胆汁中生物标志物在诊断恶性肿瘤中的应用制造技术

本发明专利技术提供了检测胆汁中生物标志物的试剂在制备用于诊断肝癌、恶性胆道肿瘤或胰腺癌的工具中的应用。本发明专利技术还提供了一种用于诊断肝癌、恶性胆道肿瘤或胰腺癌的工具，包括检测胆汁中生物标志物的试剂。本发明专利技术提供的方法和工具以胆汁为检测对象，样本容易获得且不会产生任何不良影响，能够有效获得涉及肝癌、恶性胆道肿瘤或胰腺癌等肿瘤的相关信息。

Application of Biomarkers in Bile in the Diagnosis of Malignant Tumors

【技术实现步骤摘要】
胆汁中生物标志物在诊断恶性肿瘤中的应用
本专利技术涉及生物检测领域，涉及胆汁中存在的可用于诊断肝癌、恶性胆道肿瘤或胰腺癌等恶性肿瘤的生物标志物，具体地，本专利技术涉及检测胆汁中生物标志物的试剂在制备用于诊断肝癌、恶性胆道肿瘤或胰腺癌的工具中的应用。
技术介绍
恶性阻塞性黄疸是肝胆疾病中常发的一种，对于肝胆的破坏程度非常的高，患者患上恶性阻塞性黄疸后会出现许多症状，最主要的是胆囊的病变，胆囊发炎分泌黄色的液体俗称黄疸，黄疸的危害非常的严重。其病因有以下几方面：1)胆管本身或胆囊的恶性肿瘤(胆管癌)；2)胰脏头部癌；3)华特壶腹癌一即十二指肠乳头癌；4)肝癌栓塞子(tumorthrombus)堵住胆管—即所谓的黄疸型肝癌；5)癌症病患胆管旁之肿大的淋巴结压迫胆管造成胆管阻塞。目前研究表明恶性阻塞性黄疸主要由肝癌、恶性胆道肿瘤、胰腺癌所引发，它们在临床诊断主要以影像学信息，如电子计算机断层扫描(ComputedTomography，CT)、增强CT、磁共振胰胆管造影(MagneticResonanceCholangiopancreatography，MRCP)等结果为基础，同时参照血液肿瘤标志物，如甲胎蛋白(AFP)、癌抗原19-9(CA19-9)、癌胚抗原(carcinoembryonicantigen，CEA)等水平，再结合临床体征来做出判断。然而，在需要获取恶性肿瘤进一步信息时，多采取穿刺活检取肿瘤组织，并进行病理学诊断或者组织基因检测。但是这给临床实施上带来了一些困难，如晚期肝癌患者不建议活检，其他恶性肿瘤在穿刺活检时，伴有引发转移的风险。这都给在手术之前准确获取到患者肿瘤组织的信息带来了巨大挑战。随着液体活检技术的发展，血液中循环肿瘤DNA(ctDNA)检测以趋于成熟。此方法通过提取恶性肿瘤患者血液中的微量ctDNA，进一步采用二代测序、ddCR等技术检测患者ctDNA基因变异情况，以此来作为指导肿瘤患者进一步治疗和用药的依据。因为在肺癌和转移性乳腺癌中已有较多研究证实其ctDNA和肿瘤组织来源的DNA对应性较好，因此ctDNA基因变异检测并已应用于肺癌等恶性肿瘤。另一方面，血清中的肿瘤相关生物标志物分子，如AFP、CA19-9、CEA等检测也广泛应用于肿瘤患者临床检测。这些生物标志物的检测方法有化学发光法、酶标法、酶标电泳法、放射免疫法检测，也有采用酶联免疫吸附法(ELISA)和电化学发光分析法(ECLIA)等技术。但是，目前针对恶性阻塞性黄疸多采用腹部X线平片、胆囊和胆道X线造影、腹部B超和腹部CT检查、内镜逆行胰胆管造影(ERCP)、经皮肝穿刺胆道造影(PTC)、经皮肝穿刺胆道引流(PercutaneousTranshepaticCholangialDrainage，PTCD)、经皮肝穿刺肝胆管引流(PercutaneousTranshepaticBiliaryDrainage，PTBD)等方法诊断和缓解症状，然而针对病因——晚期肝癌、恶性胆道肿瘤、胰腺癌等肿瘤特征的诊断和检测较困难。目前最直接和有效的办法是穿刺活检取肿瘤组织来进行病理学检测，然而，一方面晚期恶性肿瘤患者对组织穿刺活检依从性不好，另一方面对某些恶性肿瘤的确存在转移的风险，这使得穿刺活检在肝胆胰恶性肿瘤中诊断和检测中的广泛应用受到一定影响；此外，血清肿瘤标志物AFP、CEA、CA19-9等在肝癌、恶性胆道肿瘤、胰腺癌等恶性肿瘤诊断的特异性和敏感性都未能满足临床需要；并且，目前，广泛应用于肺癌等肿瘤的ctDNA基因变异检测缺乏在肝癌、恶性胆道肿瘤、胰腺癌等中有效性的验证数据。
技术实现思路
