【技术实现步骤摘要】
一种针对DNA含量极低的古代人类遗骸性别鉴定方法
本专利技术涉及分子考古学领域，特别涉及一种针对DNA含量极低的古代人类遗骸性别鉴定方法。
技术介绍
中国现代考古学是以一群具有明确特征、经常伴随出现的器物类型作为区分不同文化的标志，这样的考古理念，恰恰把创造历史文化的人排除在外，实际上无论是远古还是现代，人类永远是社会活动的主体，人类社会最关心的应该是人类本身。因此，古DNA分子人类学在我国的兴起正是要打破这种单一的、形态上对应的文化定性研究模式，把古代人类生命物质遗存的所有信息注入人类历史研究过程，从而把人类历史研究拉上以人为核心的研究轨道上来，使人类学、考古学和生命科学交叉融合共同发展。古代人类遗骸的性别信息是考古学研究必不可少的关键信息之一。只有准确的知道墓葬群中个体的性别信息，才能进一步去研究家庭结构，社会结构等重要的科学问题。传统的古代人类遗骸性别鉴定方法以形态学分析为主，性别判定主要依据头骨、盆骨及四肢骨等骨骼的性别标志。骨骼保存完整程度的不同，鉴定结果的准确程度也不同。对于年龄过小的个体难以用形态学方法作出性别判断。这些年随着分子生物学的发展，开始用...
【技术保护点】
1.一种针对DNA含量极低的古代人类遗骸性别鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、古DNA的提取步骤二、古DNA的定量选择人类线粒体DNA序列，设计一段113bp长的DNA片段，并设计好探针，同时合成引物和探针，如表1，表1古DNA的定量引物
【技术特征摘要】
1.一种针对DNA含量极低的古代人类遗骸性别鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、古DNA的提取步骤二、古DNA的定量选择人类线粒体DNA序列，设计一段113bp长的DNA片段，并设计好探针，同时合成引物和探针，如表1，表1古DNA的定量引物制备标准品包括：PCR扩增目标片段，PCR产物的纯化，重组质粒的转染，菌落PCR，菌落PCR成功的细菌进行恒温培养，摇菌过夜，质粒的提取，保准品制备完成；用实时荧光定量PCRSYBR方法对标准品和古DNA样品进行扩增，根据标准品的扩增结果，绘制标准曲线，进而计算古DNA样品绝对定量结果；步骤三、性别位点A引物的合成Amelogenin基因通常在X和Y染色体上分布的片段长度不同，电泳后出现106bp和112bp两条带的是男性，只出现106bp一条带的是女性，合成引物见表2；表2Amelogenin基因扩增引物步骤四、性别位点B引物的合成用3个特异性性别引物分别对样本X和Y染色体片段进行扩增，引物M4作用于X和Y染色体5'端；引物M5只作用于X染色体3'端；而M6仅作用于Y染色体3'端；X染色体扩增产物片段大小为330bp；Y染色体扩增产物片段大小为218bp，引物M4、M5和M6序列见表3；表3性别基因扩增引物步骤五、两对性别位点的结合：分别设定两对性别鉴定位点，并标记为性别位点A和B，性别位点A是牙釉质蛋白基因，性别位点B是X和Y染色体上的一段保守区域，将性别位点A和B进行整合，作为古代人类遗骸性别鉴定的Markers；步骤六、性别位点A和B的扩增和鉴定合成MGB探针，用实时荧光定量PCR探针法，使用NEBLunaUniversalProbeQpcrMasterMix，M3004，同时对性别位点A和B进行扩增，将性别位点A和B的扩增结果放在一起综合分析，最后得到古人类遗骸个体性别信息。2.根据权利要求1所述的一种针对DNA含量极低的古代人类遗骸性别鉴定方法，其特征在于，步骤一所述的古DNA的提取，具体为：(1)称取0.5～2g骨粉，加入1ml的10％SDS；4ml的pH8.0的EDTA和100μl的10mg/ml蛋白酶K，于37℃震荡过夜；过夜后的DN...
【专利技术属性】
技术研发人员：张虎勤，赵静，吴晓明，刘晓刚，杜建强，林松，胡曦，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61
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