一种制备小菜蛾雄性不育品系的方法及其核酸技术

本发明专利技术公开了制备小菜蛾雄性不育品系的方法及其核酸。本方法包括以下步骤：1)合成sgRNA，所述的sgRNA的模板从5’端到3’端包括以下可操作性元件：T7启动子，Ser2基因靶点和gRNA；2)合成Cas9mRNA，所述的Cas9mRNA的模板从5’端到3’端包括：启动子，Cas9编码序列和SV40终止子；3)将步骤1)所得的sgRNA和步骤2)所述的Cas9mRNA混合后显微注射小菜蛾新鲜卵中，孵化，即得雄性不育的小菜蛾。本发明专利技术利用CRISPR/Cas9技术敲除小菜蛾Ser2基因，提供了小菜蛾雄性不育遗传品系，解决了传统的通过辐射和四环素诱导不育昆虫的方法不能稳定有效遗传给后代的问题。通过对雌性突变体小菜蛾的释放，可用于野外防治小菜蛾虫害，为害虫防治提供新思路。

A Method for Preparing Male Sterile Lines of Plutella xylostella and Their Nucleic Acids

【技术实现步骤摘要】
一种制备小菜蛾雄性不育品系的方法及其核酸
本专利技术属于生物
，涉及一种制备小菜蛾雄性不育品系的方法及其核酸。
技术介绍
小菜蛾是重要的经济作物害虫。小菜蛾(Plutellaxylostella)属鳞翅目(Lepidoptera)菜蛾科(Plutellidae)，全球性分布，严重危害十字花科植物。目前，除了南北极和沙漠等极端气候区未发现小菜蛾外，其余各地都有小菜蛾的踪迹。在全球范围内，每年因小菜蛾危害造成的经济损失和防治费用高达50亿美元(Furlongetal.,2013)。更为严重的是，在小菜蛾防治过程中，其对化学杀虫剂的过度依赖造成了小菜蛾的严重抗药性，这进一步增加了防治难度(Furlongetal.,2013)。因此，发展新的防治方法对控制小菜蛾危害具有积极的意义。昆虫不育技术(SIT)一直是害虫防治的研究及应用的热点，早期美国利用辐射不育技术首次成功地消灭了螺旋锥蝇(Cochliomyiahominivorax)，在日本通过释放通过辐射处理的不育瓜实蝇(Bactroceracucuribitae)使其根绝成功。通过利用四环素调控地中海实蝇(Ceratitiscapit本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备雄性不育的小菜蛾的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)合成sgRNA，所述的sgRNA的模板从5’端到3’端包括以下可操作性元件：T7启动子，Ser2基因靶点和gRNA；2)合成Cas9 mRNA，所述的Cas9 mRNA的模板从5’端到3’端包括：启动子，Cas9编码序列和SV40终止子；3)将步骤1)所得的sgRNA和步骤2)所述的Cas9 mRNA混合后显微注射小菜蛾新鲜卵中，孵化，即得雄性不育的小菜蛾。

【技术特征摘要】
1.一种制备雄性不育的小菜蛾的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)合成sgRNA，所述的sgRNA的模板从5’端到3’端包括以下可操作性元件：T7启动子，Ser2基因靶点和gRNA；2)合成Cas9mRNA，所述的Cas9mRNA的模板从5’端到3’端包括：启动子，Cas9编码序列和SV40终止子；3)将步骤1)所得的sgRNA和步骤2)所述的Cas9mRNA混合后显微注射小菜蛾新鲜卵中，孵化，即得雄性不育的小菜蛾。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的Ser2基因靶点的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的sgRNA的模板的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的Cas9mRNA的模板的核苷酸序列如SEQIDNO...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄勇平，陈希恩，王耀辉，牛长缨，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：上海,31