胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，属于试剂盒技术领域。解决了现有技术中胱抑素C的检测方法样本需求量大、存在稀有重金属污染风险的技术问题。本发明专利技术的试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；R1试剂包含质量百分浓度为0.02％～1％的链霉亲和素磁颗粒和缓冲液Ⅰ；R2试剂包括浓度为0.1～1.0μg/mL的化学发光标记物标记的胱抑素C抗体和缓冲液Ⅱ；R3试剂包括浓度为0.7～2.0μg/ml的偶联标记物标记的胱抑素C抗体和缓冲液Ⅲ。该试剂盒具有灵敏度高、准确定量、无放射性风险及样本需求量少等优点。

Cystatin C chemiluminescence immunoassay kit and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
本专利技术属于试剂盒
，具体涉及一种胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
胱抑素C(CystatinC，CysC)是半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族的成员之一，胱氨酸蛋白酶是一种淀粉生成酶，主要存在于小动脉壁，产生淀粉样物质，而CysC是半胱氨酸蛋白酶的细胞外抑制剂，在CysC中含量最为丰富，并对细胞内蛋白的转换起作用。CysC由机体有核细胞产生，仅经肾小球滤过而被清除，是一种反映肾小球滤过率(GFR)变化的理想的同源性标志物。自从1985年以来，CysC已被视为检测肾功能的良好标志物，其不受许多生理病理因素的影响，它能敏感反映早期肾功能损害，可用于肾脏透析、糖尿病肾病、肾移植和肿瘤患者肾功能的监控。目前测定胱抑素C的方法有乳胶增强免疫散射浊度法(PENIA)、胶体金等方法。PENIA能在较低的背景下检测到轻度的升高，且较少受干扰因素的影响。但是，实际上由于样本存在非特异性背景散射而需要把标本先稀释，标本体积为80微升，这对儿科及特殊患者即仅有少量标本的患者不太适用，另外存在稀有重金属污染的风险。有鉴于此，有必要提供一种操作简单、精准定量、无污染、灵敏度高、样本需求量少的胱抑素C检测方法。
技术实现思路
本专利技术为解决现有技术中胱抑素C的检测方法样本需求量大、存在稀有重金属污染风险的技术问题，提供一种胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。本专利技术解决上述技术问题采取的技术方案如下：本专利技术提供的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；所述R1试剂包含链霉亲和素磁颗粒和缓冲液Ⅰ，R1试剂中链霉亲和素磁颗粒的质量百分浓度为0.02％～1％；所述R2试剂包括化学发光标记物标记的胱抑素C抗体和缓冲液Ⅱ，R2试剂中化学发光标记物标记的胱抑素C抗体的浓度为0.1～1.0μg/mL；所述R3试剂包括偶联标记物标记的胱抑素C抗体和缓冲液Ⅲ，R3试剂中偶联标记物标记的胱抑素C抗体的浓度为0.7～2.0μg/ml。优选的是，所述缓冲液Ⅰ、缓冲液Ⅱ和缓冲液Ⅲ均为含有50～200mM的缓冲盐、0.05％～0.1％的表面活性剂和0.01％～0.1％的防腐剂，pH为6.5～7.2的缓冲液；更优选的是，所述表面活性剂为吐温-20，防腐剂为NaN3或ProClin300，缓冲盐为tris-HCl、PB、MES或HEPES；更优选的是，所述缓冲液Ⅰ、缓冲液Ⅱ和缓冲液Ⅲ均还含有0.05％～0.1％的稳定剂，所述稳定剂为牛血清白蛋白。优选的是，所述链霉亲和素磁颗粒的粒径为0.05～3μm。优选的是，所述化学发光标记物标记的胱抑素C抗体中，胱抑素C抗体与化学发光标记物的标记摩尔比为1:(3～20)；化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺或三联吡啶钌。优选的是，所述偶联标记物标记的胱抑素C抗体中，胱抑素C抗体与偶联标记物的标记摩尔比为1:(5～20)；偶联标记物为生物素或抗原。优选的是，该试剂盒中还包括校准品；所述校准品包括浓度分别为0.00mg/L、0.25mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、4.00mg/L、6.50mg/L和10.00mg/L的胱抑素C蛋白溶液。优选的是，该试剂盒中还包括化学发光预激发液A和化学发光激发液B；所述化学发光激发液A为硝酸溶液和过氧化氢溶液；所述化学发光激发液B为氢氧化钠溶液。本专利技术还提供上述胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：步骤一、制备R1试剂将链霉亲和素磁颗粒溶液加入TBST溶液中，充分混匀后，放置于磁分离器上，直至上清无混浊，弃上清，留取磁颗粒，使用缓冲液Ⅰ清洗磁颗粒后，再用缓冲液Ⅰ配成磁颗粒质量百分浓度为0.02％～1％的固相试剂，即为R1试剂；步骤二、制备R2试剂先将胱抑素C抗体放入离心管中，保证胱抑素C抗体位于离心管底部位置后加入碳酸缓冲液，充分混匀，混匀后加入化学发光标记物的DMF溶液，用离心机室温条件下离心0.5～1min；然后将离心管用封口膜密封后放入避光暗盒中，将暗盒放入气浴恒温振荡器中混匀，取出，加入赖氨酸封闭液，再放入气浴恒温振荡器中混匀并封闭1～2h；再将封闭好的胱抑素C抗体上葡聚糖凝胶G250柱纯化，用磷酸缓冲液洗脱，分别收集；最后将收集好的胱抑素C抗体溶液用缓冲液Ⅱ稀释至终浓度为0.1～1.0μg/mL，即为R2试剂；步骤三、制备R3试剂取胱抑素C抗体，用pH为6.0～6.5的TRIS缓冲液透析纯化后加入已活化的长链磺化生物素，2～8℃反应1～3h，再转入室温继续反应10～30min，最后加入赖氨酸反应10～30min，反应液脱盐柱纯化，加入缓冲液Ⅲ稀释至终浓度为0.7～2.0μg/ml，即为R3试剂。