新型抗人MUC1抗体Fab片段制造技术

本发明专利技术提供被期待对癌症的诊断和/或治疗、特别是乳腺癌或膀胱癌的诊断和/或治疗有用的抗人MUC1抗体Fab片段、以及使用包含该Fab片段的复合物的诊断手段和/或治疗手段。一种抗人MUC1抗体Fab片段和包含该Fab片段的复合物，所述抗人MUC1抗体Fab片段包含重链片段和轻链，所述重链片段包含由序列号8或10所示的氨基酸序列构成的重链可变区，所述轻链包含由序列号12所示的氨基酸序列构成的轻链可变区。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型抗人MUC1抗体Fab片段
本专利技术涉及新型抗人MUC1抗体Fab片段。另外，本专利技术涉及包含该抗人MUC1抗体Fab片段的诊断用和/或治疗用组合物、以及使用该Fab片段诊断和/或治疗癌症的方法。
技术介绍
粘蛋白1(Mucin1：MUC1)是在构成乳腺、气管和消化道等的上皮组织的上皮细胞的内腔侧表达的膜结合型糖蛋白(Nat.Rev.Cancer,2004Jan；4(1):45-60.)。MUC1在乳腺癌(Mod.Pathol.,2005Oct；18(10):1295-304.)、肺癌(Hum.Pathol.,2008Jan；39(1):126-36.)、大肠癌(Int.J.Oncol.,2000Jan；16(1):55-64.)、膀胱癌(PLoSOne,2014Mar；9(3):e92742.)、皮肤癌(Histopathology,2000Sep；37(3):218-23.)、甲状腺癌(J.Pathol.,2003Jul；200(3):357-69.)、胃癌(J.Pathol.,2000Mar；190(4):437-43.)、胰腺癌(Int.J.Oncol.,2004Jan；24(1):107-13.)、肾癌(Mod.Pathol.,2004Feb；17(2):180-8.)、卵巢癌(Gynecol.Oncol.,2007Jun；105(3):695-702.)和宫颈癌(Am.J.Clin.Pathol.,2004Jul；122(1):61-9.)等的癌细胞中过表达，MUC1作为用于检测癌症病灶的靶分子是有用的(Nat.Rev.Cancer,2004Jan；4(1):45-60.、Pathol.Res.Pract.,2010Aug15；206(8):585-9.)。MUC1中，存在于细胞外结构域的20个氨基酸的串联重复序列HGVTSAPDTRPAPGSTAPPA(序列号15)的第9位的苏氨酸被O-糖基化。已知在癌细胞中，该O-糖基化不完全，以癌症特异性方式发生T(Galβ1-3GalNAcα1-O-Ser/Thr)、Tn(GalNAcα1-O-Ser/Thr)和2,3ST(Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcα-O-Ser/Thr)等O-糖基化(专利文献1、非专利文献1)。正常组织的MUC1不接受这些癌症特异性O-糖基化，因此，人癌症特异性MUC1作为用于治疗人体内的各种癌症的靶分子特别有用。作为这样的抗人癌症特异性MUC1抗体，已知例如1B2抗体(专利文献1)、PankoMab抗体(非专利文献2)、5E5抗体(专利文献2)等。据报道，这些抗体中，与PankoMab抗体相比，1B2抗体对人癌症特异性MUC1的特异性高(专利文献1)。另外，据报道，1B2抗体的解离常数为3.7×10-10M(专利文献1)，5E5抗体的解离常数为1.7×10-9M(非专利文献1)。另一方面，对癌症病灶的可见化也有很大需求。首先，有早期发现癌症病灶的需求。