本发明专利技术公开了细胞穿透肽、包含该肽作为活性成分的缀合物、及包含该缀合物的组合物及其应用。具体而言，本发明专利技术公开了具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的细胞穿透载体肽、该细胞穿透载体肽与活性成分的缀合物、包含该缀合物的组合物、该细胞穿透载体肽在制备组合物中的应用，还涉及编码该肽的多核苷酸、包含该多核苷酸的载体、和转化细胞。
Cell penetrating peptide, conjugate containing the peptide, and combination containing the conjugate
【技术实现步骤摘要】
细胞穿透肽、包含该肽的缀合物、及包含该缀合物的组合物本申请是分案申请，其原申请的国际申请号为PCT/KR2013/008438，国际申请日为2013年09月17日，中国国家申请号为201380057740.2，进入中国国家阶段的进入日为2015年05月05日，专利技术名称为“细胞穿透肽、包含该肽的缀合物、及包含该缀合物的组合物”。
本专利技术涉及源自人端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase；hTERT)的细胞穿透肽、细胞穿透肽及活性成分的缀合物、以及包含该缀合物的组合物。
技术介绍
尽管低分子量物质、核酸、蛋白质、纳米粒子等在分子水平上具有作为治疗物质的极大可能性潜力，但低分子量物质、核酸、蛋白质、粒子等的使用其应用由于不能无能力穿透组织及细胞膜而受限。输送此类物质至细胞内的的系统的开发展已成为过去二十年来活跃的研究领域。细胞内部运输物质已成为分子处理治疗方法中的的话题。低分子量物质、核酸或纳米粒子通过系通过多种若干试剂、电穿孔或热休克而运送到运输到细胞内。然而，难以找到一种适当方法在不破坏蛋白质的活性及完整性的情况下将蛋白质输送到在细胞内部输送蛋白质。在20世纪80年代，在对人类人免疫缺乏病毒(humanimmunodeficiencyvirus；HIV)的细胞穿透能力进行的研究中，已发现，由特定的11种个氨基酸构组成的的HIV-TAT蛋白质在于在向细胞内部的运输的过程中起重要作用。因此，在20世纪90年代，探索运输到细胞内蛋白质将蛋白质运输到细胞内的恰当方法的研究成为重点研究领域。已知端粒是染色体末端发现的遗传物质重复序列，端粒防止染色体损伤或防止合并至其它染色体上。端粒的长度在每次细胞分裂时缩短，且在一定次数的细胞分裂的后，端粒长度极度缩短至细胞停止分裂且死亡的程度。在另一方面，已知端粒延伸可延长细胞的寿命。作为实例，癌细胞分泌称为端粒酶的酶，该酶防止端粒缩短，因此导致癌细胞增殖。本专利技术的目标在于提供一种新型肽。本专利技术的另一目标在于提供编码该新型肽的多核苷酸。本专利技术的另一目标在于提供细胞穿透肽。本专利技术的另一目标在于提供作为细胞内活性成分的载体的有用的肽。本专利技术的另一目标在于提供活性成分与细胞穿透肽缀合成的缀合物。本专利技术的另一目标在于提供包含活性成分与细胞穿透肽的缀合物的组合物。本专利技术的另一目标在于提供包含活性成分与细胞穿透肽的缀合物的药物组合物。本专利技术的另一目标在于提供包含活性成分与细胞穿透肽的缀合物的功能性化妆组合物。本专利技术的另一目标在于提供包含活性成分与细胞穿透肽的缀合物的健康食品组合物。本专利技术的另一目标在于提供包含活性成分与细胞穿透肽的缀合物的对比造影剂。
技术实现思路
根据本专利技术的一个实施方式的缀合物可为细胞穿透载体肽与活性成分的缀合物，其中所述载体肽为包含SEQIDNO:1至SEQIDNO:156中至少一个氨基酸序列的肽、与上述序列具有至少80％同源性的肽、或上述肽的片段，且其中具有至少80％同源性的所述肽和所述片段保留SEQIDNO:1至SEQIDNO:156中的任一氨基酸序列的细胞穿透能力。根据本专利技术中的缀合物的另一实施方式，所述片段可由3个或更多氨基酸构成。根据本专利技术中的缀合物的另一实施方式，所述载体肽可由30个或更少氨基酸构成。根据本专利技术中的缀合物的另一实施方式，上述载体肽可为由SEQIDNO:1至SEQIDNO:156中任一氨基酸序列构成的肽。根据本专利技术中的缀合物的另一实施方式，其包含选自以下组的任一氨基酸序列，所述组由SEQIDNO:9、SEQIDNO:37、SEQIDNO:43、SEQIDNO:48、SEQIDNO:52、SEQIDNO:55、SEQIDNO:90、SEQIDNO:92和SEQIDNO:121组成。根据本专利技术的一个实施方式的对比造影剂可包含上述的任一种缀合物。根据本专利技术的一个实施方式的对比造影剂可用于细胞对比造影。根据本专利技术的对比造影剂的另一实施方式，所述细胞可为干细胞。根据本专利技术的一个实施方式的组合物可包含上述的任一种缀合物。