胃蛋白酶原I/胃蛋白酶原II检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供胃蛋白酶原I/胃蛋白酶原II检测试剂盒，属于医学免疫学中荧光免疫层析技术领域，其为荧光定量免疫层析法的检测试剂盒，包括检测卡，其特征在于：检测卡由下至上依次设有：PVC板、样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；层析膜包括检测区和质控区，检测区包被抗PG I单克隆抗体和PG II单克隆抗体的检测区，质控区包被羊抗鼠IgG抗体。本发明专利技术试剂盒的测试样本为人的血清、血浆或全血样本，具备良好的检测特异性、较高的灵敏度、操作的简便性以及稳定的荧光标记物保证了检测的准确性。

Pepsinogen I/Pepsinogen II Detection Kit

【技术实现步骤摘要】
胃蛋白酶原I/胃蛋白酶原II检测试剂盒
本专利技术属于医学免疫学中荧光免疫层析
，具体涉及胃蛋白酶原I/胃蛋白酶原II检测试剂盒。
技术介绍
胃蛋白酶原(pepsinogen，PG)是胃分泌的一种消化酶前体，是胃液中胃蛋白酶的无活性前体，根据分布和免疫原性不同，可分为PGI、PGII两种亚型。PGI和PGII是幽门螺旋杆菌(HP)感染和萎缩性胃炎的良好诊断指标，其含量能反映胃粘膜的分泌功能。PGI主要反应的是胃底和胃体的黏膜状态，胃酸分泌增多、胃炎及消化性溃疡PGI升高，胃酸分泌减少或胃黏膜腺体萎缩PGI降低；当发生萎缩性胃炎时会导致胃黏膜主细胞丢失，胃黏膜分泌能力下降，PGI水平明显下降；PGII与胃底黏膜病变的相关性较大(相对于胃窦粘膜)，其升高与胃底腺管萎缩、肠上皮化生或假幽门腺化生、异型增生有关；而且PGII是幽门螺旋杆菌(HP)感染最敏感的指标，PGII升高幅度较PGI明显，PGI/PGII比值降低；故PGI、PGII及PGI/PGII检测结果可作为胃部疾病的诊断和鉴别的指标。CN104698174B公开了一种胃蛋白酶原Ⅰ和Ⅱ联合检测试剂盒，包括已包被抗PGⅠ和PGⅡ抗体的酶联板，抗PGⅠ抗体是将PGⅠ抗原部分基因序列PGⅠ-A和PGⅠ-B分别通过基因工程克隆表达得到PGⅠ-A和PGⅠ-B重组蛋白，并将其免疫小鼠制备得到单克隆抗体；PGⅠ-A的核苷酸序列参见序列表中SEQIDNo.1，PGⅠ-B的核苷酸序列参见序列表中SEQIDNo.2；抗PGⅡ抗体是将PGⅡ抗原基因序列通过基因工程克隆表达得到PGⅡ重组蛋白，并将其免疫小鼠制备得到单克隆抗体，PGⅡ抗原的核苷酸序列参见序列表中SEQIDNo.3。上述试剂盒可同时检测PGⅠ和PGⅡ，操作简单，检测快速。但是该试剂盒只能用来检测血清中PGⅠ和PGⅡ的含量。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种测试样本为人的血清、血浆或全血样本，具备良好的检测特异性、较高的灵敏度、操作的简便性以及稳定的荧光标记物保证了检测的准确性的胃蛋白酶原I/胃蛋白酶原II检测试剂盒。本专利技术为实现上述目的所采取的技术方案为：胃蛋白酶原I/胃蛋白酶原II检测试剂盒，其为荧光定量免疫层析法的检测试剂盒，包括检测卡，检测卡由下至上依次设有：PVC板、样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；其中层析膜包括检测区和质控区；检测区包被抗PGI单克隆抗体和PGII单克隆抗体的检测区，用于捕获抗原；质控区包被羊抗鼠IgG抗体，用于信号检测的提供。作为优选，抗PGI单克隆抗体通过对人抗PGI进行免疫而得到，具有如SEQIDNO.1的序列。作为优选，抗PGII单克隆抗体通过对人抗PGII进行免疫而得到，具有如SEQIDNO.2的序列。作为优选，层析膜为硝酸纤维素膜。作为优选，结合垫上吸附有稀土荧光微球标记的抗PGI单克隆抗体和PGII单克隆抗体-微球偶联复合物。进一步优选，荧光微球的直径为100-250nm，荧光微球为稀土荧光微球，其含稀土镧系元素的一种或几种；单克隆抗体为纯化后混合的单克隆抗体。作为优选，试剂盒还包括IC卡以及稀释液。作为优选，试剂盒的测试样本为人的血清、血浆或全血。本试剂盒仅用于人血清、血浆或全血样本的检测，其它体液样本不适用，血清、血浆、全血样本按常规方法采集，抗凝剂可使用枸橼酸钠、EDTA、或肝素抗凝血浆，对于血清或血浆，分离后请于4小时内测定，血清或血浆2～8℃可保存5天，超过5天需保存在-20℃，检测前，将样本恢复至室温后1小时内完成检测，切勿反复冻融；全血样本于2～8℃可保存3天，不得冻存。本专利技术试剂盒采用免疫荧光双抗夹心法定量检测人血清、血浆或全血中胃蛋白酶原I(PGI)和胃蛋白酶原II(PGII)的含量。当样品滴加到检测卡加样孔后，样本中PGI和PGII与结合垫中的荧光物质标记的抗PGI单克隆抗体和PGII单克隆抗体结合形成反应复合物，反应复合物随层析作用沿着硝酸纤维素膜前移，被硝酸纤维素膜检测线上的对应单克隆抗体捕获，样本中的PGI和PGII捕获量与检测区信号强度正相关，通过荧光分析仪，定量检测样品中PGI和PGII的含量。本专利技术还提供上述胃蛋白酶原I/胃蛋白酶原II检测试剂盒的用途，在体外定量检测人血清、血浆或全血样本中胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II的含量的用途。主要用于为胃癌的早期筛查；胃溃疡、萎缩性胃炎、幽门螺旋杆菌(HP)感染的筛查；幽门螺旋杆菌(HP)治疗效果的评价；消化性溃疡的复发评估、疗效评价；胃癌切除术后的复发评估；个人胃粘膜功能的动态监测。本专利技术还提供上述胃蛋白酶原I/胃蛋白酶原II检测试剂盒的使用方法，吸取全血150μL样本加一滴稀释液或血清、血浆100μL样本加入到测试卡的加样孔中，10分钟后将检测卡插入适用仪器的卡槽内，进行定量判读结果；正常参考区间为：PGI>70ng/mL；PGII<20ng/mL。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：1)本专利技术试剂盒的测试样本为人的血清、血浆或全血样本，具备良好的检测特异性、较高的灵敏度、操作的简便性以及稳定的荧光标记物保证了检测的准确性；2)本专利技术试剂盒能同时定量检测样本中的胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II的含量，对胃部疾病的诊断和鉴别有协同互补作用，可以为胃部疾病病人提供准确可靠的诊断，危险分层和预后信息，具有更快速、更有效、更准确等优点；3)通过本专利技术方法制备得到的两种单克隆抗体-微球偶联复合物，相比现有技术，荧光寿命长，Stokes位移大，激发光谱和发射光谱不重叠，不存在相互干扰现象。本专利技术采用了上述技术方案提供胃蛋白酶原I/胃蛋白酶原II检测试剂盒，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。附图说明图1是本专利技术中试纸卡的结构示意图。附图标记：1.PVC板；2.样品垫；3.结合垫；4.层析膜；5.吸水垫。具体实施方式下面，结合具体实施例对本专利技术实施方式作进一步说明。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。根据本专利技术的实施方式，提供了以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。另外，本专利技术中的术语“包被”为免疫领域的术语，包含吸附、固定之意。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1：如图1所示，胃蛋白酶原I/胃蛋白酶原II检测试剂盒，其为荧光定量免疫层析法的检测试剂盒，包括检测卡，检测卡由下至上依次设有：PVC板1、样品垫2、结合垫3、层析膜4和吸水纸5；其中层析膜包括检测区和质控区；检测区包被抗PGI单克隆抗体和PGII单克隆抗体的检测区，用于捕获抗原；质控区包被羊抗鼠IgG抗体，用于信号检测的提供。上述层析膜4为硝酸纤维素膜，通过以下步骤制得：1)采用与结合垫3上所用的抗PGI和抗PGII单克隆抗体细胞株不同的细胞株，采用标准的腹水生产工艺制备并纯化抗人心肌肌钙蛋白I抗体、抗肌红蛋白抗体和抗肌酸激酶同工酶抗体等三种鼠源单克隆抗体，得到与标记抗体配对的单克隆抗体，分装后保存于-20℃备用；2)分别用包被稀释液将上述三种鼠源单克隆抗体和羊抗小鼠IgG抗体调整浓度到1-3mg/ml，膜液量为1-3ul/cm，将它们分别作为检测线和质控线平行喷洒于硝酸纤维素膜本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.胃蛋白酶原I/胃蛋白酶原II检测试剂盒，其为荧光定量免疫层析法的检测试剂盒，包括检测卡，其特征在于：所述检测卡由下至上依次设有：PVC板、样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；所述层析膜包括检测区和质控区，所述检测区包被抗PG I单克隆抗体和PG II单克隆抗体的检测区，所述质控区包被羊抗鼠IgG抗体。

