血管母细胞瘤复发跟踪诊断试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种血管母细胞瘤复发跟踪诊断试剂盒，用于检测血管母细胞瘤复发的标记物的浓度，该标记物包括microRNA‑365和microRNA‑517，具有这样的特征，包括：用于检测microRNA‑365的第一引物，该第一引物的序列如SEQ NO:1所示；以及用于检测microRNA‑517的第二引物，该第二引物的序列如SEQ NO:2所示。因此，通过本发明专利技术的试剂盒能够不需要侵入性的手段、只需要通过血液就能快速、可靠地去对血管母细胞瘤是否会复发作出诊断，诊断结果灵敏度高、特异性好。

Tracking Diagnostic Kit for Hemangioblastoma Recurrence

【技术实现步骤摘要】
血管母细胞瘤复发跟踪诊断试剂盒
本专利技术涉及一种肿瘤复发诊断试剂盒，具体涉及一种血管母细胞瘤复发跟踪诊断试剂盒。
技术介绍
血管母细胞瘤(HB)是中枢神经系统(CNS)中罕见的良性血管瘤，占CNS肿瘤的1-2％。HB的病理特征是密集的毛细血管，具有遗传缺陷，被增生的基质细胞包围。HB可分为家族性肿瘤(作为vonHippel-Lindau(VHL)疾病的一部分，具有VHL的遗传突变)，以及单独的散发性肿瘤(通常具有VHL基因的体细胞突变)。大部分HB偶尔发生(75％)，其余为家族性HB(25％)。目前，散发性HBs的主要治疗方法是手术切除；然而，它对脑干HB的手术治疗构成了巨大的挑战。目前HB的早期检测主要采用组织学的检测方法进行，这种检测方法虽然能够显著降低HB的死亡率，但由于侵入性诊断程序、灵敏度不足以及特异性不足，其应用仍然有限。因此，临床上的早期干预迫切需要新颖、可靠的生物标志物以及检测手段来对HB进行诊断。微小RNA(miRNA)是一类长度为19-25个核苷酸的非编码RNA序列，可以通过在转录后水平调节基因mRNA表达来特异性调节关键生物过程。miRNA的失调在肿瘤发展的细胞功能中起着至关重要的作用，例如细胞增殖，凋亡和侵袭。最近，据报道，肿瘤组织中miRNA表达的改变为各种癌症的诊断和预后提供了巨大的潜力。此外，某些miRNA可以通过一些未知的机制从癌组织分泌到循环中，因此可以作为癌症诊断的生物标志物。在HB组织中，miRNA如miRNA-196a-2参与其发病机制。一些miRNA，如miR-9和miR-200a，在血管母细胞瘤和转移性透明细胞肾细胞癌之间差异表达，这两种疾病具有相似的组织学特征。循环miRNA也与视网膜血管母细胞瘤的疾病活动和治疗反应相关，如用普萘洛尔能够治疗血浆miRNA-210减少。然而，miRNA是否可以用作血管母细胞瘤的非侵入性生物标志物，进而诊断血管母细胞瘤复发的可能性尚不清楚。
技术实现思路
本专利技术是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种血管母细胞瘤复发跟踪诊断试剂盒。本专利技术提供了一种血管母细胞瘤复发跟踪诊断试剂盒，用于检测血管母细胞瘤复发的标记物的浓度，该标记物包括microRNA-365和microRNA-517，具有这样的特征，包括：用于检测microRNA-365的第一引物，该第一引物的序列如SEQNO:1所示；以及用于检测microRNA-517的第二引物，该第二引物的序列如SEQNO:2所示。在本专利技术提供的血管母细胞瘤复发跟踪诊断试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，microRNA-365的序列如SEQNO:3所示，microRNA-517的序列如SEQNO:4所示。在本专利技术提供的血管母细胞瘤复发跟踪诊断试剂盒中，还可以具有这样的特征，还包括：用于从血浆中提取RNA并进行实时定量聚合酶链反应的所有试剂。在本专利技术提供的血管母细胞瘤复发跟踪诊断试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，对RNA进行实时定量聚合酶链反应的试剂包括：dNTPs、逆转录酶、RNase抑制剂、无核酸酶水以及PCRMasterMix。专利技术的作用与效果根据本专利技术所涉及的血管母细胞瘤复发跟踪诊断试剂盒，因为包括第一引物和第二引物，通过第一引物能够检测血液中microRNA-365的浓度，通过第二引物能够检测血液中microRNA-517的浓度，而根据microRNA-365和microRNA-517的浓度能够对血管母细胞瘤是否会复发作出诊断。因此，通过本专利技术的试剂盒能够不需要侵入性的手段、只需要通过血液就能快速、可靠地去对血管母细胞瘤是否会复发作出诊断，诊断结果灵敏度高、特异性好。