一种α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种α‑葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，浸液A、B均以水为溶剂，干燥时间一致，可以减少干燥工时；浸液A中缓冲体系为反应提供一个良好的反应环境；酸类物质为反应提供一个终止条件。浸液B中分散剂PVP‑K30、PVP‑K90、PEG‑2000、PEG‑4000、PEG‑6000单独或联合使用可以增加试纸的分散能力，有助于颜色的均匀分布；稳定剂蔗糖、海藻糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖、阿拉伯糖等可以保护样本中的酶类物质，提高检测的准确度。本发明专利技术的检测试纸制备过程简便，使用方便，容易操作，检测时不需要显微镜等特殊设备，结合迪瑞GMD‑S600全自动妇科分泌物分析系统，在8‑10min内即可出结果，具有检测速度快，灵敏度高、特异性好的优势，与类似产品相比操作简单，适宜普及。

Preparation of a test paper for detection of alpha-glucuronidase

【技术实现步骤摘要】
一种α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法
本专利技术涉及体外诊断试剂
，具体涉及一种α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法。
技术介绍
滴虫性阴道炎和霉菌性阴道炎均为妇科常见病、多发病。滴虫性阴道炎易发生于孕龄妇女，霉菌性阴道炎易发生在孕妇，糖尿病以及肥胖者。国外报道约有80％的孕妇阴道携带霉菌，携带者出现症状可高达60％-90％。对1000例孕妇进行白带图片检查，霉菌性检出率高达18.7％，其中6.6％有临床症状。而主要的发病是由于感染的阴道毛滴虫消耗了阴道内的糖原，破坏了阴道的自净防御机能，继发细菌感染所致。临床上，滴虫培养一直是国内及国际公认的诊断滴虫性阴道炎的金标准，但临床上检测滴虫基本上是常规镜检。显微镜镜检对镜检人员经验性要求高，且气温低可影响滴虫的活动性而导致漏检。经过临床研究表明，滴虫具有α-葡萄糖醛酸酶特异性酶，故可以通过检测α-葡萄糖醛酸酶来判定滴虫感染。真菌性阴道炎由真菌(主要为白色念珠菌属)感染引起，其发病率已高于滴虫性阴道炎。真菌有许多种，在人体最主要的为白色念珠菌属。常规镜检法检测念珠菌，镜下不易观察到念珠菌孢子及菌丝，极易漏检及误检。α-葡萄糖醛酸酶和脯氨酸氨基肽酶均为白色念珠菌的特异性酶。故干化学酶法的检测试纸，通过检测酶的活性来判定念珠菌感染，可以降低念珠菌漏检率。由于滴虫、真菌均分泌α-葡萄糖醛酸酶，所以采用干化学法检测α-葡萄糖醛酸酶对患者的临床检测具有一定的指导意义。α-葡萄糖醛酸酶作为木聚糖降解的限速酶之一，在木聚糖类半纤维素的生物转化中起着重要的作用，但是α-葡萄糖醛酸酶具有很低的生物活性，并且对人工生色底物不能分解，因此，到目前为止，该酶活性的测定还不能用人工生色底物来替代。常用于α-葡萄糖醛酸酶活性分析的底物主要有4-O-甲基葡萄糖醛基木二糖，木三糖(4-O-MeGlcAX2，4-O-MeGlcAX3)，4-D-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇(4-O-MeGlcA-xylitol)等天然底物，结果产生的4-O-甲基葡萄糖醛酸(4-O-MeGlcA)使得还原糖增加而显示出其活性，基于这种特点，使得这种检测α-葡萄糖醛酸酶的方法具有一定的特异性。最早采用的方法有气相色谱，离子交换色谱，薄层色谱和硼酸盐复合物离子交换色谱对酶降解产物进行分离。其中离子交换色谱是检测4-O-甲基葡萄糖醛酸酶活性的有效工具，但是，该法操作比较繁琐，不利于指导滴虫性阴道炎和霉菌性阴道炎的临床检测。
技术实现思路
