【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】羟腈裂解酶
本专利技术涉及来自千足虫(millipede)的羟腈裂解酶(hydroxynitrilelyase，HNL)基因的克隆方法、通过这些基因的表达生产的酶、以及使用了表达酶的光学活性氰醇(cyanohydrin)的制造方法。相关申请的相互参照本申请主张2016年3月1日申请的日本特愿2016-038640号的优先权，其全部记载作为公开特别援引到此。
技术介绍
光学活性氰醇是医药、精细化工的制造中重要的中间体。作为氰醇的制造方法，提出了使羟腈裂解酶作用于醛或酮和氰化物供体(cyanidedonor)(专利文献1)的方法。从马陆(Chamberliniushualienensis)中发现的(R)-羟腈裂解酶具有比从植物中发现的羟腈裂解酶更高的比活性和对热和pH的更优异的稳定性(专利文献2、非专利文献1)。专利文献1：日本特开2000-217590号公报专利文献2：日本特开2015-167477号公报非专利文献1：Dadashipur等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.112，10605-10610(2015)
技术实现思路
专利技术所要解决的课题专利...
【技术保护点】
1.一种方法，其为来自千足虫的羟腈裂解酶即HNL基因的制造方法，其包含：从属于倍足纲的生物中存在的基因中，选择具有编码来自千足虫的HNL的保守氨基酸序列TAX
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.01 JP 2016-0386401.一种方法，其为来自千足虫的羟腈裂解酶即HNL基因的制造方法，其包含：从属于倍足纲的生物中存在的基因中，选择具有编码来自千足虫的HNL的保守氨基酸序列TAX1DIX2G(序列号15)的碱基序列和编码VPNGDKIH(序列号16)的碱基序列中的至少一种的基因，其中，X1为L或F，X2为R或K。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述基因的选择通过将属于倍足纲的生物中存在的基因作为模板，使用由编码所述保守氨基酸序列的碱基序列构成的至少1个DNA作为引物进行PCR来实施。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述基因的选择通过将属于倍足纲的生物中存在的基因作为模板，使用由编码所述保守氨基酸序列的碱基序列构成的DNA作为探针，进行DNA-DNA杂交来实施。4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述基因的选择通过对属于倍足纲的生物中存在的基因进行测序，从被测序的基因序列中选择具有编码所述保守氨基酸序列的碱基序列的基因来实施。5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，属于倍足纲的生物中存在的基因是从属于倍足纲的生物中提取的基因组DNA或由属于倍足纲的生物中提取的RNA通过逆转录而得到的cDNA。6.根据权利要求2所述的方法，其中，所述引物为下述的缩聚引物HNL-FW和HNL-RV、或HNL-FW2及HNL-RV2，HNL-FW：CTGCAACTGCATTGGAMATTCAAGG(序列号21)、HNL-RV：ATGAATCTTRTCRCCGTTTGGAAC(序列号22)、HNL-FW2：SSAACTGCATTGGAYATMMRAGG(序列号23)、HNL-RV2：ATGAATCTTRTCRCCRTTTGGRAC(序列号24)。7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，属于倍足纲的生物为Nedyopustambanusmangaesinus、雅丽酸带马陆(Oxidusgracilis)、Parafontariafalcifera、Parafontarialaminata、Parafontariatonominea、或Riukiaria。8.一种方法，其为来自千足虫的HNL的制造方法，其包含：通过权利要求1～7中任一项所述的方法制备来自千足虫的HNL基因，使得到的HNL基因在宿主细胞内表达，得到HNL。9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述宿主细胞为昆虫培养细胞。10.根据权利要求8所述的方法，其中，所述宿主细胞为具有二硫键异构酶表达能力的大肠杆菌。11.一种基因，其具有下述(4)～(6)中的任一个碱基序列，(4)具有序列表的序列号2、4、6、8、10、12、14、84、86、88或90中记载的碱基序列，且编码具有HNL活性...
【专利技术属性】
技术研发人员：浅野泰久，山口拓也，
申请(专利权)人：公立大学法人富山县立大学，
类型：发明
国别省市：日本,JP
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