针对现有技术中存在的不足，本专利技术的专利技术人通过研究发现肝、胆、胰恶性肿瘤患者的胆汁DNA存在和肿瘤组织DNA一致的基因变异，并且对应性较好。基于这些发现，本专利技术提出如下技术方案：一方面，本专利技术提供了检测胆汁中生物标志物的试剂在制备用于诊断肝癌、恶性胆道肿瘤或胰腺癌的工具中的应用。进一步，生物标志物是与肝癌、恶性胆道肿瘤或胰腺癌有关的基因突变。进一步，检测胆汁中生物标志物的试剂包括用于从胆汁中获得cfDNA的试剂。进一步，用于从胆汁中获得cfDNA的试剂包括用于cfDNA文库构建的试剂和/或用于捕获文库构建的试剂。进一步，诊断肝癌、恶性胆道肿瘤或胰腺癌包括：从胆汁样本中获得核酸；构建cfDNA文库；构建捕获文库；检测生物标志物。另一方面，本专利技术提供了一种用于诊断肝癌、恶性胆道肿瘤或胰腺癌的工具，包括检测胆汁中生物标志物的试剂。进一步，检测胆汁中生物标志物的试剂包括用于从胆汁中获得cfDNA的试剂。进一步，用于从胆汁中获得cfDNA的试剂包括用于cfDNA文库构建的试剂和/或用于捕获文库构建的试剂。进一步，检测胆汁中生物标志物的试剂包括检测与肝癌、恶性胆道肿瘤或胰腺癌有关的基因突变的试剂。进一步，工具是靶向深度测序平台、生物信息学分析平台或试剂盒。本专利技术提供的方法和工具以胆汁为检测对象，样本容易获得且不会产生任何不良影响，能够有效获得涉及肝癌、恶性胆道肿瘤或胰腺癌等肿瘤的相关信息。附图说明图1显示了BTC患者胆汁cfDNA片段分布。图2A显示了BTC患者胆汁cfDNA整体突变情况。图2B显示了胆囊癌和胆管癌患者的胆汁cfDNA的SNV/插入缺失、扩增和深度缺失的百分比。图2C和图2D显示了胆囊癌患者的胆汁cfDNA的突变情况。图3显示了胆汁cfDNA和肿瘤gDNA之间的突变一致性。图4显示了胆汁cfDNA中肿瘤相关基因的SNV和插入缺失情况。图5显示了胆汁cfDNA中肿瘤相关基因的CNV情况。图6A显示了获取胆汁的PTCD和手术方法对检测敏感性的影响。图6B显示了发病阶段对检测敏感性的影响。图6C显示了发病位点对检测敏感性的影响。具体实施方式为了充分了解本专利技术的目的、特征及功效，通过下述具体实施方式，对本专利技术作详细说明。除非另有指示或定义，否则所有所用术语均具有本领域中的通常含义，该含义将为本领域技术人员所了解。参考例如标准手册，如Sambrook等人，″MolecularCloning：ALaboratoryManual″(第2版)，第1-3卷，ColdSpring25HarborLaboratoryPress(1989)；Lewin，″GenesIV″，OxfordUniversityPress，NewYork，(1990)；及Roitt等人，″Immunology″(第2版)，GowerMedicalPublishing，London，NewYork(1989)，以及本文中引用的一般现有技术；此外，除非另有说明，否则未具体详述的所有方法、步骤、技术及操作均可以且已经以本身已知的方式进行，该方式将为本领域技术人员所了解。亦参考例如标准手册、上述一般现有技术及其中引用的其他参考文献。生物标志物针对目前肝癌、恶性胆道肿瘤或胰腺癌等恶性肿瘤检测方法中存在的不足，以及血清肿瘤标志物AFP、CEA、CA19-9等在肝癌、恶性胆道肿瘤、胰腺癌等恶性肿瘤诊断的特异性和敏感性都未能满足临床需要，本专利技术的专利技术人通过研究发现肝、胆、胰恶性肿瘤患者的胆汁DNA存在和肿瘤组织DNA一致的基因变异，并且对应性较好。在此基础之上，本专利技术的专利技术人提出通过检测胆汁样本中与肝本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测胆汁中生物标志物的试剂在制备用于诊断肝癌、恶性胆道肿瘤或胰腺癌的工具中的应用。

【技术特征摘要】
2018.02.08 CN 20181012591721.检测胆汁中生物标志物的试剂在制备用于诊断肝癌、恶性胆道肿瘤或胰腺癌的工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述生物标志物是与肝癌、恶性胆道肿瘤或胰腺癌有关的基因突变。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测胆汁中生物标志物的试剂包括用于从胆汁中获得cfDNA的试剂。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述用于从胆汁中获得cfDNA的试剂包括用于cfDNA文库构建的试剂和/或用于捕获文库构建的试剂。5.根据权利要求1～4任一项所述的应用，其特征在于，诊断肝癌、恶性胆道肿瘤或胰腺癌包括：从胆汁...

【专利技术属性】
技术研发人员：李福根，张大东，张永杰，沈宁佳，曹鑫恺，周子松，
申请(专利权)人：埃提斯生物技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31