本专利技术要解决现有技术中的技术问题，提供一种α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，制备的检测试纸具有检测速度快，灵敏度高、特异性好的优势，与类似产品相比操作简单，适宜普及。为了解决上述技术问题，本专利技术的技术方案具体如下：一种α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，包括以下步骤：步骤1、浸液的制备浸液A包括底物、缓冲溶液和辅助试剂；将底物溶解于带缓冲溶液和辅助试剂的溶液中，得到浸液A；所述底物为4-O-甲基葡萄糖基木寡糖、或者其不同糖链衍生物，或者为4-O-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇、或者其衍生物；所述缓冲溶液为磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液或者柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；所述辅助试剂为酸类物质醋酸钠、硫酸钠、氯化钠或者酒石酸；浸液B包括显色剂、稳定剂和分散剂；将显色剂溶于含有稳定剂和分散剂的水溶液中，制备得到浸液B；所述显色剂为盐类试剂砷酸钠或者钼酸铵；所述稳定剂为蔗糖、海藻糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖或者阿拉伯糖；所述分散剂PVP-K30、PVP-K90、PEG-2000、PEG-4000和PEG-6000中的一种或者多种；步骤2、检测试纸的制备步骤2-1、用步骤1的浸液A浸润滤纸后进行干燥处理，干燥的温度为60℃-80℃；步骤2-2、用浸液B浸润步骤2-1的滤纸后进行干燥处理，干燥温度为60℃-80℃，即制备得到α-葡萄糖醛酸酶检测试纸。在上述技术方案中，所述底物为4-O-甲基葡萄糖基木二糖、4-O-甲基葡萄糖基木三糖、4-O-甲基葡萄糖基木四糖、4-O-甲基葡萄糖基木五糖或4-O-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇。在上述技术方案中，所述底物的浓度为20.0-60.0mg/mL，缓冲溶液的浓度为0.05-2mM、pH为4.0-9.0，辅助试剂的浓度为30.0-50.0mg/mL。在上述技术方案中，所述缓冲溶液的浓度为0.75-1.5mM、pH范围在5.0-8.0。在上述技术方案中，所述显色剂的浓度为15.0-100.0mmol/L，稳定剂的浓度为1.00-20.00mg/mL，分散剂的浓度为1.00-20.00mg/mL。在上述技术方案中，步骤2-1中干燥温度为65℃-75℃。在上述技术方案中，步骤2-2中干燥温度为65℃-75℃。在上述技术方案中，检测体系的pH值为5.0-8.0。在上述技术方案中，所述滤纸的类型为7218型滤纸、31ET型滤纸、3MM型滤纸或者526型滤纸。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供的α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，浸液A、B均以水为溶剂，干燥时间一致，可以减少干燥工时；浸液A中缓冲体系为反应提供一个良好的反应环境；酸类物质为反应提供一个终止条件。浸液B中分散剂PVP-K30、PVP-K90、PEG-2000PEG-4000、PEG-6000单独或联合使用可以增加试纸的分散能力，有助于颜色的均匀分布；稳定剂蔗糖、海藻糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖、阿拉伯糖等可以保护样本中的酶类物质，提高检测的准确度。本专利技术制备的α-葡萄糖醛酸酶检测试纸可作为真菌性阴道炎及滴虫性阴道炎的辅助评判指标，并结合pH值联合对阴道病类别进行准确划分，联合评判阴道炎症更具有优势，经大量临床实验证实，有形成分与干化学α-葡萄糖醛酸酶试纸之间并无完全对应关系，显微镜下无有形成分含有滴虫、孢子、菌丝等，而干化学结果为阳性，原因在于医生在采集样本的过程中操作方法，采样位置均会影响有形结果，在干化学试纸法主要检测患者阴道中微生物分泌的酶类物质，检测结果更准确，并可以实现预防的诊断意义，而目前滴虫培养一直是国内及国际公认的诊断滴虫性阴道炎的金标准，临床上检测滴虫及真菌多为常规镜检方法。所以有形成分与α-葡萄糖醛酸酶干化学法结果之间相互佐证，相辅相成，联合评判，对临床诊断具有重大意义。本专利技术依据4-O-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇为底物，阴道微生态环境中存在α-葡萄糖醛酸酶，在此酶的水解作用下，释放出4-O-甲基葡萄糖醛酸(4-O-MeGlcA)，产生的4-O-甲基葡萄糖醛酸(4-O-MeGlcA)与砷钼酸钠生成蓝色物质，检测分泌物样本中α-葡萄糖醛酸酶活性，呈色深度与活性成正比。