一种靶向治疗TNF-α相关疾病的人抗体制剂制造技术

本发明专利技术涉及一种靶向治疗TNF‑α相关疾病的人抗体制剂，主要为液体含水药物制剂。所述液体含水药物制剂可增强含重组人抗TNF‑α单克隆抗体等TNF‑α拮抗剂抗体药物的稳定性，延长其在含水制剂中的保存周期。本发明专利技术的制剂在经过高温40℃保存4周及光照4000lx试验15天，至少5次循环冻融，室温放置1个月后，2～8℃保存至少36个月，仍然保持稳定。本发明专利技术的制剂可用于皮下注射使用。

A Human Antibody Preparation Targeted to Treat TNF-alpha Related Diseases

【技术实现步骤摘要】
一种靶向治疗TNF-α相关疾病的人抗体制剂
本专利技术涉及一种靶向治疗TNF-α相关疾病的抗体制剂，其主要为液体含水药物制剂。
技术介绍
类风湿关节炎(RA)是一种常见的关节炎，在人群中的发病率为0.3％～1％，如不及时治疗，可导致骨破坏和关节功能障碍。在RA发病中有多种促炎性细胞因子参与，如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素如IL-1,IL-6,IL-8等[1]。因此，抑制促炎性细胞因子的产生或阻断其作用，有望改善关节炎症反应。近年来许多新研究开发的生物制剂可通过阻断或下调炎性细胞因子的活性而达到控制病情的进展，如TNF抑制剂、抗IL-1抗体等，这些生物制剂的主要作用机制有：(1)针对细胞因子或其受体的单克隆抗体；(2)可溶性受体拮抗剂，即不包括跨膜成分和胞内功能区的细胞因子表面受体。该受体拮抗剂可与游离的细胞因子结合，抑制后者与细胞表面受体结合。可溶性受体拮抗剂的半衰期较短，可通过加入某些整合结构如IgG的Fc受体或聚乙烷基乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)而延长；(3)受体拮抗蛋白，为无生物活性的蛋白质，可与细胞因子竞争结合细胞表面的膜受体。受体拮抗蛋白必须结合90％以上细胞表面受体方认为有效。目前认为，在诸多RA炎症反应的细胞因子中，TNF-α(TumorNecrosisFactorα，肿瘤坏死因子-α)是最重要的促炎性细胞因子之一，TNF-α在RA病变的持续发展、局部炎症反应和组织损伤中均起着重要作用[2]。RA中TNF-α和TNFR水平在血清、滑膜以及滑液中均显著升高，特别是病情严重和活动期患者。RA患者血清中TNF-α水平与关节损伤评分、红细胞沉降率(ESR)及贫血呈正相关。TNF-α还与RA患者体重减轻和疾病复发有关。TNF可作用于多种细胞，如促进巨噬细胞分泌炎性细胞因子和趋化因子，促进炎症反应。TNF-α的主要作用是：(1)诱导内皮细胞表达黏附分子和血管内皮生长因子(VEGF)，促进白细胞与血管内皮黏附、渗透，导致局部的炎症反应和血管VEGF生成；(2)作用于肝细胞，产生C反应蛋白(CRP)；(3)在类风湿关节炎中TNF-α可分别作用于破骨细胞、滑膜细胞和软骨细胞，导致这些细胞的活化，产生金属蛋白酶、胶原酶、基膜溶解酶(stromelysin)及前列腺素E2(PGE2)，进一步破坏软骨引起骨侵蚀、关节炎症和软骨破坏；(4)TNF-α还可促使滑膜细胞、巨噬细胞、纤维母细胞和软骨细胞产生IL-1,IL-8及TNF-α本身而加重组织损伤。因此，抑制TNF-α的作用对控制RA的病情和改善预后非常重要[3]。目前已被美国FDA批准的TNF-α抑制剂共有3种：可溶性受体拮抗剂-依那西普(Etanercept)，人鼠嵌合抗体-英夫利昔单抗(Infliximab)和人源化单抗。Etanercept是重组人II型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白，由II型TNF受体(p75)与IgG1的Fc部分组成二聚体；Infliximab是针对TNF的特异性IgG1单克隆抗体(由人Ig稳定区和鼠Ig可变区组成的嵌合体)；人源化单抗也是特异性针对TNF的IgG1单克隆抗体(Ig的稳定区和可变区均为人源的)。TNF抑制剂的主要不良反应有注射部位反应、感染、肿瘤、淋巴增殖性疾病、神经脱髓鞘病变以及狼疮样综合征[4-5]。众所周知，药物制剂必须考虑稳定性、施用方式、浓度等因素。