一种厌氧菌的菌种保藏方法技术

本发明专利技术公开了一种厌氧菌的菌种保藏方法，首先将待保藏菌种接种于无氧的液体培养基中，培养生长至对数期；然后在厌氧工作站中使用注射器将对数期新鲜培养菌液转移入菌种保藏冻存管中，加入防冻剂震荡混匀菌液；最后加入液体石蜡—氧气隔离剂后于‑80℃冷冻保藏。本发明专利技术菌种保藏方法适合于厌氧菌(兼性厌氧菌/绝对厌氧菌)的长期保藏。采用本发明专利技术的保藏方法，能够大大降低菌种的保藏成本，实现菌种在无氧条件下长期有效的保藏，有利于对厌氧微生物的研究和利用。

A Preservation Method of Anaerobic Bacteria

【技术实现步骤摘要】
一种厌氧菌的菌种保藏方法
本专利技术涉及一种厌氧菌的菌种保藏方法，属于微生物

技术介绍
微生物菌种保藏技术是微生物领域一种很基础且重要的技术。厌氧微生物是一类需要在无分子氧或者低氧化还原电位条件下才能正常生长繁殖的微生物。由于氧气对厌氧微生物的生理毒性，其培养和保藏技术的关键是要使该类微生物处于无氧或氧化还原电位低的环境中。因而，厌氧菌的长期保藏技术存在操作相对繁琐，成功率相对低的问题。现存的针对厌氧菌的菌种保藏方法，诸如：定期移植保藏法、冷冻干燥法、液氮超低温保藏法和-80℃低温冷冻等。这些菌种保藏方法依其保藏条件的苛刻程度不同，保存时间长度不同。定期移植保藏法虽然操作简单，但是保藏周期较短，一般1～3个月转接一次，且易污染杂菌或引致死亡，菌种也易发生变异；冷冻干燥法保藏法虽然保藏周期较长，但操作过程中易与氧气接触而导致严格厌氧菌存活率不高；而液氮超低温保藏法虽然保藏周期也较长，由于液氮极易挥发，保藏成本较高，且液氮危险系数较高；而-80℃低温冷冻保藏在厌氧菌保藏方面操作技术比较笼统。
技术实现思路
本专利技术为了避免上述现有技术所存在的不足之处，在-80℃低温冷冻保藏方法的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种厌氧菌的菌种保藏方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1：无氧液体培养基的配制根据待保藏厌氧菌生长所需要的营养成分配制新鲜的液体培养基，调到合适的pH值，排除培养基中的氧气，高温灭菌冷却后即可获得无氧液体培养基；步骤2：待培养菌种的富集在无菌无氧条件下，将待保藏菌种接种于步骤1配制的液体培养基中，然后在无氧、33℃～35℃、90～100rpm/min条件下培养至对数期，以保证菌种最佳生命状态；步骤3：待保藏菌种的保藏在无菌无氧条件下，用无菌注射器吸取对数期菌液至无菌除氧的保藏管中；接着吸取防冻保护剂加入保藏管中，将保藏管上下颠倒充分混匀；随后加入液体石蜡后封盖，置于‑80℃保藏；步骤4：保...

【技术特征摘要】
1.一种厌氧菌的菌种保藏方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1：无氧液体培养基的配制根据待保藏厌氧菌生长所需要的营养成分配制新鲜的液体培养基，调到合适的pH值，排除培养基中的氧气，高温灭菌冷却后即可获得无氧液体培养基；步骤2：待培养菌种的富集在无菌无氧条件下，将待保藏菌种接种于步骤1配制的液体培养基中，然后在无氧、33℃～35℃、90～100rpm/min条件下培养至对数期，以保证菌种最佳生命状态；步骤3：待保藏菌种的保藏在无菌无氧条件下，用无菌注射器吸取对数期菌液至无菌除氧的保藏管中；接着吸取防冻保护剂加入保藏管中，将保藏管上下颠倒充分混匀；随后加入液体石蜡后封盖，置于-80℃保藏；步骤4：保藏菌种的复苏活化菌种时，取出保藏管于室温融化，或者于适宜温度下水浴融化，然后在无菌无氧条件下接种于无氧的液体培养基中，于三气培养箱中33℃～35℃培养3～5天，观察菌株存活情况。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述液体培养基的组成：MES0.3‰～1‰、KH2PO40.3‰～0.7‰、Na2SO40.1‰～0.5‰、NaCl0.8‰～1.2‰、MgCl2·6H2O0.2‰～0.7‰、NaHCO30.2‰～0.4‰、CaCl2·2H2O0.1‰～0.3‰、酵母提取物1‰～3‰、蛋白胨1‰～3‰、D-葡萄糖0.2‰...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟雅静，王艳丽，张会敏，李静心，何宏魁，刘国英，王录，
申请(专利权)人：安徽瑞思威尔科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34