细胞制剂制造技术

提供作为治疗目标对于软骨组织相关疾病表现出高的治疗效果的含有球体的细胞制剂。一种软骨组织相关疾病的预防或治疗剂，其包含含有经过培养的间充质干细胞的球体作为有效成分。

Cell preparation

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞制剂
本专利技术涉及细胞制剂。更具体而言，本专利技术涉及含有规定的细胞培养物作为有效成分的特定疾病的预防或治疗剂。
技术介绍
间充质干细胞(MesenchymalStemCells、MSCs)具有优异的自身再生能力和多分化能力。因此，间充质干细胞作为用于细胞治疗的细胞制剂的潜在性的细胞源值得期待(非专利文献1)。使用这种间充质干细胞作为细胞制剂时，以所培养的细胞之间形成三维网络而成的球体(细胞块、细胞聚集体)的形态使用，从提高疾病的创伤治愈效果的观点考虑优选。含有球体作为有效成分的细胞制剂中，现在仍然不知道对作为治疗目标的软骨组织相关疾病表现出高的治疗效果的细胞制剂。现有技术文献非专利文献非专利文献1：Pittengeretal.,1999,Science.284:143-7
技术实现思路
专利技术要解决的问题因此，本专利技术的目的在于，提供对作为治疗目标的软骨组织相关疾病表现出高的治疗效果的含有球体的细胞制剂。用于解决问题的方案本专利技术人等为了解决上述问题而进行深入研究。其结果令人惊讶地发现，包含含有经过培养的间充质干细胞的球体作为有效成分的细胞制剂对软骨组织相关疾病表现出高的治疗效果，从而完成了本专利技术。即，本专利技术为一种软骨组织相关疾病的预防或治疗剂，其包含含有经过培养的间充质干细胞的球体作为有效成分。专利技术的效果根据本专利技术，提供对作为治疗目标的软骨组织相关疾病表现出高的治疗效果的含有球体的细胞制剂。附图说明图1为表示使用光学显微镜观察实施例1中的间充质干细胞的粘附培养的经过而得到的观察图像的照片。图1的(a)表示培养第1天的观察图像，图1的(b)表示培养第3天的观察图像。图2为表示使用光学显微镜观察实施例2中的间充质干细胞的悬浮培养的经过而得到的观察图像的照片。图3为表示测定实施例1和实施例2以及比较例1中经过培养的间充质干细胞中的人TGFβ1基因(软骨分化起因因子)的mRNA表达量而得到的结果的图。图4为表示给予了比较例2中得到的经过平面培养的间充质干细胞以及实施例3和实施例4中得到的间充质干细胞球体的变形性膝关节病模型小鼠中的、组织学上的关节损伤度的半定量评分评价结果的图(评分越小则意味着关节损伤度越低)。图5为表示对于给予了比较例2中得到的经过平面培养的间充质干细胞以及实施例3和实施例4中得到的间充质干细胞球体的变形性膝关节病模型小鼠中的关节组织进行藏红O染色而得到的结果的显微镜照片。具体实施方式本专利技术的一方式为一种软骨组织相关疾病的预防或治疗剂，其包含含有经过培养的间充质干细胞的球体作为有效成分。以下对于本专利技术的实施方式进行说明。需要说明的是，本专利技术不仅限于以下的实施方式。本说明书中，表示范围的“X～Y”指的是“X以上且Y以下”。另外，只要没有特别说明则操作和物性等的测定在室温(20～25℃)/相对湿度40～50％RH的条件下测定。＜有效成分(球体)＞本方式的软骨组织相关疾病的预防或治疗剂包含含有间充质干细胞的球体作为有效成分。本说明书中，“球体”指的是细胞的聚集体(细胞块)，该概念也包括三维细胞集合体。需要说明的是，对于球体的尺寸没有特别限制，作为一例，球体的直径优选为1～500μm、优选10～300μm。在此，球体的直径能够通过常规方法(粒径分布测定)测定。(间充质干细胞(MSC))作为本方式的有效成分的球体的特征在于，含有经过培养的间充质干细胞。作为供于培养的间充质干细胞(MSC)，只要为未分化的间充质细胞则没有特别限制，可以使用由哺乳动物的骨髓、骨膜、脂肪组织、外周血等根据常规方法采集得到的间充质细胞。另外，采集后，也可以根据塑料附着性的有无等选择未分化的MSC。在此，作为MSC，从供应的容易程度和高的增殖性之类的观点考虑，优选使用脂肪组织来源的间充质干细胞。另外，作为MSC，优选使用种类与本专利技术的预防·治疗剂的给药对象相同的哺乳动物来源的MSC，可以使用给药对象以外的相同种类的哺乳动物来源的MSC、给药对象自身的MSC(自体细胞)。