【技术实现步骤摘要】
一种CRISPR/Cas9基因编辑系统及其应用
本专利技术涉及一种CRISPR/Cas9基因编辑系统及其应用，属于基因工程
以及生物工程
技术介绍
甾体药物属于激素类药物，是在研究哺乳动物内分泌系统时发现的内源性物质，具有极重要的医药价值，在维持生命、调节性功能、机体发育、免疫调节、皮肤疾病治疗及生育控制方面均有重要的作用。这些作用使得甾体药物成为了化药工业中仅次于抗生素的第二大类药物，也使得甾体药物成为了我国药物新资源开发的重点之一，更使得甾体药物及甾体药物中间体成为了我国药物出口的重要品种。但是，由于我国在甾体药物的生产水平上和世界先进国家相比还有一定的差距，我国现有的甾体药物品种仅为国外已经上市的甾体药物的三分之一，且大多为中低档产品，利润较低。因此，急需提升我国甾体药物的生产水平。雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)和雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮(ADD)是重要的甾体药物中间体，可通过结构上的化学修饰合成几乎所有的甾体类药物，在甾体药物的生产中占据重要地位，然而，由于底物投料浓度低、发酵转化周期长以及对甾体微生物代谢机理认知的不足等问...
【技术保护点】
1.一种CRISPR/Cas9基因编辑系统，其特征在于，所述CRISPR/Cas9基因编辑系统包含pML‑Cas9质粒以及pJM‑sgRNA质粒；所述pML‑Cas9质粒包含pMV261表达载体、Cas9基因、Pj23119启动子以及NHEJ修复基因；所述pMV261表达载体上的Hsp60启动子被替换为了Tac启动子；所述NHEJ修复基因包含编码DNA末端结合蛋白mku的基因以及编码DNA连接酶LigD的基因；所述Cas9基因位于pMV261表达载体的Tac启动子的下游以及pMV261表达载体的rrnB终止子上游，由Tac启动子驱动表达；所述Pj23119启动子位于pMV2...
【技术特征摘要】
1.一种CRISPR/Cas9基因编辑系统，其特征在于，所述CRISPR/Cas9基因编辑系统包含pML-Cas9质粒以及pJM-sgRNA质粒；所述pML-Cas9质粒包含pMV261表达载体、Cas9基因、Pj23119启动子以及NHEJ修复基因；所述pMV261表达载体上的Hsp60启动子被替换为了Tac启动子；所述NHEJ修复基因包含编码DNA末端结合蛋白mku的基因以及编码DNA连接酶LigD的基因；所述Cas9基因位于pMV261表达载体的Tac启动子的下游以及pMV261表达载体的rrnB终止子上游，由Tac启动子驱动表达；所述Pj23119启动子位于pMV261表达载体的KanR抗性基因的下游；所述NHEJ修复基因位于Pj23119启动子的下游以及pMV261表达载体的复制起点(ori)的上游，由Pj23119启动子驱动表达；所述pJM-sgRNA质粒依次包含OriM复制子、pMB1复制子、Pj23119启动子、sgRNA序列、rrnB终止子以及aadA抗性基因，命名为pJM-sgRNA质粒；所述sgRNA序列是靶向序列，可特异性靶向靶序列；所述靶序列是指需编辑基因的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的一种CRISPR/Cas9基因编辑系统，其特征在于，所述Cas9基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。3.如权利要求1或2所述的一种CRISPR/Cas9基因编辑系统，其特征在于，编码所述pML-Cas9质粒以及pJM-sgRNA质粒中的Pj23119启动子的基因的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。4.如权利要求1-3任一所述的一种CRISPR/Cas9基因编辑系统，其特征在于，编码所述DNA末端集合蛋白mku的基因的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示。5.如权利要求1-4任一所述的一种CRISPR/Cas9基因编辑系统，其特征在于，编码所述DNA连接酶LigD的基因的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示。6.一种可用于新金色分枝杆菌的基因编辑方法，其特征在于，所述方法为使用权利要求1-5任一所述的一种CRISPR/Cas9基因编辑系统。7.如权利要求6所述的一种可用于新金色分枝杆菌的基因编辑方法，其特征在于，所述方法为先将权利要求1-5任一所述的一种CRISPR/Cas9基...
【专利技术属性】
技术研发人员：饶志明，林春，邵明龙，张显，杨套伟，徐美娟，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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