【技术特征摘要】
1.胃蛋白酶原I/胃蛋白酶原II检测试剂盒，其为荧光定量免疫层析法的检测试剂盒，包括检测卡，其特征在于：所述检测卡由下至上依次设有：PVC板、样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；所述层析膜包括检测区和质控区，所述检测区包被抗PGI单克隆抗体和PGII单克隆抗体的检测区，所述质控区包被羊抗鼠IgG抗体。2.根据权利要求1所述的胃蛋白酶原I/胃蛋白酶原II检测试剂盒，其特征在于：所述抗PGI单克隆抗体通过对人抗PGI进行免疫而得到，具有如SEQIDNO.1的序列。3.根据权利要求1所述的胃蛋白酶原I/胃蛋白酶原II检测试剂盒，其特征在于：所述抗PGII单克隆抗体通过对人抗PGII进行免疫而得到，具有如SEQIDNO.2的序列。4.根据权利要求1所述的胃蛋白酶原I/胃蛋白酶原II检测试剂盒，其特征在于：所述层析膜为硝酸纤维素膜。5.根据权利要求1或2或3所述的胃蛋白酶原I/胃蛋白酶原II检测试剂盒，其特征在于：所述结合垫上吸附有稀土荧光微球标记的抗PGI单克隆抗体和PGII单克隆抗体-微球偶联复合物。6.根据权利要求5...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓川，郭亚楠，张守涛，陶新博，杨永芳，
申请(专利权)人：浙江聚康生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33