对于这些细胞由来的生物种类也没有特别限制，可以使用人和非人哺乳动物来源的各种细胞。作为细胞由来的生物种类，可例示出例如人、猕猴、青猴、食蟹猕猴、黑猩猩、绢毛猴(tamarin)和绒猴(marmoset)等灵长类、小鼠、大鼠、仓鼠和豚鼠等啮齿类、狗、猫、兔、猪、牛、山羊、绵羊、马等。需要说明的是，作为供于培养的MSC，可以将MSC增殖至70～90％铺满(优选80％铺满)而得到的细胞作为0次传代、使它们进一步增殖而使用1～10次传代的MSC。(培养条件)作为本方式的有效成分的球体的特征在于，含有经过培养的间充质干细胞。对于用于得到球体中含有的“经过培养的间充质干细胞”的培养条件也没有特别限制，若为本领域技术人员则能够适当选择能够培养间充质干细胞(MSC)的条件。具体而言，作为培养间充质干细胞的方式，存在悬浮培养、粘附培养。其中，本专利技术中，培养优选为“粘附培养”。“粘附培养”是相对于“悬浮培养”的概念，指的是使想要培养的细胞、含有该细胞的球体粘附于细胞培养用基材的表面进行培养。培养中，“想要培养的细胞、含有该细胞的球体粘附于培养用基材的表面”指的是细胞、球体通过ECM(extracellularmatrix、细胞外基质)等中含有的细胞-基质粘附分子而与培养用基材的表面粘附的状态，指的是即使轻轻摇动培养基，细胞、球体也不会悬浮于培养基中的状态。另一方面，“悬浮培养”指的是想要培养的细胞、含有该细胞的球体以不粘附于培养用基材的表面的方式进行培养。培养中，“想要培养的细胞、含有该细胞的球体不粘附于培养用基材的表面”指的是细胞、球体没有通过ECM等中含有的细胞-基质粘附分子与培养用基材的表面底面粘附的状态，指的是即使与基材的表面接触，若轻轻摇动培养基则细胞、球体也会悬浮于培养基中、或者不附着而沉落的状态等。若将其定量地表现，则本说明书中，在由培养容器内的含有细胞、球体的培养基将培养基全部去除后，再次以0.1mL/秒的速度将培养基注入到该容器时，细胞、球体由底面离开而漂浮或者细胞、球体移动500μm以上的情况下，判断该细胞、球体“悬浮(也就是说，该细胞、球体没有粘附于培养用基材的表面)”。细胞培养中使用的培养基根据细胞适当选择即可。对于培养基的种类没有特别限定，例如可以使用任意的细胞培养基本培养基、分化培养基、初代培养专用培养基等。具体而言，可列举出Eagle’s最小必需培养基(EMEM)、达尔伯克改良Eagle’s培养基(DMEM)、α-MEM、Glasgow’sMEM(GMEM)、IMDM、RPMI1640、Ham’sF-12、MCDB培养基、William’s培养基E、肝细胞解冻培养基(Hepatocytethawmedium)、MSC专用培养基和它们的混合培养基等，但是不限于它们，只要为含有细胞增殖、分化所需要的成分的培养基即可利用。进而也可以使用添加有血清、各种生长因子、分化诱导因子、抗生素、激素、氨基酸、糖、盐类等的培养基。对于培养温度也没有特别限制，通常在25～40℃左右进行。对于供于培养的时间也没有特别限制，可以考虑细胞的增殖速度和所希望的球体的尺寸等适当确定。在此，培养的时间优选为4小时～30天(4～720小时)、更优选1～14天(24～336小时)、进一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种软骨组织相关疾病的预防或治疗剂，其包含含有经过培养的间充质干细胞的球体作为有效成分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.12.02 JP 2016-235286;2017.08.22 JP 2017-159671.一种软骨组织相关疾病的预防或治疗剂，其包含含有经过培养的间充质干细胞的球体作为有效成分。2.根据权利要求1所述的预防或治疗剂，其包含含有在细胞培养用基材上经过粘附培养的间充质干细胞的球体作为有效成分。3.根据权利要求1或2所述的预防或治疗剂，其中，所述软骨组织相关疾...

【专利技术属性】
技术研发人员：牧野朋未，仲田拓马，伊井正明，
申请(专利权)人：株式会社日本触媒，学校法人大阪医科药科大学，
类型：发明
国别省市：日本,JP