使用膜STIM1筛选化合物的方法技术

本发明专利技术涉及使用膜STIM1筛选化合物的方法。本发明专利技术还涉及位于细胞的质膜的STIM1蛋白的部分在以下方法中的用途，该方法用于筛选用于治疗慢性淋巴细胞白血病和/或系统性红斑狼疮的候选分子。本发明专利技术还涉及与位于细胞的质膜的STIM1蛋白的部分相互作用的物质，用于在治疗慢性淋巴细胞白血病和/或系统性红斑狼疮中作为药用产品使用，以及涉及包含至少一种根据本发明专利技术的物质的药物组合物。

Screening of Compounds by Membrane STIM1

【技术实现步骤摘要】
使用膜STIM1筛选化合物的方法本申请是申请日为2015年7月31日的题为“使用膜STIM1筛选化合物的方法”的中国专利申请号201580042267.X的分案申请。
本专利技术涉及STIM1(基质相互作用分子1或GOK)蛋白的膜部分在筛选的方法中的用途，以及涉及与位于质膜的STIM1蛋白的部分相互作用的物质用于治疗用途，和包含至少这种物质的药物组合物。在下面给出的描述中，在方括号([])中的参考文献是指在文本的结尾处给出的参考文献。
技术介绍
系统性红斑狼疮(SLE)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)仍然无法治愈。SLE是自身免疫性起源的异质性疾病，特征在于存在自身反应性淋巴细胞以及存在抗核自身抗体(ANA)。它是具有非常不同的临床表现的多系统疾病。患病率在不同的族群中是不同的，但估计为约1/10000，其中男/女比例为10:1。这种疾病的临床异质性反映了它的致病复杂性，这包括遗传和环境因素。SLE可能影响所有器官。最常见的表现是皮疹、关节炎和疲劳。最严重的表现包括肾炎、神经病症、贫血和血小板减少。90％以上的患者具有ANA，其被认为是高于1/160阳性的。SLE是具有发作性进展的疾病。目前治疗的目的是：治疗急性发作，其可能会影响重要的预后，最小化在相对稳定的时期爆发的风险，以及监测症状，这些症状虽然不危害重要的预后，但影响日常生活质量。羟氯喹和非甾体类抗炎药适用于SLE的温和形式；皮质激素类和免疫抑制剂被保留用于最严重的形式；靶向B淋巴细胞(B细胞)的抗CD20单克隆抗体(利妥昔单抗(rituximab)，)目前适用于受到更严重影响并且对通常治疗没有响应的患者([1])。尽管在引入皮质激素类和免疫抑制剂以后预后改善，但SLE继续对患者发病率和死亡率有显著的影响。CLL是慢性恶性血液病，其还影响B细胞。这些细胞在免疫系统水平上发挥重要作用。在CLL过程中，在它们的生命周期中当CLL的B细胞达到成熟时，它们被阻断，然而它们继续产生。因此，这些B细胞最终积累在血液、神经节、脾、肝和骨髓中，这导致次级淋巴器官的容积的增加。目前可用的针对CLL的治疗是当疾病处于晚期阶段时最常用的。在CLL的强化治疗中使用的化疗产品是单独使用的苯丁酸氮芥、单独使用的氟达拉滨、CHOP型的每月化疗(四种药剂的组合：环磷酰胺-(H)阿霉素(adryamycin)-硫酸长春新碱(长春新碱)-泼尼松)。就靶向治疗而言，因为白血病B细胞是CD20+，特异性地识别此靶点的单克隆抗体可以用于治疗(利妥昔单抗，)。另一个靶点是对于B细胞具有特异性的Bruton的酪氨酸激酶，其在白血病细胞中的表达增加。依鲁替尼(Ibrutinib)(其是此酶的抑制剂)导致白血病细胞的凋亡(死亡)，从而甚至在难治性或反复发作的形式中也给予更长的缓解。然而，上述治疗可能暴露于不良效应。在SLE和CLL的病理特征中，描述了在B细胞抗原受体(BCR)的刺激以后，在SLE和CLL中B细胞的钙信号通路收到干扰([2,3])。除钙信号通路的这些缺陷之外，SLE的B细胞特征还在于白细胞介素10(IL-10)的产生不足，其影响调节B淋巴细胞(Breg)的活性([4,5])。在SLE中Breg的活性的这种不足导致T淋巴细胞(T细胞)增殖的较少调节，其可能会再次有利于放大自身免疫过程([5])。CLL和SLE的诊断和预后是基于汇编的不完善的临床和生物学标准，因此需要开发新的、更有效的标准。在上述两种疾病中，B细胞是主要治疗靶。然而，一些患者并不响应现有治疗。因此，真正需要提供新的治疗解决方案，其克服现有技术的这些缺陷、缺点和障碍，并且尤其涉及治疗靶，其对于待治疗的疾病的受影响的细胞是易接近的，特异性的和选择性的。
技术实现思路