附图说明图1为本专利技术的实施例三中血液中miRNA浓度结果图；图2为本专利技术的实施例三中血管母细胞瘤和邻近非肿瘤组织中miRNA浓度结果图；图3为本专利技术的实施例三中ROC分析结果图；以及图4为本专利技术的实施例三中促炎细胞因子的ELISA测定结果图。具体实施方式为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，以下实施例结合附图对本专利技术血管母细胞瘤复发跟踪诊断试剂盒作具体阐述。以下实施例中所涉及的Trizol试剂盒、MicroRNA反转录试剂盒以及ELISA试剂盒均为市售试剂盒。<实施例一>本实施例提供了一种血管母细胞瘤复发跟踪诊断试剂盒，该试剂盒包括：用于从血浆中提取RNA的试剂、用于对RNA进行实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)的试剂、第一引物以及第二引物。其中，用于从血浆中提取RNA的试剂包括Trizol试剂盒(LifeTechnologies，Carlsbad，CA，USA)中的所有试剂。用于对RNA进行qRT-PCR的试剂包括：TaqManMicroRNA反转录试剂盒(Biosystems公司)、10倍逆转录缓冲液(NewEnglandBiolabs)、dNTPs、MultiScribe逆转录酶(美国ABIBiosystems公司)、RNase抑制剂(Invitrogen)、无核酸酶水以及PCRMasterMix(LifeTechnologiesInc)。其中，dNTPs的浓度为100mM。PCRMasterMix为TaqMan2×UniversalPCRMasterMix。第一引物用于进行qRT-PCR从而检测microRNA-365的浓度。第一引物的序列如SEQNO:1所示。microRNA-365的序列如SEQNO:3所示。microRNA-365的NCBILocation为Chr.17:29902430-29902540[+]。第二引物用于进行qRT-PCR从而检测microRNA-517的浓度。第二引物的序列如SEQNO:2所示。microRNA-517的的序列如SEQNO:4所示。microRNA-517的NCBILocation为Chr.19:54215522-54215608[+]。<实施例二>本实施例提供了一种利用实施例一中的血管母细胞瘤复发跟踪诊断试剂盒对人的血液进行检测，从而诊断血管母细胞瘤是否复发的方法。该方法包括以下步骤：步骤一、血液样品的采集。使用含EDTA的试管，收集人的全血样品(5mL)。收集后立即在5000℃离心5分钟，从全血样品中分离得到无细胞血浆，以防止细胞核酸污染。然后将分离的血浆储存在-80℃。步骤二、RNA提取。使用Trizol试剂盒(LifeTechnologies，Carlsbad，CA，USA)并按照该试剂盒的指示从血浆中提取总RNA。用分光光度法(NanoDropND-1000；NanoDropTechnologies，Wilmington，USA)通过OD260的值测定确定总RNA的浓度(mg/mL)。将总RNA等分并储存在-80℃。步骤三、qRT-PCR。1、使用TaqManMicroRNAReverseTranscriptionKit(Biosystems公司)试剂盒将总RNA(1μg)逆转录成cDNA，得到cDNA溶液。其中，反转录(RT)反应体系(15μL)包括：总RNA(5μL)，10倍逆转录缓冲液(2.5μL)，100mMdNTPs(0.15μL)，MultiScribe逆转录酶(1μL)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种血管母细胞瘤复发跟踪诊断试剂盒，用于检测血管母细胞瘤复发的标记物的浓度，该标记物包括microRNA‑365和microRNA‑517，其特征在于，包括：用于检测所述microRNA‑365的第一引物，该第一引物的序列如SEQ NO:1所示；以及用于检测所述microRNA‑517的第二引物，该第二引物的序列如SEQ NO:2所示。

【技术特征摘要】
1.一种血管母细胞瘤复发跟踪诊断试剂盒，用于检测血管母细胞瘤复发的标记物的浓度，该标记物包括microRNA-365和microRNA-517，其特征在于，包括：用于检测所述microRNA-365的第一引物，该第一引物的序列如SEQNO:1所示；以及用于检测所述microRNA-517的第二引物，该第二引物的序列如SEQNO:2所示。2.根据权利要求1所述的血管母细胞瘤复发跟踪诊断试剂盒，其特征在于：其中，所述microRNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：马德选，王莹，
申请(专利权)人：复旦大学附属华山医院，
类型：发明
国别省市：上海,31