这些因素会影响在制造、储藏和递送过程中，抗体的物理化学降解，进而影响对施用者的风险，因此稳定的抗体制剂是必须的。此外，某些抗体制剂需要高剂量施用，需要以较高的浓度配置，而高浓度的抗体制剂可能会伴随抗体凝聚、可溶性降低、稳定性下降等负面作用。目前，制备高浓度抗体制剂仍然面临巨大的挑战。申请人此前研发的治疗TNF-α相关疾病的人抗体BAT1406制剂，其抗体浓度为20-80mg/mL(CN103446583A)，其很难超过80mg/mL的上限。尽管存在这样的需求，然而，目前对于该抗体而言，仍没有令人满意的能支持高浓度抗体的制剂配方。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种可以支持更高浓度抗体存在的制剂。本专利技术的另一个目的在于提供一种浓度更高的抗体制剂。本专利技术的另一个目的在于提供一种稳定性更高的治疗TNF-α相关疾病的人抗体制剂。本专利技术的目的通过以下技术手段实现：一方面，本专利技术提供了一种抗体制剂，其为含水药物制剂，所述的含水药物制剂包括重组人抗TNF-α单克隆抗体，缓冲液体系，稳定剂，表面活性剂。具体地，本专利技术的抗体制剂含有以下组分：(1)20～120mg/ml有效量的抗TNF-a人源抗体(2)缓冲剂(3)0.5-10％稳定剂(4)0.01％～0.2％表面活性剂(5)注射用水所述的抗体制剂的pH为4.0～7.0。在一个实施例中，所述重组人抗TNF-α单克隆抗体是通过基因工程手段，在CHO细胞中表达的，并且通过一系列标准的层析步骤纯化获得的。在制备抗体后，再制备药物制剂。作为一种优选的实施方式，所述的重组人抗TNF-α单克隆抗体具有SEQIDNO.1所示的重链以及SEQIDNO.2所示的轻链(记名为BAT1406)。所述的TNF-α单克隆抗体或其抗原结合部分，能结合人TNF-α。作为一种优选的实施方式，所述的抗体的浓度为40～120mg/ml，更为优选50～100mg/ml。其中，所述的缓冲剂选自琥珀酸、柠檬酸、His-HCl、醋酸、磷酸盐中的一种或几种的组合；优选地，所述的缓冲剂选自His-HCl、HAc、磷酸盐和HAc的组合、His-HCl和HAc的组合；更优选His-HCl和HAc的组合。作为优选的实施方式，所述的每种缓冲剂的浓度为5～15mM；更优选为5～10mM。更优选地，当所述缓冲剂选自两种的组合时，前者与后者在体系中的摩尔比为1:2～2:1；更优选1:1。其中，所述的稳定剂为0.5％～5.0％Arg-HCl和0.01％～2％Met；或者选自3.0％～6.0％山梨醇；又或者选自7％～10％海藻糖。其中，所述的表面活性剂选自吐温80、吐温20或泊洛沙姆188。本制剂所选的表面活性剂均属于非离子型表面活性剂，它们对制剂的稳定性有提升作用，特别是在振荡和反复冻融的条件下。专利技术人发现，在本专利技术制剂中，不同种类的非离子表面活性剂对于稳定性的提升作用相差不大。如吐温80、吐温20、泊洛沙姆188均属于非离子型表面活性剂，它们在生物单抗制剂中的用量为0.001％--0.1％，使用量很低，极少量的表面活性剂即可满足样品稳定性需求。这可能是因为：表面活性剂是具有亲水基团和亲油基团的两亲分子，通过分子中不同部分分别对于两相的亲和，使两相均将其看作本相的成分，分子排列在两相之间，使两相的表面相当于转入分子内部，从而降低表面张力。由于两相都将其看作本相的一个组分，就相当于两个相与表面活性剂分子都没有形成界面，通过这种方式部分地消灭了两个相的界面，因此降低了表面张力和表面自由能，从而达到稳定单抗蛋白的目的。作为优选的实施方式，本专利技术的抗体制剂含有以下组分：(1)45～120mg/ml有效量的抗TNF-ɑ人源抗体(2)5～10mMHAc(3)5～10mMHis-HCl(4)2％～3.5％Arg-HCl(5)0.01％～0.5％Met(6)0.01％本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体制剂，其特征在于含有以下组分：(1)20～120mg/ml的抗TNF‑α人源抗体(2)缓冲剂(3)0.5‑10％稳定剂(4)0.01％～0.2％表面活性剂(5)注射用水所述制剂的pH为4.0～7.0；优选地，所述抗体的浓度为40～120mg/ml，更优选为50～100mg/ml；优选地，所述的缓冲剂选自琥珀酸、柠檬酸、His‑HCl、醋酸、磷酸盐中的一种或多种；更优选地，所述的缓冲剂选自His‑HCl、HAc、磷酸盐和HAc的组合、His‑HCl和HAc的组合；更优选His‑HCl和HAc的组合；更优选地，每种缓冲剂浓度均为5～15mM；更优选5～10mM；更优选地，当所述缓冲剂选自两种的组合时，前者与后者在体系中的摩尔比为1:2～2:1；更优选1:1。优选地，所述的稳定剂选自Arg‑HCl和Met的组合，或者山梨醇，或者海藻糖；优选地，所述的表面活性剂选自吐温80、吐温20或泊洛沙姆188。