本专利技术通过使用STIM1蛋白(涉及钙通道的激活和调节的蛋白)的位于质膜的部分作为SLE和CLL的治疗靶，使得可以响应这些需求。令人惊讶地，本申请人还证明了用于直接或间接控制位于质膜的STIM1蛋白的活性的任何方式可以用于调节B细胞的细胞反应，从而提供SLE和CLL的新的治疗解决方案。本专利技术因此提出，在这种情况下，使用调节以下各项的任何工具：(i)位于质膜的STIM1蛋白的表达，(ii)这种蛋白的膜寻址(membraneaddressing)，或(iii)在淋巴细胞质膜处这种蛋白的生物活性。在本专利技术的上下文中，在狼疮患者的B细胞中令人惊讶地观测到：(1)STIM1蛋白的整体表达的增加，以及位于质膜的STIM1的部分的诱导，这在对照的B细胞中保持较低或甚至为零，(2)在具有位于质膜的STIM1的部分的SLE的B细胞(在静止时)中，尤其是在处于不成熟/过渡期的SLE的B细胞中，借助于Erk1/2激酶(细胞外信号调节激酶)的磷酸化，MAPK通路(促分裂原活化蛋白激酶)的激活，(3)细胞外Ca2+的增加的组成型进入，以及(4)在STIM1的表达的增加、细胞外Ca2+的组成型进入(持续进入，constitutiveentry)和MAPKERK1/2途径的激活的失调之间的相关性，其可以解释细胞的一般激活，自身反应性B细胞的存活，因而可以解释自身免疫过程。在本专利技术的上下文中，关于SLE的Breg的活性，首次令人惊讶地观测到：(x1)Breg的缺乏调节活性与在SLE的B细胞中的STIM1分子的表达的增加相关，(x2)位于质膜的STIM1分子的阻断(通过阻断抗体特异性地进行或者通过靶向在SLE的B细胞中STIM1的siRNA非特异性地进行的)恢复(i)通过SLE的Breg的IL-10的生产，(ii)T细胞的增殖的抑制，以及(iii)调节性T细胞的诱导。在健康的对照中，位于质膜的STIM1的阻断没有影响。对于CLL的B细胞，申请人还令人惊讶地观测到：(a)胞浆内钙的基线水平的增加与CLL的B细胞的存活的增加、MAPKErk1/2途径的激活、转录因子NFAT2(活化的T细胞的核因子)和STAT3(信号转导物和转录激活子3)的核转位、以及IL-10的合成的增加([5])相关，(b)通过位于质膜的STIM1蛋白的增加来调节细胞外Ca2+的组成型进入的增加。(c)STIM1蛋白在膜上存在(组I)或不存在(组II)允许区分两组患者。(d)针对在质膜处存在的STIM1分子的抗STIM1抗体能够极大减少细胞外Ca2+组成型进入组I的CLL的B细胞以及更弱进入组II的CLL的B细胞，(e)特异性靶向位于质膜的STIM1蛋白的部分的抗STIM1抗体和抗CD20抗体(利妥昔单抗：RTX)的组合能够恢复由组I患者的B细胞(在质膜处存在STIM1蛋白)中的RTX所诱导的凋亡效应。抗STIM1抗体的添加对组II患者(在膜处不存在STIM1蛋白)的抗CD20的凋亡效应没有影响。本专利技术提出，使用位于质膜的STIM1的部分作为在SLE和CLL中的新的治疗靶。本专利技术还提出，在这些疾病中使用位于质膜的STIM1的部分的调节物。本专利技术涉及位于质膜的STIM1的部分作为治疗靶通过调节它的存在或它的活性，在SLE和CLL中的用途。因此，本专利技术涉及(除了别的之外)(i)在细胞的质膜处，STIM1分子的表达的抑制，(ii)这种蛋白的膜寻址的抑制，以及(iii)在质膜处存在的STIM1蛋白的生物活性的抑制。提出了，特别是在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与位于细胞的质膜的STIM1蛋白的部分相互作用的物质，用于在治疗慢性淋巴细胞白血病和/或系统性红斑狼疮中作为药用产品使用。

【技术特征摘要】
2014.08.06 EP 14290232.91.一种与位于细胞的质膜的STIM1蛋白的部分相互作用的物质，用于在治疗慢性淋巴细胞白血病和/或系统性红斑狼疮中作为药用产品使用。2.根据权利要求1所述的物质，所述物质是不进入所述细胞的物质。3.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：伊夫·勒诺迪诺，奥利维耶·米尼昂，米格尔·比尔戈斯，雅克·奥利维耶·佩斯，廷希南·法利，
申请(专利权)人：西布列塔尼大学，法国国家健康与医学研究院，布雷斯特大学医疗中心，
类型：发明
国别省市：法国,FR