在目前的X射线成像或超声、计算机断层成像(ComputedTomography：CT)、核磁共振成像(MagneticResonanceImaging：MRI)、正电子发射断层成像(PositronEmissionTomography：PET)、单光子发射计算机断层成像(SinglePhotonEmissionComputedTomography：SPECT)等诊断方式中，无法以良好的灵敏度检测出微小癌。若能检测出微小癌，则在原发癌的情况下可以通过手术或放射线疗法治愈，即使是转移癌，通过早期的药物介入也能够延长寿命、治愈。其次，有鉴别癌症病灶与良性病变的需求。在目前的诊断方式中，将良性病变误诊为癌症病灶的情况很多。若能鉴别癌症病灶与良性病变，则能够减少不必要的活检。此外，对手术中的癌症病灶的可见化有需求。目前，在以乳腺癌和膀胱癌、皮肤癌为代表的癌症的手术中，由于无法准确地掌握癌症病灶的位置和扩散程度，因此无法将癌症病灶完全切除，存在在遗留有癌细胞的状态下结束手术的危险。此外，有掌握癌症病灶的确切位置的需求。即使由于血中的肿瘤标志物的升高而怀疑术后的复发和转移，由于以目前的诊断方式无法将微小的转移癌可见化，因此不清楚是否真正发生了转移、或者转移到了哪个器官，无法进行最佳治疗的选择。因此，使用与人癌症特异性MUC1特异性结合的抗体作为体内诊断剂、利用荧光成像和γ射线成像(PET、SPECT)等分子成像技术将癌症病灶可见化也是有用的。但是，迄今为止尚未已知使用抗人癌症特异性MUC1抗体作为体内诊断剂的示例。另外，对于使抗体与癌症治疗药结合而成的抗体药物有需求。抗体药物从能够将癌症治疗剂特异性地递送到癌症病灶这一点考虑作为副作用少的癌症治疗方法受到期待，已报道了使用结合有放射性同位素的抗体的放射免疫疗法(鹤尾隆著、“癌症的分子靶向治疗”南山堂出版、2008年9月15日发行、332～336页、J.Nucl.Med.,2016Jul；57(7):1105-11.、Nucl.Med.Biol.,2010Nov；37(8):949-55.)、使用结合有IRDye700DX的抗体的光免疫疗法(Nat.Med.,2011Dec；17(12):1685-91.)等。IRDye700DX是也能用于诊断的近红外荧光染料，据报道，使其与针对表达在癌细胞膜上的抗原的抗体结合，特异性地聚集在癌组织中后，照射近红外光，由此能够利用IRDye700DX所产生的光毒性效果以癌症特异性的方式诱导细胞死亡(Nat.Med.,2011Dec；17(12):1685-91.)。但是，到目前为止，尚未已知临床应用使抗人癌症特异性MUC1抗体与癌症治疗药结合而成的抗体药物的示例。通常抗体的血中半衰期长，给药至体内后，达到提供足以将癌症可见化的信号/背景比的肿瘤/血液比需要4天～5天的长时间(Clin.Pharmacol.Ther.,2010May；87(5):586-92.)。另外，抗体的Fc区域会引起抗体依赖性细胞毒作用(Antibody-DependentCellularCytotoxicity：ADCC)、补体依赖性细胞毒作用(Complement-DependentCytotoxicity：CDC)的药理作用(非专利文献1、Curr.Opin.Biotechnol.,2002Dec；13(6):609-14.)。另外，无论靶标如何，抗体都会高度聚集在肝脏中，但乳腺癌等的癌细胞多向肝脏转移，在对由远隔转移所致的全身的癌症病灶进行诊断时会妨碍肝转移的检测(Clin.Pharmacol.Ther.,2010May；87(5):586-92.)。例如，Fab、scFV、双抗体、微型抗体这样的低分子化的重组抗体片段由于组织渗透性高，因此容易到达病灶，可以期待使用大肠杆菌、酵母中的表达系统以低成本进行制造，因此可用作治疗用抗体，但另一方面，其具有血中半衰期短、经肾排泄的特征，因此还报道了作为诊断剂的应用(Nat.Biotechnol.,2005Sep；23(9):1126-36.)