一种脯氨酸氨基肽酶检测试纸的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种脯氨酸氨基肽酶检测试纸的制备方法，所用浸液中底物为脯氨酰类衍生物，有良好的灵敏度；分散剂单独或联合使用可以增加试纸的分散能力，有助于颜色的均匀分布；稳定剂可以保护样本中的酶类物质，提高检测的准确度；生物缓冲体系为反应体系提供一个良好的中性的反应环境。本发明专利技术采用浸渍干燥机自动化干燥方法制备检测试纸，浸渍干燥方式具有便捷、省时、可自动化的优势，有效控制试纸制备过程中人工误差带来的影响，浸渍干燥机主副加热，对温度全面进行监控，温度设定在规定的范围内，可以大大减少试纸批次之间的误差，保证试纸制备的准确性、稳定性及均一性。

Preparation of a Proline Aminopeptidase Test Paper

【技术实现步骤摘要】
一种脯氨酸氨基肽酶检测试纸的制备方法
本专利技术属于体外诊断试剂
，具体涉及一种脯氨酸氨基肽酶检测试纸的制备方法。
技术介绍
细菌性阴道病(BV)是由阴道加德纳菌和一些厌氧菌混合感染所致的无阴道粘膜炎性改变的综合征，在细菌学上表现为生殖道正常菌群(主要为乳酸杆菌)减少，代之以阴道加德纳菌、厌氧菌、嗜血杆菌、动弯杆菌(常见于BV患者阴道分泌物中的细菌)等增加的临床症侯群。同时BV可造成产褥感染、胎膜早破、早产、新生儿感染等妊娠不良和妊娠并发症。因此，在妇科、产科以及施行流产术前进行BV检查具有十分重要的意义。BV的感染率高且容易复发，常与急、慢性盆腔炎、宫颈炎、输卵管炎及相关疾病如异位妊娠、不孕症等有密切的联系。BV诊断的传统方法是Amsel法，也是目前国际公认诊断细菌性阴道炎的金标准方法，方法中论述，NSV(非特异性阴道炎)诊断标准以下四项指标满足任意三个(线索细胞是必要项)即为细菌性阴道炎。(1)pH＞4.5；(2)阴道分泌物均质稀薄；(3)胺试验阳性，即阴道分泌物有氨臭味或加入10％氢氧化钾有鱼腥味；(4)湿片镜检(400x)，出现线索细胞。而Nugent革兰染色评分，也被引用英国细菌性阴道病指导方针，同样作为国际诊断细菌性阴道炎的金标准方法，是20世纪90年代由RobeaNugent首先提出，之后被视为实验室诊断BV的金标准。Nugent革兰染色评分法是选定正常人和BV患者阴道分泌物中出现的4种优势菌形态并用半定量评估法对分泌物标本进行评分。4种优势菌形态的代表菌是乳酸杆菌(大型革兰阳性杆菌)、阴道加德纳菌和普雷沃菌(小型革兰阴性菌或球杆菌)、动弯杆菌(梭形弯曲杆菌)。通过阴道分泌物革兰氏染色涂片，在诊断BV时，从正常到BV，对乳酸杆菌、阴道加德纳杆菌、动弯杆菌，从0分到10分的打分系统。取阴道分泌物涂片进行革兰染色，油镜下(1000x)观察20个视野找线索细胞进行细菌评分。参照Nugent评分标准大于6分诊断为BV，4-6分属于中间态，小于4分属于正常，Nugent评分＝乳酸杆菌+加特纳杆菌或类杆菌+动弯杆菌。表1Nugent革兰染色评分法的优势在于更适用于临床研究及普查，可将阴道菌群分为正常态(0～3分)、过渡态(4～6分)和BV态(7～10分)；缺点是由于高比例的过渡态菌群而不易确定治愈率，并需培训专业人员，临床普及受到一定限制。脯氨酸氨基肽酶(PIP)是由阴道加德纳菌、动弯杆菌和其他一些厌氧菌产生，是BV相关病原体所分泌的特异性标志酶，同时也是诊断细菌性淋球菌的辅助手段，故阴道分泌物中存在脯氨酸氨基肽酶活性即可诊断BV。脯氨酸氨基肽酶检测试纸的诊断原理是阴道分泌物中BV相关病原体所分泌的脯氨酸氨基肽酶在室温条件下分解底物L-脯氨酰基-β-萘胺(L-Prolyl-β-naphthylamide)并显示颜色变化，在有脯氨酸氨基肽酶底物和色原的试纸上进行，将采样后的植绒拭子在细胞保存液中进行充分涮洗，将涮洗后的样本滴加至检测试纸上显现红色或黄色变化则表示BV阳性，若无颜色变化则表示为BV阴性。在阴道微生态菌群中，普雷沃菌、部分加德纳菌和拟杆菌是唾液酸苷酶活性增加的主要病原菌，而部分加德纳菌、动弯杆菌和其他一些厌氧菌则具有脯氨酸氨基肽酶活性，所以应用唾液酸苷酶结合脯氨酸氨基肽酶判断细菌性阴道病更准确和完善，能够检测95％以上的细菌性阴道病。虽然目前临床上诊断BV仍沿用Amsel金标准方法，但在临床实践中上述诊断方法实际操作较为烦琐、费时且要借助大量的主观判断，对观察者的技能有较高的依赖性。此外，诊断时容易受阴道灌洗、近期性生活及炎症细胞的干扰，阳性标准难以统一。