本专利技术中试剂配制简便，使用方便，容易操作，检测时不需要显微镜等特殊设备，结合迪瑞GMD-S600全自动妇科分泌物分析系统，在8-10min内即可出结果，具有检测速度快，灵敏度高、特异性好的优势，与类似产品相比操作简单，适宜普及。附图说明下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细说明。图1为本专利技术制备的α-葡萄糖醛酸酶检测试纸成品的结构示意图。图2为本专利技术采用浸渍干燥机自动化干燥方法制备检测试纸的干燥流程图。具体实施方式本专利技术的专利技术思想为：本专利技术的目的是提供一种α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，本专利技术制备的α-葡萄糖醛酸酶检本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种α‑葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、浸液的制备浸液A包括底物、缓冲溶液和辅助试剂；将底物溶解于带缓冲溶液和辅助试剂的溶液中，得到浸液A；所述底物为4‑O‑甲基葡萄糖基木寡糖、或者其不同糖链衍生物，或者为4‑O‑甲基葡萄糖醛酸基木糖醇、或者其衍生物；所述缓冲溶液为磷酸氢二钠‑顺丁烯二酸缓冲液、磷酸氢二钠‑柠檬酸缓冲液或者柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液；所述辅助试剂为酸类物质醋酸钠、硫酸钠、氯化钠或者酒石酸；浸液B包括显色剂、稳定剂和分散剂；将显色剂溶于含有稳定剂和分散剂的水溶液中，制备得到浸液B；所述显色剂为盐类试剂砷酸钠或者钼酸铵；所述稳定剂为蔗糖、海藻糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖或者阿拉伯糖；所述分散剂PVP‑K30、PVP‑K90、PEG‑2000、PEG‑4000和PEG‑6000中的一种或多种；步骤2、检测试纸的制备步骤2‑1、用步骤1的浸液A浸润滤纸后进行干燥处理，干燥的温度为60℃‑80℃；步骤2‑2、用浸液B浸润步骤2‑1的滤纸后进行干燥处理，干燥温度为60℃‑80℃，即制备得到α‑葡萄糖醛酸酶检测试纸。

【技术特征摘要】
1.一种α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、浸液的制备浸液A包括底物、缓冲溶液和辅助试剂；将底物溶解于带缓冲溶液和辅助试剂的溶液中，得到浸液A；所述底物为4-O-甲基葡萄糖基木寡糖、或者其不同糖链衍生物，或者为4-O-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇、或者其衍生物；所述缓冲溶液为磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液或者柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；所述辅助试剂为酸类物质醋酸钠、硫酸钠、氯化钠或者酒石酸；浸液B包括显色剂、稳定剂和分散剂；将显色剂溶于含有稳定剂和分散剂的水溶液中，制备得到浸液B；所述显色剂为盐类试剂砷酸钠或者钼酸铵；所述稳定剂为蔗糖、海藻糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖或者阿拉伯糖；所述分散剂PVP-K30、PVP-K90、PEG-2000、PEG-4000和PEG-6000中的一种或多种；步骤2、检测试纸的制备步骤2-1、用步骤1的浸液A浸润滤纸后进行干燥处理，干燥的温度为60℃-80℃；步骤2-2、用浸液B浸润步骤2-1的滤纸后进行干燥处理，干燥温度为60℃-80℃，即制备得到α-葡萄糖醛酸酶检测试纸。2.根据权利要求1所述的α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，其特征在于，所述底物为4-O-甲基葡萄糖基木二糖、4-O-甲基葡萄糖基木三糖、4-O-甲基葡萄糖基木...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱子是，崔秀丽，孙德亚，林月，何浩会，孙成艳，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22