。现有技术文献专利文献专利文献1：WO2010/050528专利文献2：WO2008/040362非专利文献非专利文本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗人MUC1抗体Fab片段，其选自由下述(a)和(b)组成的组：(a)抗人MUC1抗体Fab片段，包含重链片段和轻链，所述重链片段包含由序列号8或序列号10所示的氨基酸序列构成的重链可变区，所述轻链包含由序列号12所示的氨基酸序列构成的轻链可变区；以及(b)抗人MUC1抗体Fab片段，包含重链片段和轻链，所述重链片段包含由序列号8或序列号10所示的氨基酸序列构成、且序列号8或序列号10的氨基酸序号1的谷氨酰胺被修饰为焦谷氨酸的重链可变区，所述轻链包含由序列号12所示的氨基酸序列构成的轻链可变区。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.18 JP 2016-2248111.一种抗人MUC1抗体Fab片段，其选自由下述(a)和(b)组成的组：(a)抗人MUC1抗体Fab片段，包含重链片段和轻链，所述重链片段包含由序列号8或序列号10所示的氨基酸序列构成的重链可变区，所述轻链包含由序列号12所示的氨基酸序列构成的轻链可变区；以及(b)抗人MUC1抗体Fab片段，包含重链片段和轻链，所述重链片段包含由序列号8或序列号10所示的氨基酸序列构成、且序列号8或序列号10的氨基酸序号1的谷氨酰胺被修饰为焦谷氨酸的重链可变区，所述轻链包含由序列号12所示的氨基酸序列构成的轻链可变区。2.如权利要求1所述的抗人MUC1抗体Fab片段，其选自由下述(a)和(b)组成的组：(a)抗人MUC1抗体Fab片段，包含由序列号2或序列号4所示的氨基酸序列构成的重链片段和由序列号6所示的氨基酸序列构成的轻链；以及(b)抗人MUC1抗体Fab片段，包含重链片段和轻链，所述重链片段由序列号2或序列号4所示的氨基酸序列构成、且序列号2或序列号4的氨基酸序号1的谷氨酰胺被修饰为焦谷氨酸，所述轻链由序列号6所示的氨基酸序列构成。3.如权利要求1所述的抗人MUC1抗体Fab片段，其选自由下述(a)和(b)组成的组：(a)抗人MUC1抗体Fab片段，包含重链片段和轻链，所述重链片段包含由序列号10所示的氨基酸序列构成的重链可变区，所述轻链包含由序列号12所示的氨基酸序列构成的轻链可变区；以及(b)抗人MUC1抗体Fab片段，包含重链片段和轻链，所述重链片段包含由序列号10所示的氨基酸序列构成、且序列号10的氨基酸序号1的谷氨酰胺被修饰为焦谷氨酸的重链可变区，所述轻链包含由序列号12所示的氨基酸序列构成的轻链可变区。4.如权利要求3所述的抗人MUC1抗体Fab片段，其选自由下述(a)和(b)组成的组：(a)抗人MUC1抗体Fab片段，包含由序列号4所示的氨基酸序列构成的重链片段和由序列号6所示的氨基酸序列构成的轻链；以及(b)抗人MUC1抗体Fab片段，包含重链片段和轻链，所述重链片段由序列号4所示的氨基酸序列构成、且序列号4的氨基酸序号1的谷氨酰胺被修饰为焦谷氨酸，所述轻链由序列号6所示的氨基酸序列构成。5.如权利要求4所述的抗人MUC1抗体Fab片段，其为包含由序列号4所示的氨基酸序列构成的重链片段和由序列号6所示的氨基酸序列构成的轻链的抗人MUC1抗体Fab片段。6.如权利要求4所述的抗人MUC1抗体Fab片段，其为包含由序列号4所示的氨基酸序列构成、且序列号4的氨基酸序号1的谷氨酰胺被修饰为焦谷氨酸的重链片段以及由序列号6所示的氨基酸序列构成的轻链的抗人MUC1抗体Fab片段。7.一种复合物，其包含一个以上的标记部和权利要求1至6中任一项所述的抗人MUC1抗体Fab片段。8.