技术实现思路
本专利技术要解决现有技术中的技术问题，提供一种脯氨酸氨基肽酶检测试纸的制备方法，本专利技术制备的检测试纸具有检测速度快，灵敏度高、特异性好的优势，与类似产品相比操作简单，适宜普及。为了解决上述技术问题，本专利技术的技术方案具体如下：一种脯氨酸氨基肽酶检测试纸的制备方法，包括以下步骤：步骤1、浸液的制备所述浸液包括底物、缓冲溶液、稳定剂和分散剂；将底物溶解于带有缓冲溶液、稳定剂和分散剂的溶液中，制备得到所述浸液；所述底物为脯氨酰类衍生物；所述稳定剂为海藻糖、半乳糖或者阿拉伯糖；所述分散剂为PVP-K90、PEG-2000、PEG-4000和PEG-6000中的一种或多种；所述缓冲溶液为柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液、哌嗪-1,4-乙二磺酸缓冲液(PIPES)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液(HEPES)、N-(2-乙酰胺基)-2-亚氨基二乙酸缓冲液(ADA)、N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙烷磺酸缓冲液(ACES)、2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲液(MES)、3-(N-吗啡啉)丙磺酸缓冲液(MOPS)或者3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液(MOPSO)；步骤2、检测试纸的制备用步骤1制备的浸液、采用浸渍干燥机自动化干燥方法制备检测试纸；所述浸渍干燥机温度设定：开机后将设备温度主加热设定70-90℃，副加热设定50-70℃，待主机加热温度达到70-90℃，各干燥室温度达到58-62℃时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：6.0-12.0Hz。在上述技术方案中，步骤2具体包括以下步骤：(1)按开机流程将浸渍干燥机打开，开机后将设备温度主加热设定70-90℃，副加热设定50-70℃，待主机加热温度达到70-90℃，各干燥室温度达到58-62℃时开始浸液；(2)将滤纸进行悬挂，浸液槽安装好；(3)将步骤1配制好的浸液倒入浸渍槽中，浸液量应在浸渍槽的1/2处，调节浸液注入的速度；(4)开启走纸开关，用压纸轮将滤纸浸入浸液中，记录浸液位置高度；浸渍干燥机走速设定：6.0-12.0Hz；(5)待滤纸全部从干燥室走出，关闭走纸开关，将滤纸做好标识，放入装有干燥剂的自封袋中即可。在上述技术方案中，浸渍干燥机的主加热设定为75℃-85℃。在上述技术方案中，所述底物为L-脯氨酰对硝基苯三氟乙酸盐、N-苷氨酰-脯氨酰对硝基苯胺-对甲苯磺酸盐、甘氨酸-脯氨酰-4-甲氧基-β-萘胺盐酸盐、N-(2-苯甲酰苯基)-D-脯氨酰胺、N-(2-噻吩磺酰基)-L-脯氨酰胺三氟乙酸盐、(2R)-N-(2-苯甲酰基苯基)-1-(苯基甲基)-2-吡咯烷甲酰胺、Z-Gly-甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺或者L-脯氨酸-α-萘胺。在上述技术方案中，所述底物的浓度为1.00-20.00mg/mL，所述稳定剂的浓度为1.00-20.00mg/mL，所述分散剂的浓度为1.00-20.00mg/mL，所述缓冲溶液的浓度为10.0-100.0mM、pH范围在6.0-9.0。在上述技术方案中，所述缓冲溶液的浓度为50.0-70.0mM、pH范围在6.5-8.5。在上述技术方案中，检测体系pH值为6.5-8.5。在上述技术方案中，所述滤纸类型为7218型滤纸、31ET型滤纸、3MM型滤纸、526型滤纸或319型滤纸。