一种分散固相萃取材料及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开一种分散固相萃取材料及其制备方法与应用，属于食用油中黄曲霉毒素检测技术领域，本分散固相萃取材料的制备方法，包括以下步骤：称取腐殖酸，超声波水洗12‑18min，水洗后离心取固态沉淀物，分散于丙酮中，加热蒸发，至丙酮完全蒸发后，得残渣；取残渣，置于索氏提取器中，并加入180mL清洗液，加热回流清洗直至回流液澄清无色后，停止加热；取出清洗处理后的材料，对材料在100℃下烘干1.5‑2.5h，冷却0.5‑1h，再经120目过筛，取筛下物质，得到分散固相萃取材料。本发明专利技术的制备方法适用于目前在售的多数腐殖酸，本制备方法工艺简单，利于控制，经过清洗制备后的分散固相萃取材料性状稳定。

A Dispersed Solid Phase Extraction Material and Its Preparation Method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种分散固相萃取材料及其制备方法与应用
本专利技术属于食用油中黄曲霉毒素检测
，具体涉及一种分散固相萃取材料及其制备方法与应用。
技术介绍
我国既是食用油生产大国也是世界上最大的食用油消费国，我国人均食用油年消费量随着生活水平的不断提高而逐年增长。因此，“食用油安全”是“食品安全”的重要组成部分，不仅关系国民体质的健康，而且直接影响国民经济的发展。黄曲霉毒素(Aflatoxins,AFs)是食用油的一种主要污染物，其为黄曲霉菌(Aspergillusflavus)和寄生曲霉菌(Aspergillusparasiticus)的次生代谢产物。到目前为止，一共有18种AFs被报道，其中AFB1、AFB2、AFG1和AFG2是最常见的四种。AFs具有高毒性、高致癌性、高致突变性和高致畸性的特点，对人类健康危害极为突出。其中，AFB1是AFs中毒性最大的，其毒性远高于氰化物、砷化物和有机农药。并且，AFB1也是目前报道的最强天然致癌物质。在温暖潮湿的地区，食品在生长、收割、储藏以及加工过程中都可能受潮长霉，因此有很高的几率遭受AFs的污染。易受AFs污染的食品主要包括：花生、玉米、大豆等油料作物以及食用油、果肉干、调味品等加工食品，摄入受AFs污染的食用油不但危害国民健康还会造成重大经济损失。因此，准确测定食用油中AFs的含量具有十分重大的意义。目前，食用油中AFs的检测方法主要为液相色谱质谱联用分析法(LC-MS)和液相色谱荧光分析法(LC-FLD)。食用油是基质十分复杂的样品，其95％以上的成分是甘油三酯类化合物，还包含1％-5％的脂肪酸、维生素、脂溶性色素等其它类酯物。然而，受污染的食用油中AFs一般处于ng/kg的痕量水平，且食用油中大量的甘油三酯类化合物会对检测造成严重的干扰。所以对食用油中的痕量黄曲霉毒素进行检测之前，必须进行样品前处理，在提取AFs的同时消除油脂基质的干扰。样品前处理方法是检测食用油中AFs的核心，决定整个检测方法的效率和成本。目前在食用油AFs的检测中普遍使用免疫亲和柱净化法(IAC)或多功能净化柱法(MFC)处理样品。然而，这些样品前处理方法在大批量检测食用油中的AFs时会面临以下几个问题：1、液–液萃取会消耗大量的有机试剂，并且对方法的回收率影响较大；2、提取与纯化步骤分开进行使操作过程繁琐并耗时耗力；3、样品前处理中使用的IAC柱和MFC柱价格高昂。基于此，目前食品安全检测行业在大批量地检测食用油中AFs时，面临着样品前处理方法操作过于繁琐、检测成本过高且稳定性较差等问题。为评估、监察和确保食用油安全，每年全国各地会对当地食用油中的AFs进行大批量检测，采用上述样品前处理方法无疑将消耗大量的时间和人力，同时耗费巨大的经费。如果能建立一种可靠的检测方法，使操作简便并能显著降低检测成本，就可以在很大程度上避免这种不必要的耗费，节约大量社会资源。因此，为解决食用油检测行业所面临的问题，迫切需要开发一种简单、廉价、可靠的新型检测方法应用于大批量食用油中痕量AFs的检测。
技术实现思路
本专利技术为了解决上述技术问题提供一种分散固相萃取材料及其制备方法与应用，应用于各种食用油AFs的检测领域中，具有处理简便、成本低、基质干扰小和样品回收率高等效果。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种分散固相萃取材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、称取腐殖酸，超声波水洗12-18min，水洗后离心取固态沉淀物，溶解于丙酮中，加热蒸发，至丙酮完全蒸发后，得残渣；S2、取步骤S1得到的残渣，置于索氏提取器中，并加入180mL清洗液，加热回流清洗至回流液澄清无色后，停止加热；S3、取出步骤S2中清洗处理后的材料，对材料在100℃下烘干1.5-2.5h，冷却0.5-1h，再经120目过筛，取筛下物质，得到分散固相萃取材料。本专利技术的制备方法的有益效果是：本分散固相萃取材料的制备方法适用于多种国内外商品化腐殖酸，本制备方法工艺简单，利于控制，经过清洗制备后的腐殖酸性状稳定，能够应用到多种食用油中对黄曲霉毒素进行萃取净化，同时能够对黄曲霉毒素进行检测，保障食用油的品质。在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进。进一步，所述步骤S1中，经超声波水洗后静置6-10h，除去上清液，并重复循环超声波水洗和静置操作10次，再离心取固态沉淀物。