【技术特征摘要】
1.一种抗体制剂，其特征在于含有以下组分：(1)20～120mg/ml的抗TNF-α人源抗体(2)缓冲剂(3)0.5-10％稳定剂(4)0.01％～0.2％表面活性剂(5)注射用水所述制剂的pH为4.0～7.0；优选地，所述抗体的浓度为40～120mg/ml，更优选为50～100mg/ml；优选地，所述的缓冲剂选自琥珀酸、柠檬酸、His-HCl、醋酸、磷酸盐中的一种或多种；更优选地，所述的缓冲剂选自His-HCl、HAc、磷酸盐和HAc的组合、His-HCl和HAc的组合；更优选His-HCl和HAc的组合；更优选地，每种缓冲剂浓度均为5～15mM；更优选5～10mM；更优选地，当所述缓冲剂选自两种的组合时，前者与后者在体系中的摩尔比为1:2～2:1；更优选1:1。优选地，所述的稳定剂选自Arg-HCl和Met的组合，或者山梨醇，或者海藻糖；优选地，所述的表面活性剂选自吐温80、吐温20或泊洛沙姆188。2.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于：所述的重组人抗TNF-α单克隆抗体具有SEQIDNO.1所示的重链以及SEQIDNO.2所示的轻链。3.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于：所述的稳定剂为0.5％～5.0％Arg-HCl和0.01％～2％Met；或者优选地，所述的稳定剂选自3.0％～6.0％山梨醇；又或者优选地，所述的稳定剂选自7％～10％海藻糖。4.根据权利要求3所述的制剂，其特征在于含有以下组分：(1)45～120mg/ml的抗TNF-ɑ人源抗体(2)5～10mMHAc(3)5～10mMHis-HCl(4)2％～3.5％Arg-HCl(5)0.01％～0.5％Met(6)0.01％～0.1％Tween80(7)注射用水其中，所述制剂的pH为5.2～5.6；或者优选地，含有以下组分：(1)45～120mg/ml的抗TNF-ɑ人源抗体(2)5～10mMHAc(3)5～10mMHis-HCl(4)4.0％～5.0％山梨醇(5)0.01％～0.1％Tween80(6)注射用水其中，所述制剂的pH为5.0～5.4；又或者优选地，含有以下组分：(1)45～120mg/ml有效量的抗TNF-ɑ人源抗体(2)5～10mMHAc(3)5～10mMHis-HCl(4)7％～9％海藻糖(5)0.01％～0.1％Tween80(6)注射用水所述的制剂的pH为5.0～5.4。5.根据权利要求3所述的制剂，其特征在于含有以下组分：(1)80～120mg/ml的抗TNF-ɑ人源抗体；优选85～120mg/ml；更优选90～110mg/ml(2)5～10mMHAc(3)5～10mMHis-HCl(4)2％～3.5％Arg-HCl(5)0.01％～0.5％Met(6)0.01％～0.1％Tween80(7)注射用水其中，所述制剂的pH为5.2～5.6；或者优选地，含有以下组分：(1)80～120mg/ml的抗TNF-ɑ人源抗体；优选85～120mg/ml；更优选90～110mg/ml(2)5～10mMHAc(3)5～10mMHis-HCl(4)4.0％～5.0％山梨醇(5)0.01％～0.1％Tween80(6)注射用水其中，所述制剂的pH为5.0～5.4；又或者优选地，含有以下组...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴用，林键，裴树军，王盛武，莫文俊，李胜峰，
申请(专利权)人：百奥泰生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44