蓝芩口服液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱和应用技术

本发明专利技术公开了蓝芩口服液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱和用途。本发明专利技术以蓝芩口服液制备得供试品溶液，以溶解有腺苷、表告依春、盐酸黄柏碱、绿原酸、木兰花碱、栀子苷、苯甲酸、盐酸小檗碱、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的溶液为对照品溶液，通过高效液相色谱仪测定液相色谱；将得到的液相色谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析，经多点校正，数据匹配，分析得到蓝芩口服液指纹图谱。本发明专利技术的蓝芩口服液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱能较全面的反映蓝芩口服液的质量信息，保证产品质量均一稳定。

Establishment and Application of Fingerprint of Lanqin Oral Liquid

【技术实现步骤摘要】
蓝芩口服液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱和应用
本专利技术涉及药物分析领域，具体涉及一种蓝芩口服液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱和应用。
技术介绍
蓝芩口服液是扬子江药业集团根据临床验方自主开发而成的纯中药制剂，由板蓝根、黄芩、黄柏、栀子、胖大海五味中药组成，经药理药效研究和临床试验证明具有显著的解热、镇痛、抗炎、抗菌、抗病毒五效合一的作用，主要用于急性咽炎，肺胃实热证所致的咽痛、咽干、咽部灼热等症，对上呼吸道感染等有明显的抗病毒、抗菌消炎作用，尤其在退热、消除咽痛、咳嗽等症状方面，疗效确切。蓝芩口服液因其疗效广，不良反应少，而且使用人群较广，越来越受到社会的重视，发展前景十分广大。药品的质量是保证临床用药安全有效的前提，目前常用来评价蓝芩口服液制剂质量的方法是对栀子苷含量进行控制，但这种方法不能从整体上反映中医用药的整体疗效。要控制中成药的质量，需要对物质群整体予以控制。
技术实现思路
以下是对本文详细描述的主题的概述。本概述并非是为了限制权利要求的保护范围。本专利技术的目的是提供一种蓝芩口服液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱和应用，通过该方法建立蓝芩口服液及其关键工艺中间体包括浓缩工艺中间体I、收膏工艺中间体II、初配工艺中间体III、精配工艺中间体IV的指纹图谱，并可以对蓝芩口服液及其关键工艺中间体中多个药材的多个药效成分进行定性定量分析，根据不同工艺过程中含量的变化规律，对制剂不同工艺环节的质量控制，对于全过程质量控制体系的建立提供了一定的理论依据和支持，能较全面的反映蓝芩口服液的质量信息，保证产品质量均一稳定。在本专利技术的实施方案中，本专利技术提供了一种蓝芩口服液指纹图谱的建立方法，所述建立方法包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：以蓝芩口服液制备得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：以溶解有腺苷对照品、表告依春对照品、盐酸黄柏碱对照品、绿原酸对照品、木兰花碱对照品、栀子苷对照品、苯甲酸对照品、盐酸小檗碱对照品、黄芩苷对照品、汉黄芩苷对照品、黄芩素对照品和汉黄芩素对照品的溶液为对照品溶液；(3)采用HPLC分别测定步骤(1)的供试品溶液和步骤(2)的对照品溶液，并分别得到所述供试品溶液和所述对照品溶液的液相色谱；(4)将步骤(3)得到的液相色谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析，得到蓝芩口服液的指纹图谱。在本专利技术的实施方案中，步骤(1)中所述蓝芩口服液可以用蓝芩口服液关键工艺中间体代替；所述蓝芩口服液关键工艺中间体包括浓缩工艺中间体I、收膏工艺中间体II、初配工艺中间体III、精配工艺中间体IV；而且，所述蓝芩口服液及其关键工艺中间体样品来自生产的不同批次的产品。蓝芩口服液的制备工艺为：取板蓝根300.0g，黄芩240.0g，栀子300.0g，黄柏120.0g，胖大海100.0g，以上五味，加水煎煮三次，第一次2小时，第二次、第三次各1小时。合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10-1.12(70℃)。加乙醇使含醇量达60％左右，静置12小时，滤过。10℃以下静置24小时，滤过，加灌装，灭菌，即得。