采用上述进一步方案的有益效果是：静置后能够充分保留材料中的有效成分，另外重复操作10次有利于将腐殖酸中的黄腐酸和其它一些水溶性杂物清除。进一步，所述步骤S2中对索氏提取器加热包括将索氏提取器置于水浴中加热，水浴温度为70-90℃，加热回流时间为8-30h。采用上述进一步方案的有益效果是：通过将清洗液蒸发、回流与腐殖酸多次接触进行清洗，清洗效果好。进一步，所述步骤S2中将加热回流20h后的残渣取出，自然风干，研磨，置于另一索氏提取器中，再次加入180mL清洗液，再次加热提取8-12h，至回流液澄清无色后，停止加热。采用上述进一步方案的有益效果是：对一些棕腐酸、醇溶性杂质较多的腐殖酸，能够提高清洗效率。进一步，所述步骤S2中加热回流清洗所用的清洗液为丙酮、甲醇、乙腈和水，其中，所述丙酮、甲醇、乙腈和水的体积比为6-8:4-6:6-8:1-2。采用上述进一步方案的有益效果是：通过清洗液能够将腐殖酸中的棕腐酸清除，除去无效成分，避免在后续检测时产生干扰。本专利技术还提供一种采用上述的制备方法制得的分散固相萃取材料。本专利技术的分散固相萃取材料的有益效果是：能够应用到食用油中对黄曲霉毒素进行萃取净化，同时能够对黄曲霉毒素进行检测，保障食用油的品质。本专利技术还提供一种采用上述的分散固相萃取材料在检测食用油黄曲霉毒素中的应用。本专利技术还提供一种检测食用油中黄曲霉毒素的方法，包括样品前处理，称取1g食用油试样和权利要求6所述的50mg分散固相萃取材料，混合，加入5mL正己烷振荡离心，除去上清液；再加入4mL洗脱液振荡离心，取上清液，干燥，得到待检测样品，将待检测样品溶解后进行检测。本专利技术的样品前处理方法有益效果是：操作简便，相较于经典的免疫亲和柱净化法，可直接处理油样而无需事先进行液液萃取操作；成本远远低于经典方法，只有其1/20的水平；能够同时处理较大量的样品，具有省时省力的优点；另外适用于净化各种食用油基质，基质干扰小，并且都具有较高的AFs回收率，在食用油AFs分析领域具有广阔的应用前景。进一步，所述加入正己烷振荡离心，除去上清液的操作具体包括两次，第一次为加入5mL正己烷，振荡1.5-2min，再以9000-12000r/min转速离心10-20min，除去上清液；第二次为加入5mL正己烷，振荡20-40s，再以9000-12000r/min转速离心5min，除去上清液；所述加入洗脱液振荡离心的操作中振荡时间为1.5-2min，再以9000-12000r/min转速离心5min。采用上述进一步方案的有益效果是：通过两次正己烷清洗，更利于充分将油样中杂质去除，避免油基质对检测的干扰。进一步，所述洗脱液为乙腈和水，所述乙腈和水的体积比为9：1。采用上述进一步方案的有益效果是：通过洗脱液将AFs从材料上洗脱下来，实现食用油中AFs的萃取，供后续检测。附图说明图1为本专利技术分散固相萃取本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分散固相萃取材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、称取腐殖酸，超声波水洗12‑18min，水洗后离心取固态沉淀物，分散于丙酮中，加热蒸发，至丙酮完全蒸发后，得残渣；S2、取步骤S1得到的残渣，置于索氏提取器中，并加入180mL清洗液，加热回流清洗至回流液澄清无色后，停止加热；S3、取出步骤S2中清洗处理后的材料，对材料在100℃下烘干1.5‑2.5h，冷却0.5‑1h，再经120目过筛，取筛下物质，得到分散固相萃取材料。

【技术特征摘要】
1.一种分散固相萃取材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、称取腐殖酸，超声波水洗12-18min，水洗后离心取固态沉淀物，分散于丙酮中，加热蒸发，至丙酮完全蒸发后，得残渣；S2、取步骤S1得到的残渣，置于索氏提取器中，并加入180mL清洗液，加热回流清洗至回流液澄清无色后，停止加热；S3、取出步骤S2中清洗处理后的材料，对材料在100℃下烘干1.5-2.5h，冷却0.5-1h，再经120目过筛，取筛下物质，得到分散固相萃取材料。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，经超声波水洗后静置6-10h，除去上清液，并重复循环超声波水洗和静置操作10次，再离心取固态沉淀物。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中对索氏提取器加热包括将索氏提取器置于水浴中加热，水浴温度为70-90℃，加热回流时间为8-30h。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中将加热回流20h后的残渣取出，自然风干，研磨，置于另一索氏提取器中，再次加入180mL清洗液，再次加热提取8-12h，至回流液澄清无色后，停止加热。5.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中加热回流清洗所用的清洗液为丙酮、甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐阳，廖艳华，刘平，雷宁生，梁川，
申请(专利权)人：广西壮族自治区疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：广西,45