一种核桃中乙酰5-羟色胺的分离方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种核桃中乙酰5‑羟色胺的分离方法及应用，包括以下步骤：(1)提取：将核桃经粉碎后，10～70％体积浓度的乙醇于30‑70℃条件下提取2‑5h，过滤取上清液，如此重复3次，将3次所得上清液减压浓缩去乙醇后即得核桃乙醇提取物；(2)分离：将步骤(1)所得核桃乙醇提取物进行柱层析，用乙醇溶液洗脱，得到乙酰5‑羟色胺。采用本发明专利技术方法从核桃中分离得到的乙酰5‑羟色胺具有直接的提高记忆的活性，是核桃中具有增强记忆力的主要功效成分；与现有的5‑羟色胺相比，采用本发明专利技术方法从核桃中分离得到的乙酰5‑羟色胺增强记忆力效果更好。

Separation and Application of Acetyl5-HT from Walnut

【技术实现步骤摘要】
一种核桃中乙酰5-羟色胺的分离方法及应用
本专利技术涉及一种核桃中乙酰5-羟色胺的分离方法及应用，属于食品、保健食品、医药

技术介绍
核桃是胡桃(JuglansregialL.)的成熟种子，含有丰富的不饱和脂肪酸，有“木本油料王”之称，具有改善脑缺血，抗疲劳，提高记忆力的作用。核桃中含有多种营养成分对大脑神经有一定的益处，可以提高脑神经的生理功能，增强神经细胞活力，增强记忆力。但核桃中具体哪一种成分具有增强记忆力的功效并不清楚，也无法明确功效的机理。目前普遍认为核桃中大量的亚油酸、亚麻酸、DHA等不饱和脂肪酸是健脑益智的功效成分，能净化血液，清除脑血管壁内中的杂质，提高脑细胞的血液供应量，保证脑细胞所需充足的养料和氧气，提高大脑的生理功能。不可否认多不和脂肪对大脑有较好的保护作用，但并不具有直接的提高记忆的功能，在我们对核桃提取物的成分研究中发现一种生物碱，并证实该生碱具有直接的提高记忆的活性，是核桃中具有增强记忆力的主要功效成分。
技术实现思路
本专利技术首次从核桃中分离鉴定出乙酰5-羟色胺，并确定该化合物为核桃中具有增强记忆力的主要功效成分。本专利技术的第一个目的是提供一种核桃中乙酰5-羟色胺的分离方法包括以下步骤：(1)提取：将核桃经粉碎后，用10～70％体积浓度的乙醇，于30-70℃条件下搅拌提取2-5h，过滤取上清液，如此重复3次，将3次所得上清液减压浓缩去乙醇后即得核桃乙醇提取物。(2)分离：将步骤(1)所得核桃乙醇提取物进行柱层析，用乙醇溶液洗脱，得到乙酰5-羟色胺。在本专利技术一种实施方式中，所述乙酰5-羟色胺的结构式为：在本专利技术一种实施方式中，步骤(1)中核桃粉和乙醇的料液比为1:10-20(M/V)。在本专利技术一种实施方式中，步骤(2)中是将步骤(1)所得核桃乙醇提取物上MCI柱，依次用去离子水、浓度为30％、50％、95％的乙醇进行梯度洗脱，收集30％乙醇洗脱部分；减压浓缩后上样到ODS柱，依次用浓度20％、30％、40％的乙醇进行洗脱，收集30％乙醇洗脱部分；减压浓缩后上样到ODS-AQ柱，依次用浓度20％、30％、40％的乙醇进行洗脱，收集30％乙醇洗脱部分；将30％乙醇洗脱部分反复上ODS-AQ柱，最后得乙酰5-羟色胺。本专利技术的第二个目的是提供一种含有上述方法得到的乙酰5-羟色胺的组合物。在本专利技术一种实施方式中，所述组合物在食品领域的应用。本专利技术的第三个目的是提供一种药物组合物，所述药物组合物由上述方法得到的乙酰5-羟色胺和药学上可接受的载体组成。在本专利技术一种实施方式中，剂型包括粉剂、片剂、针剂、口服液或注射液。在本专利技术一种实施方式中，所述药物组合物在增强记忆力方面的应用。有益效果：(1)采用本专利技术方法从核桃中分离得到的乙酰5-羟色胺具有直接的提高记忆的活性，是核桃中具有增强记忆力的主要功效成分；(2)与现有的5-羟色胺相比，采用本专利技术方法从核桃中分离得到的乙酰5-羟色胺增强记忆力效果更好。附图说明图1为乙酰5-羟色胺组1H-NMR图；图2为乙酰5-羟色胺组13C-NMR图；图3为乙酰5-羟色胺组135DEPT-NMR图。具体实施方式以下对本专利技术的优选实施例进行说明，应当理解实施例是为了更好地解释本专利技术，不用于限制本专利技术。实施例1：从核桃中提取纯化核桃乙酰5-羟色胺方法，其步骤如下：核桃经粉碎后，按料液比1:10(M/V)加入70％的乙醇，于50℃条件下搅拌提取3h，过滤取上清液，如此重复3次。将3次所得上清液减压浓缩去乙醇后即得核桃乙醇提取物。将核桃乙醇提取物上MCI柱，依次用去离子水、浓度为30％、50％、95％的乙醇进行梯度洗脱，收集30％乙醇洗脱部分，减压浓缩后上样到ODS柱，依次用浓度20％、30％、40％的乙醇进行洗脱，收集30％乙醇洗脱部分，减压浓缩后上样到ODS-AQ柱，依次用浓度20％、30％、40％的乙醇进行洗脱，收集30％乙醇洗脱部分。将30％乙醇洗脱部分反复上ODS-AQ柱，最后得一个单体化合物—乙酰5-羟色胺，该化合物为无色无定形粉未，易溶水、甲醇、乙醇。利用HPLC测定所得的乙酰5-羟色胺的收率为90％，纯度为98.1％。实施例2：从核桃中提取纯化核桃乙酰5-羟色胺的方法，其步骤如下：核桃经粉碎后，按料液比1:15(M/V)加入10％的乙醇，于30℃条件下搅拌提取5h，过滤取上清液，如此重复3次。将3次所得上清液减压浓缩去乙醇后即得核桃乙醇提取物。将核桃乙醇提取物上MCI柱，依次用去离子水、浓度为30％、50％、95％的乙醇进行梯度洗脱，收集30％乙醇洗脱部分，减压浓缩后上样到ODS柱，依次用浓度20％、30％、40％的乙醇进行洗脱，收集30％乙醇洗脱部分，减压浓缩后上样到ODS-AQ柱，依次用浓度20％、30％、40％的乙醇进行洗脱，收集30％乙醇洗脱部分。将30％乙醇洗脱部分反复上ODS-AQ柱，最后得一个单体化合物—乙酰5-羟色胺，该化合物为无色无定形粉未，易溶水、甲醇、乙醇。所得的产品的收率为89％，纯度为98％。实施例3：从核桃中提取纯化核桃乙酰5-羟色胺的方法，其步骤如下：核桃经粉碎后，按料液比1:20(M/V)加入60％的乙醇，于70℃条件下搅拌提取2h，过滤取上清液，如此重复3次。将3次所得上清液减压浓缩去乙醇后即得核桃乙醇提取物。将核桃乙醇提取物上MCI柱，依次用去离子水、浓度为30％、50％、95％的乙醇进行梯度洗脱，收集30％乙醇洗脱部分，减压浓缩后上样到ODS柱，依次用浓度20％、30％、40％的乙醇进行洗脱，收集30％乙醇洗脱部分，减压浓缩后上样到ODS-AQ柱，依次用浓度20％、30％、40％的乙醇进行洗脱，收集30％乙醇洗脱部分。将30％乙醇洗脱部分反复上ODS-AQ柱，最后得一个单体化合物—乙酰5-羟色胺，该化合物为无色无定形粉未，易溶水、甲醇、乙醇。所得的产品的收率为91％，纯度为97.5％。实施例4：分别用HREI-MS和核磁共振对实施例1获得的物质结构进行鉴定。LC-MS检测条件为：采用ESI+模式，电压1170v，化合物m/z为218.4103，计算分子式为C12H14N2O2。核磁共振检测条件为：以D2O为溶剂，四甲基硅烷为内标，Bruck500MZ进行NMR测定，核磁共振检测结果如表1所示。1H和13C核磁共振数据见表1。HREI-MS给出分子质量为218.4103，计算分子式为C12H14N2O2，1H和13C核磁共振数据见表1。表1核桃中乙酰5-羟色胺的1H和13C核磁共振数据1H-NMR可见δ7.19(1H，d,J＝8.5)，7.08(1H，s),δ6.94(1H，d,J＝3.0)，δ6.71(1H，dd,J＝8.5,3.0)，表明苯环上有一个AMX系统。δ3.18(2H，t,J＝7.5),δ3.03(2H，t,J＝7.5)为脂肪链上的-CH2-氢信号,δ1.91(3H，s)为甲基氢信号。从13C-NMR可见化合物共有12个碳信号，其中δ180.7为羰基碳信号，δ151.8应为连氧碳信号，δ41.4为一个连氮碳信号。从135DEPT可见125.3，113.3，113.1，103.5四个-CH碳信号，δ41.4，25.1为-CH2-碳信号，δ24.5为甲基碳信号。可以得出化合物为5-羟色胺类衍生物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核桃中乙酰5‑羟色胺的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取：将核桃经粉碎后，用10～70％体积浓度的乙醇于30‑70℃条件下提取2‑5h，过滤取上清液，重复3次，将3次所得上清液减压浓缩去乙醇后即得核桃乙醇提取物；(2)分离：将步骤(1)所得核桃乙醇提取物进行柱层析，用乙醇溶液洗脱，得到乙酰5‑羟色胺；所述乙酰5‑羟色胺的结构式为：

【技术特征摘要】
1.一种核桃中乙酰5-羟色胺的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取：将核桃经粉碎后，用10～70％体积浓度的乙醇于30-70℃条件下提取2-5h，过滤取上清液，重复3次，将3次所得上清液减压浓缩去乙醇后即得核桃乙醇提取物；(2)分离：将步骤(1)所得核桃乙醇提取物进行柱层析，用乙醇溶液洗脱，得到乙酰5-羟色胺；所述乙酰5-羟色胺的结构式为：2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，步骤(1)中核桃粉和乙醇的料液比为1:10-20(M/V)。3.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，步骤(2)中是将步骤(1)所得核桃乙醇提取物上MCI柱，依次用去离子水、浓度为30％、50％、95％的乙醇进行梯度洗脱，收集30％乙醇洗脱部分。4.根据权利要求3所述的分离方法，其特征在于，将经MCI柱层析后收集的乙醇洗脱部分减压浓缩后上样到ODS柱，...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐德平，
申请(专利权)人：徐一达，
类型：发明
国别省市：江苏,32