根据本专利技术的组合物的另一实施方式，所述活性成分可用于治疗或预防疾病，且所述组合物可为药物组合物。根据本专利技术的组合物的另一实施方式，所述活性成分可为用于功能性化妆品的活性成分，且所述组合物可为化妆品组合物。根据本专利技术的组合物的另一实施方式，所述活性成分可为用于功能健康食品的活性成分，且所述组合物可为健康食品组合物。根据本专利技术方法的一个实施方式，所述方法可为用于输送活性成分至细胞内的方法，其中该方法包括对有需要的对象施用上述任何缀合物，且其中载体肽为将活性成分输送至细胞内的细胞穿透肽，且其中具有至少80％同源性的所述肽及上述肽的片段保留由SEQIDNO:1至SEQIDNO:156中任一氨基酸序列构成的肽的细胞穿透能力。根据本专利技术的方法的另一实施方式，所述方法可用于将所述活性成分局部地输送至细胞内部的粒线体内。根据本专利技术细胞穿透肽的另一实施方式，上述载体肽可以为具有SEQIDNO:1至SEQIDNO:156中任意一个或多个氨基酸序列的肽。根据本专利技术的多核苷酸可编码上述细胞穿透肽。根据本专利技术的载体可包含上述多核苷酸。根据本专利技术的转化细胞可包含上述载体。产业利用性难以运输到细胞内的活性成分可通过使用本专利技术所公开的肽或肽及活性成分的缀合物而易于运输到细胞内。这意味着可增加活性成分的功效且因此可减少活性成分的剂量。因此，可最小化由于药物施用造成的副作用且可增加治疗的有效性。特别地，当将药物局部地输送至粒线体内时，可改善粒线体相关的疾病或病症，且可增加疾病预防及治疗疾病的有效性。在化妆品的情况中，通过少量活性成分可产生显著效果。通过使肽与对比造影物质缀合，可将该肽用作对比造影物质以监测细胞移植的过程或在细胞治疗中的移植细胞。特别地，该肽可实际上用作用于注入身体内的干细胞的对比造影物质。附图说明图1至图23描绘通过FACS分析的在FITC与SEQIDNo:1至SEQIDNo:156的肽Pep1融合后治疗的HeLa细胞中细胞摄入的细胞数量。对照细胞仅以FITC处理。图24至图43描绘通过FACS分析的在FITC与SEQIDNO:1至SEQIDNO:156的肽融合后治疗的Huh7细胞中细胞摄入的细胞数量。对照细胞仅以FITC处理。图44至图58描绘通过FACS分析的在FITC与SEQIDNO:1至SEQIDNO:156的肽融合后治疗的人T淋巴球细胞系(Jurkat细胞)中细胞摄入的细胞数量。对照细胞仅以FITC处理。图59至图72描绘通过FACS(流式细胞术)分析的在FITC与SEQIDNo:1至SEQIDNo:156的肽融合后治疗的HeLa细胞的毒性及细胞活性的结果。对照细胞仅以FITC处理。具体实施方式尽管蛋白质、核酸、肽或病毒等具有作为治疗物质的极大可能性潜力，但蛋白质、核酸、肽或病毒等的使用由于无能力不能穿透组织及细胞膜而受限。即使分子大小很小，但该等这种分子由于分子的结构或特性而无法穿透脂质双层。因此，试图经由通过使用电穿孔、热休克等将蛋白质、核酸、肽或病毒运输到细胞内；难以在既不破坏细胞膜又保持上述分子的活性状态的情况下转移彼等所述蛋白质、核酸、肽或病毒。已进行的许多研究显示源自人免疫缺乏病毒本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种细胞穿透载体肽与活性成分的缀合物，其中，所述细胞穿透载体肽由SEQ ID NO:8的氨基酸序列构成。
【技术特征摘要】
2012.09.19 KR 10-2012-0104173;2012.09.19 KR 10-2011.一种细胞穿透载体肽与活性成分的缀合物，其中，所述细胞穿透载体肽由SEQIDNO:8的氨基酸序列构成。2.如权利要求1所述的缀合物，其中，所述活性成分为选自蛋白质、核酸、肽、脂质、二醇-脂质、矿物质、糖、纳米粒子、生物制品、对比造影剂和药物中的至少一种。3.如权利要求1所述的缀合物，其中，所述活性成分为化合物。4.如权利要求1所述的缀合物，其中，所述载体肽通过共价键与所述活性成分直接缀合或通过共价键与所述活性成分经接头间接缀合。5.如权利要求1所述的缀合物，其中，所述载体肽及所述活性成分通过非共价键缀合。6.如权利要求2所述的缀合物，其中，所述活性成分为蛋白质或肽。7.如权利要求2所述的缀合物，其中，所述活性成分为细胞因子、抗体、抗体片段、治疗酶、可溶受体或配体。8.如权利要求2所述的缀合物，其中，所述对比造影剂选自由不透射线对比造影剂、顺磁对比造影剂、超顺磁对比造影剂及CT对比造影剂组成的组。9.如权利要求2所述的缀合物，其中，所述对...
【专利技术属性】
技术研发人员：金商在，
申请(专利权)人：珍白斯凯尔有限公司，金商在，
类型：发明
国别省市：韩国,KR
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