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供的脯氨酸氨基肽酶检测试纸的制备方法为一步浸液法，操作方法简便、节省工时，灵敏度高，配方中所用缓冲液廉价易配易得；浸液中底物为脯氨酰类衍生物，有良好的灵敏度；分散剂PVP-K90、PEG-2000、PEG-4000、PEG-6000单独或联合使用可以增加试纸的分散能本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脯氨酸氨基肽酶检测试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、浸液的制备所述浸液包括底物、缓冲溶液、稳定剂和分散剂；将底物溶解于带有缓冲溶液、稳定剂和分散剂的溶液中，制备得到所述浸液；所述底物为脯氨酰类衍生物；所述稳定剂为海藻糖、半乳糖或者阿拉伯糖；所述分散剂为PVP‑K90、PEG‑2000、PEG‑4000和PEG‑6000中的一种或多种；所述缓冲溶液为柠檬酸‑柠檬酸三钠缓冲液、哌嗪‑1,4‑乙二磺酸缓冲液、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、N‑(2‑乙酰胺基)‑2‑亚氨基二乙酸缓冲液、N‑(2‑乙酰氨基)‑2‑氨基乙烷磺酸缓冲液、2‑(N‑吗啉基)乙磺酸缓冲液、3‑(N‑吗啡啉)丙磺酸缓冲液或者3‑(N‑吗啉基)‑2‑羟基丙磺酸缓冲液；步骤2、检测试纸的制备用步骤1制备的浸液、采用浸渍干燥机自动化干燥方法制备检测试纸；所述浸渍干燥机温度设定：开机后将设备温度主加热设定70‑90℃，副加热设定50‑70℃，待主机加热温度达到70‑90℃，各干燥室温度达到58‑62℃时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：6.0‑12.0Hz。

【技术特征摘要】
1.一种脯氨酸氨基肽酶检测试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、浸液的制备所述浸液包括底物、缓冲溶液、稳定剂和分散剂；将底物溶解于带有缓冲溶液、稳定剂和分散剂的溶液中，制备得到所述浸液；所述底物为脯氨酰类衍生物；所述稳定剂为海藻糖、半乳糖或者阿拉伯糖；所述分散剂为PVP-K90、PEG-2000、PEG-4000和PEG-6000中的一种或多种；所述缓冲溶液为柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液、哌嗪-1,4-乙二磺酸缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、N-(2-乙酰胺基)-2-亚氨基二乙酸缓冲液、N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙烷磺酸缓冲液、2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啡啉)丙磺酸缓冲液或者3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液；步骤2、检测试纸的制备用步骤1制备的浸液、采用浸渍干燥机自动化干燥方法制备检测试纸；所述浸渍干燥机温度设定：开机后将设备温度主加热设定70-90℃，副加热设定50-70℃，待主机加热温度达到70-90℃，各干燥室温度达到58-62℃时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：6.0-12.0Hz。2.根据权利要求1所述的脯氨酸氨基肽酶检测试纸的制备方法，其特征在于，步骤2具体包括以下步骤：(1)按开机流程将浸渍干燥机打开，开机后将设备温度主加热设定70-90℃，副加热设定50-70℃，待主机加热温度达到70-90℃，各干燥室温度达到58-62℃时开始浸液；(2)将滤纸进行悬挂，浸液槽安装好；(3)将步骤1配制好的浸液倒入浸渍槽中，浸液量应在浸渍槽的1/2处，调节浸液注入的速度；(4)开启走纸开关，用压纸轮将滤纸浸入浸...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱子是，崔秀丽，孙德亚，林月，何浩会，孙成艳，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22