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒具有灵敏度高、准确定量、无放射性风险及样本需求量少等优点。具体来讲：1、本专利技术的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒采用链霉亲和素磁颗粒与生物素标记的抗体可以牢牢的结合在一起，减少非特异性吸附，提高测试样本的准确度，抗干扰能力强；2、本专利技术的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒抗原、抗体的结合是在相似的液体条件下进行，反应更加迅速灵敏；3、本专利技术的胱抑素C化学发光免疫测定试剂盒与化学发光免疫检测仪器组成封闭系统，试剂、样本的添加及检测任务均由仪器自动完成，系统误差小，降低了人为操作的误差，提高了整个系统的灵敏度与准确度，并且实现无人值守；4、本专利技术的胱抑素C化学发光免疫测定试剂盒选择吖啶酯等为化学发光免疫分析系统的标记材料，该材料由激发态回到基态时产生的能量跃迁为直接化学发光，不需要酶的参与，节约时间及成本，且吖啶酯的化学发光免疫分析系统线性范围宽。附图说明图1为本专利技术实施例1的胱抑素C化学发光免疫测定试剂盒的反应校准曲线。具体实施方式为了进一步理解本专利技术，下面对本专利技术优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本专利技术的特征和优点，而不是对本专利技术权利要求的限制。本专利技术提供的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂：R1试剂包含链霉亲和素磁颗粒和缓冲液Ⅰ，R1试剂中链霉亲和素磁颗粒的质量百分浓度为0.02％～1％；R2试剂包括化学发光标记物标记的胱抑素C抗体和缓冲液Ⅱ，R2试剂中化学发光标记物标记的胱抑素C抗体的浓度为0.1～1.0μg/mL；R3试剂包括偶联标记物标记的胱抑素C抗体和缓冲液Ⅲ，R3试剂中偶联标记物标记的胱抑素C抗体的浓度为0.7～2.0μg/ml。上述技术方案中，缓冲液Ⅰ、缓冲液Ⅱ和缓冲液Ⅲ均为含有50～200mM的缓冲盐、0.05％～0.1％的表面活性剂和0.01％～0.1％的防腐剂，pH为6.5～7.2的缓冲液；缓冲液Ⅰ、缓冲液Ⅱ和缓冲液Ⅲ还可以分别独立的含有0.05％～0.1％的稳定剂；其中，稳定剂优选为牛血清白蛋白，表面活性剂优选为吐温-20，防腐剂优选为NaN3或ProClin300，缓冲盐优选为tris-HCl、PB、MES或HEPES。上述技术方案中，链霉亲和素磁颗粒的粒径优选为0.05～3μm。上述技术方案中，化学发光标记物标记的胱抑素C抗体中，胱抑素C抗体与化学发光标记物的标记摩尔比为1:(3～20)；化学发光标记物为吖啶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；所述R1试剂包含链霉亲和素磁颗粒和缓冲液Ⅰ，R1试剂中链霉亲和素磁颗粒的质量百分浓度为0.02％～1％；所述R2试剂包括化学发光标记物标记的胱抑素C抗体和缓冲液Ⅱ，R2试剂中化学发光标记物标记的胱抑素C抗体的浓度为0.1～1.0μg/mL；所述R3试剂包括偶联标记物标记的胱抑素C抗体和缓冲液Ⅲ，R3试剂中偶联标记物标记的胱抑素C抗体的浓度为0.7～2.0μg/ml。

【技术特征摘要】
1.胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；所述R1试剂包含链霉亲和素磁颗粒和缓冲液Ⅰ，R1试剂中链霉亲和素磁颗粒的质量百分浓度为0.02％～1％；所述R2试剂包括化学发光标记物标记的胱抑素C抗体和缓冲液Ⅱ，R2试剂中化学发光标记物标记的胱抑素C抗体的浓度为0.1～1.0μg/mL；所述R3试剂包括偶联标记物标记的胱抑素C抗体和缓冲液Ⅲ，R3试剂中偶联标记物标记的胱抑素C抗体的浓度为0.7～2.0μg/ml。2.根据权利要求1所述的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液Ⅰ、缓冲液Ⅱ和缓冲液Ⅲ均为含有50～200mM的缓冲盐、0.05％～0.1％的表面活性剂和0.01％～0.1％的防腐剂，pH为6.5～7.2的缓冲液。3.根据权利要求2所述的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液Ⅰ、缓冲液Ⅱ和缓冲液Ⅲ分别还含有0.05％～0.1％的稳定剂，所述稳定剂为牛血清白蛋白。4.根据权利要求2所述的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂为吐温-20，防腐剂为NaN3或ProClin300，缓冲盐为tris-HCl、PB、MES或HEPES。5.根据权利要求1所述的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁颗粒的粒径为0.05～3μm。6.根据权利要求1所述的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的胱抑素C抗体中，胱抑素C抗体与化学发光标记物的标记摩尔比为1:(3～20)；化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺或三联吡啶钌。7.根据权利要求1所述的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述偶联标记物标记的胱抑素C抗体中，胱抑素C抗体与偶联标记物的标记摩尔比为1:(5～20)；偶联标记物为生物素或抗原。8.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张旭东，鲁海冰，高威，孙成艳，何浩会，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22