病在世界各国的扩散趋势及演化规律显示存在L.biglobosa被L.maculans逐渐替代的趋势。1999年，我国首次分离获得病原菌L.biglobosa，且近年来L.biglobosa在我国的发生危害呈逐年扩展蔓延趋势，随着L.biglobosa的扩展蔓延，我国极有可能出现L.maculans，即黑胫病对我国的油菜及十字花科作物安全生产构成了威胁。为阻止、应对黑胫病给我国的油菜生产造成巨大的经济损失，我们必须明白黑胫病(L.biglobosa)与油菜的互作关系。荧光标记为研究病原微生物与寄主本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种农杆菌介导的油菜黑胫病菌的遗传转化方法，包括以下步骤：1)将含质粒pCHs‑GFP的农杆菌接种于LB液体培养基中培养至菌液的OD600为0.5～0.7后，转入含有150～250μg/mL乙酰丁香酮的CM液体培养基中重悬获得农杆菌菌液；2)收集油菜黑胫病菌Leptosphaeria biglobosa的分生孢子与无菌水混合制备浓度为(0.5～9)×10

【技术特征摘要】
1.一种农杆菌介导的油菜黑胫病菌的遗传转化方法，包括以下步骤：1)将含质粒pCHs-GFP的农杆菌接种于LB液体培养基中培养至菌液的OD600为0.5～0.7后，转入含有150～250μg/mL乙酰丁香酮的CM液体培养基中重悬获得农杆菌菌液；2)收集油菜黑胫病菌Leptosphaeriabiglobosa的分生孢子与无菌水混合制备浓度为(0.5～9)×106个/mL的分生孢子悬浮液；3)将所述农杆菌菌液与分生孢子悬浮液混合，共培养3～4d后，转移至筛选培养基，筛选培养7～15d获得转化子；所述质粒pCHs-GFP上包括潮霉素抗性基因、GFP绿色荧光蛋白基因和卡那抗性基因；步骤1)和步骤2)之间无时间顺序限定。2.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，步骤1)中所述菌液的OD600为0.6。3.根据权利要求1或2所述的遗传转化方法，其特征在于，步骤1)中所述CM液体培养基中乙酰丁香酮的浓度为180～220μg/mL。...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋培玲，皇甫海燕，李子钦，吴晶，史志丹，燕孟娇，郭晨，皇甫九茹，贾晓清，郝丽芬，魏晓军，郭建靖，杨永青，
申请(专利权)人：内蒙古自治区农牧业科学院，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15