其中“滤液浓缩至相对密度为1.10-1.12(70℃)”为浓缩工艺中间体；“滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15-1.20(60℃)”为收膏工艺中间体II、“另取蔗糖300g，制成糖浆，与上述药液合并，加热煮沸15分钟，加苯甲酸钠3g，”为初配工艺中间体III；“0.3％的聚山梨酯80，加水至1000ml，混匀”为精配工艺中间体IV。在本专利技术的蓝芩口服液指纹图谱的建立方法的实施方案中，其中，所述步骤(1)的供试品溶液的制备包括：精密吸取蓝芩口服液100～300μl于10mL离心管中，加入4～8mL的体积分数为50％-100％的甲醇水溶液进行稀释，混匀后过0.45μm微孔滤膜。作为优选方案，所述步骤(1)供试品溶液的制备包括：精密吸取蓝芩口服液200μl于10mL离心管中，加入4.8mL的甲醇进行稀释，混匀后过0.45μm微孔滤膜。在本专利技术的蓝芩口服液指纹图谱的建立方法的实施方案中，其中，所述步骤(2)的对照品溶液的制备包括：精密称取腺苷对照品、表告依春对照品、盐酸黄柏碱对照品、绿原酸对照品、木兰花碱对照品、栀子苷对照品、苯甲酸对照品、盐酸小檗碱对照品、黄芩苷对照品、汉黄芩苷对照品、黄芩素对照品和汉黄芩素对照品，加入体积分数为70％-100％的甲醇水溶液制成每1mL含有5～8μg腺苷、2～6μg表告依春、5～8μg盐酸黄柏碱、30～50μg绿原酸、2～5μg木兰花碱、200～300μg栀子苷、100～200μg苯甲酸、2～5μg盐酸小檗碱、150～250μg黄芩苷、50～100μg汉黄芩苷、8～15μg黄芩素、8～15μg汉黄芩素的对照品溶液。作为优选方案，所述步骤(2)对照品溶液的制备包括：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加体积分数为70％甲醇水溶液溶解，配制成含量为208μg·mL-1的对照品溶液，分别取腺苷对照品、表告依春对照品、盐酸黄柏碱对照品、绿原酸对照品、木兰花碱对照品、栀子苷对照品、苯甲酸对照品、盐酸小檗碱对照品、汉黄芩苷对照品、黄芩素对照品和汉黄芩素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，配制成含量分别为7.52μg·mL-1、3.84μg·mL-1、6.44μg·mL-1、32.96μg·mL-1、2.52μg·mL-1、284.00μg·mL-1、162.00μg·mL-1、4.56μg·mL-1、98.00μg·mL-1、10.60μg·mL-1和9.76μg·mL-1的对照品溶液。在本专利技术的蓝芩口服液指纹图谱的建立方法的实施方案中，其中，所述步骤(3)包括设置HPLC色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱温25-35℃，流速为0.8-1.2mL/min，检测波长250-320nm，并开启DAD检测；以乙腈为流动相A，以体积分数为0.06-0.2％磷酸水溶液为流动相B，在体积比为5～95∶100～0的范围内梯度洗脱；分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液5～20μL，注入高效液相色谱仪，测定，分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱。作为优选方案，所述步骤(3)包括设置HPLC色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以Waters2695ACQUITYHPLCTM(4.6mm×250mm，5.0μm)为色谱柱，柱温30℃，流速为1.0mL/min，检测波长为230nm，并开启DAD检测；以乙腈为流动相A，以体积分数为0.2％磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流动相A、B的比例变化为0～12min，A∶B为5％∶95％→11％∶89％；12～24min，A∶B为11％∶89％→11％∶89％；24～38min，A∶B为11％∶89％→23％∶77％；38～50min，A∶B为23％∶77％→28％∶72％；50～55min，A∶B为28％∶72％→31％∶69％；55～70min，A∶B为31％∶69％→100％∶0％；分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，测定，分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱。在本专利技术的蓝芩口服液指纹图谱的建立方法的实施方案中，其中，所述步骤(4)采用的中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版，所述步骤(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蓝芩口服液指纹图谱的建立方法，所述建立方法包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：以蓝芩口服液制备得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：以溶解有腺苷对照品、表告依春对照品、盐酸黄柏碱对照品、绿原酸对照品、木兰花碱对照品、栀子苷对照品、苯甲酸对照品、盐酸小檗碱对照品、黄芩苷对照品、汉黄芩苷对照品、黄芩素对照品和汉黄芩素对照品的溶液为对照品溶液；(3)采用HPLC分别测定步骤(1)的供试品溶液和步骤(2)的对照品溶液，并分别得到所述供试品溶液和所述对照品溶液的液相色谱；(4)将步骤(3)得到的液相色谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析，得到蓝芩口服液的指纹图谱。

【技术特征摘要】
1.一种蓝芩口服液指纹图谱的建立方法，所述建立方法包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：以蓝芩口服液制备得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：以溶解有腺苷对照品、表告依春对照品、盐酸黄柏碱对照品、绿原酸对照品、木兰花碱对照品、栀子苷对照品、苯甲酸对照品、盐酸小檗碱对照品、黄芩苷对照品、汉黄芩苷对照品、黄芩素对照品和汉黄芩素对照品的溶液为对照品溶液；(3)采用HPLC分别测定步骤(1)的供试品溶液和步骤(2)的对照品溶液，并分别得到所述供试品溶液和所述对照品溶液的液相色谱；(4)将步骤(3)得到的液相色谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析，得到蓝芩口服液的指纹图谱。2.根据权利要求1所述的蓝芩口服液指纹图谱的建立方法，其中，所述步骤(1)的供试品溶液的制备包括：精密吸取蓝芩口服液100～300μl于10mL离心管中，加入4～8mL的体积分数为50％-100％的甲醇水溶液进行稀释，混匀后过0.45μm微孔滤膜；或者，所述步骤(1)的供试品溶液的制备包括：精密吸取蓝芩口服液200μl于10mL离心管中，加入4.8mL的甲醇进行稀释，混匀后过0.45μm微孔滤膜。3.根据权利要求1所述的蓝芩口服液指纹图谱的建立方法，其中，所述步骤(2)的对照品溶液的制备包括：精密称取腺苷对照品、表告依春对照品、盐酸黄柏碱对照品、绿原酸对照品、木兰花碱对照品、栀子苷对照品、苯甲酸对照品、盐酸小檗碱对照品、黄芩苷对照品、汉黄芩苷对照品、黄芩素对照品和汉黄芩素对照品，加入体积分数为70％-100％的甲醇水溶液制成每1mL含有5～8μg腺苷、2～6μg表告依春、5～8μg盐酸黄柏碱、30～50μg绿原酸、2～5μg木兰花碱、200～300μg栀子苷、100～200μg苯甲酸、2～5μg盐酸小檗碱、150～250μg黄芩苷、50～100μg汉黄芩苷、8～15μg黄芩素、8～15μg汉黄芩素的对照品溶液；或者，所述步骤(2)对照品溶液的制备包括：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加体积分数为70％甲醇水溶液溶解，配制成含量为208μg·mL-1的对照品溶液，分别取腺苷对照品、表告依春对照品、盐酸黄柏碱对照品、绿原酸对照品、木兰花碱对照品、栀子苷对照品、苯甲酸对照品、盐酸小檗碱对照品、汉黄芩苷对照品、黄芩素对照品、汉黄芩素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，配制成含量分别为7.52μg·mL-1、3.84μg·mL-1、6.44μg·mL-1、32.96μg·mL-1、2.52μg·mL-1、284.00μg·mL-1、162.00μg·mL-1、4.56μg·mL-1、98.00μg·mL-1、10.60μg·mL-1、9.76μg·mL-1的对照品溶液。4.根据权利要求1所述的蓝芩口服液指纹图谱的建立方法，其中，所述步骤(3)包括设置HPLC色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱温25-35℃，流速为0.8-1.2mL/min，检测波长250-320nm，并开启DAD检测；以乙腈为流动相A，以体积分数为0.06-0.2％磷酸水溶液为流动相B，在体积比为5～95:100～0的范围内梯度洗脱；分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液5～20μL，注入高效液相色谱仪，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈钟，任晓亮，姚仲青，曹雪晓，游慧，邱峰，
申请(专利权)人：扬子江药业集团有限公司，天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32