如权利要求7所述的复合物，其中，标记部为(i)配体和接头、(ii)配体、(iii)荧光染料和接头、或者(iv)荧光染料。9.如权利要求8所述的复合物，其中，标记部为(i)配体和接头或者(ii)配体。10.如权利要求9所述的复合物，其中，配体为下式(A)所表示的配体：式中，波状线表示与抗人MUC1抗体Fab片段或接头的结合。11.如权利要求10所述的复合物，其中，标记部为下式(A’)所表示的配体和接头：式中，波状线表示与抗人MUC1抗体Fab片段的结合。12.如权利要求11所述的复合物，其中，抗人MUC1抗体Fab片段借助其氨基与标记部末端C(＝S)基的碳原子结合。13.一种复合物，其选自由下述(a)至(c)组成的组：(a)抗人MUC1抗体Fab片段为权利要求5所述的抗人MUC1抗体Fab片段的权利要求12所述的复合物；(b)抗人MUC1抗体Fab片段为权利要求6所述的抗人MUC1抗体Fab片段的权利要求12所述的复合物；以及(c)作为上述(a)和上述(b)的混合物的复合物。14.如权利要求9至13中任一项所述的复合物，其中，进一步包含金属。15.如权利要求14所述的复合物，其中，金属为金属放射性同位素。16.如权利要求15所述的复合物，其中，金属为89Zr。17.如权利要求13所述的复合物，其中，进一步包含89Zr。18.如权利要求8所述的复合物，其中，标记部为(i)荧光染料和接头或者(ii)荧光染料。19.如权利要求18所述的复合物，其中，荧光染料为选自由下式(B)和下式(C)组成的组的荧光染料：式(B)和(C)中，波状线表示与抗人MUC1抗体Fab片段或接头的结合。20.如权利要求19所述的复合物，其中，波状线表示与抗人MUC1抗体Fab片段的结合，所述抗人MUC1抗体Fab片段借助其氨基与标记部末端C(＝O)基的碳原子结合。21.如权利要求20所述的复合物，其中，标记部为式(B)所表示的荧光染料。22.一种复合物，其选自由下述(a)至(c)组成的组：(a)抗人MUC1抗体Fab片段为权利要求5所述的抗人MUC1抗体Fab片段的权利要求21所述的复合物；(b)抗人MUC1抗体Fab片段为权利要求6所述的抗人MUC1抗体Fab片段的权利要求21所述的复合物；以及(c)作为上述(a)和上述(b)的混合物的复合物。23.如权利要求20所述的复合物，其中，标记部为式(C)所表示的荧光染料。24.一种复合物，其选自由下述(a)至(c)组成的组：(a)抗人MUC1抗体Fab片段为权利要求5所述的抗人MUC1抗体Fab片段的权利要求23所述的复合物；(b)抗人MUC1抗体Fab片段为权利要求6所述的抗人MUC1抗体Fab片段的权利要求23所述的复合物；以及(c)作为上述(a)和上述(b)的混合物的复合物。25.一种多核苷酸，其选自由下述(a)和(b)组成的组：(a)包含编码权利要求1所述的抗人MUC1抗体Fab片段的重链片段的碱基序列的多核苷酸；以及(b)包含编码权利要求1所述的抗人MUC1抗体Fab片段的轻链的碱基序列的多核苷酸。26.一种多核苷酸，其选自由下述(a)和(b)组成的组：(a)包含编码权利要求5所述的抗人MUC1抗体Fab片段的重链片段的碱基序列的多核苷酸；以及(b)包含编码权利要求5所述的抗人MUC1抗体Fab片段的轻链的碱基序列的多核苷酸。27.一种表达载体，其包含下述(a)和/或(b)：(a)包含编码权利要求1所述的抗人MUC1抗体Fab片段的重链片段的碱基序列的多核苷酸；(b)包含编码权利要求1所述的抗人MUC1抗体Fab片段的轻链的碱基序列的多核苷酸。...

【专利技术属性】
技术研发人员：森中绍文，白井宏树，平山和德，细贝直美，土居原仁，
申请(专利权)人：安斯泰来制药株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP