一种维持和恢复人毛乳头细胞原始性的方法及应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种维持和恢复人毛乳头细胞原始性的方法及应用。本发明专利技术利用阳离子脂质体介导的基因转染技术，将外源性hTERT基因导入体外培养的正常人DPC，成功地建立了永生化人DPC系DPC‑hTERT；DPC‑hTERT基本上是正常细胞而无明显转化特征，保持了正常人DPC的生物学和功能学特征；可望为深入研究DPC生物学功能变化的调控机制提供理想的细胞模型，为构建含有毛囊等附件的全功能组织工程皮肤提供充足的种子细胞，从而维持和恢复人毛乳头细胞原始性；同时，本发明专利技术提供的毛乳头细胞分离方法对整块头皮进行批量处理,从中分离出毛乳头细胞,具有高效快速的显著效果。

A Method for Maintaining and Restoring the Primitiveness of Human Dermal Papilla Cells and Its Application

【技术实现步骤摘要】
一种维持和恢复人毛乳头细胞原始性的方法及应用
本专利技术属于生物
，尤其涉及一种维持和恢复人毛乳头细胞原始性的方法及应用。
技术介绍
毛发是由毛球下部毛母质细胞分化而来，分为硬毛和毳毛。硬毛粗硬，色泽浓，含髓质，又分为长毛和短毛，长毛如头发、腋毛等；短毛如眉毛、鼻毛等。毳毛细软，色泽淡，没有髓质，多见于躯干。人体大部分都覆盖毛发，而手掌、脚底、口唇、乳头和部分外生殖器部位没有毛发。毛的粗细、长短、疏密与颜色随部位、年龄、性别、生理状态、种族等而有差异，正常人有6万～10万根头发。毛发由毛干和毛根两部分组成。伸出皮肤外面的部分称为毛干，埋在皮肤内部的称为毛根。毛根周围包有上皮和结缔组织组成的毛囊，其四周含有丰富的血管和神经，基部增大呈球状，叫作毛球。毛球底部凹陷，内为富含血管和神经的结缔组织，称为毛乳头。若毛乳头破坏或萎缩，则毛发不能生长。毛根与皮肤表面所成的钝角侧有一束斜行的平滑肌，称立毛肌。立毛肌的一端附着在毛囊上，另一端终止于真皮浅部，其受交感神经支配，收缩时使毛发竖立，皮肤呈现鸡皮样改变。然而，现有维持和恢复人毛乳头细胞原始性通过转染病毒基因或癌基因诱导细胞永生化，通过这本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种维持和恢复人毛乳头细胞原始性的方法，其特征在于，所述维持和恢复人毛乳头细胞原始性的方法包括以下步骤：步骤一，毛乳头细胞分离培养；步骤二，采用脂质体转染法，将空载体质粒pIRES2‑EGFP和含有hTERT基因的质粒pIRES2‑EGFP‑hTERT分别导入体外培养的第3代正常人DPC，经G418筛选得到阳性克隆，连续传代培养；分别采用PCR和RT‑PCR法检测转染细胞内hTERT基因的整合与表达，采用端粒酶重复序列扩增(TRAP)‑ELISA法检测转染细胞的端粒酶活性；步骤三，取转染pIRES2‑EGFP‑hTERT第30代DPC，在倒置显微镜下观察细胞形态和生长情况；采用免疫组化检测...

【技术特征摘要】
1.一种维持和恢复人毛乳头细胞原始性的方法，其特征在于，所述维持和恢复人毛乳头细胞原始性的方法包括以下步骤：步骤一，毛乳头细胞分离培养；步骤二，采用脂质体转染法，将空载体质粒pIRES2-EGFP和含有hTERT基因的质粒pIRES2-EGFP-hTERT分别导入体外培养的第3代正常人DPC，经G418筛选得到阳性克隆，连续传代培养；分别采用PCR和RT-PCR法检测转染细胞内hTERT基因的整合与表达，采用端粒酶重复序列扩增(TRAP)-ELISA法检测转染细胞的端粒酶活性；步骤三，取转染pIRES2-EGFP-hTERT第30代DPC，在倒置显微镜下观察细胞形态和生长情况；采用免疫组化检测α-SMA在细胞内的表达，采用细胞生长曲线分析和细胞周期测定观察细胞的增殖特征，采用染色体核型分析、软琼脂克隆形成实验和裸鼠致瘤实验观察细胞的转化特征，采用ELISA法检测培养上清中血管内皮生长因子和肝细胞生长因子浓度观察细胞的分泌功能；步骤四，将转染pIRES2-EGFP-hTERT第30代DPC与刚分离的毛囊上皮细胞混合后直接注射到裸鼠背部皮下观察其在体内诱导毛囊形成的能力。2.如权利要求1所述的维持和恢复人毛乳头细胞原始性的方法，其特征在于，所述毛乳头细胞分离方法如下：(1)头皮的...

【专利技术属性】
技术研发人员：林博杰，
申请(专利权)人：广西医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：广西,45