基于GAL4-UAS系统的CRISPR辅助反式增强子激活基因表达的方法及其应用技术方案

本发明专利技术公开了一种基于GAL4‑UAS系统的CRISPR辅助反式增强子激活基因表达的方法及其应用，该激活基因表达的方法通过CRISPR‑GAL4‑UAS系统将增强子DNA反式募集到靶基因上，依靠反式增强子DNA本身以及反式增强子DNA与CRISPR系统的互作，激活靶基因表达。本发明专利技术通过对常规dCas9的改造发展了一种捕获dCas9(cdCas9)；借助cdCas9/sgRNA复合物中cdCas9融合GAL4与带UAS序列的巨细胞病毒(CMV)增强子DNA的结合，将CMV增强子反式募集到靶基因上，高效激活靶基因的表达；本发明专利技术的方法在生物医学中具有广泛应用价值，可以应用在制备生物检测及治疗试剂中。

【技术实现步骤摘要】
基于GAL4-UAS系统的CRISPR辅助反式增强子激活基因表达的方法及其应用
本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种基于GAL4-UAS系统的CRISPR辅助的反式增强子激活基因表达的方法及其应用。
技术介绍
人工激活基因的表达在基础生物学研究和生物医学应用中具有重要作用。例如，基因的功能往往是通过在基础研究中人工激活其在细胞或体内的表达来探索的。在生物医学中，通常需要通过激活内源基因将细胞重编程为诱导干(iPS)细胞或其他分化细胞。在医学上，癌症可以通过抑制各种激酶，激活增强免疫力，细胞凋亡和分化的相关基因来治疗。因此，各种人工基因激活剂已经被开发。例如，激活域融合锌指(ZF)，转录激活物样效应因子(TALE)和成簇规则间隔短回文重复序列(CRISPR)相关蛋白已经开发用于基因激活。在这些蛋白质和复合物中，CRISPR相关(Cas)蛋白因其简单性而被广泛使用。CRISPR最初是一种细菌免疫系统，通过酶消化侵入的噬菌体DNA。该系统已经发展成为高效的基因编辑工具。此外，该系统也被开发成为一种新型的基因调控工具。例如，灭活的Cas9(dCas9)及其相关的单链向导RNA(sgR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于GAL4‑UAS系统的CRISPR辅助反式增强子激活基因表达的方法，其特征在于，通过融合GAL4的CRISPR系统将带有UAS序列的增强子DNA反式募集到靶基因上，依靠带有UAS序列的反式增强子DNA本身以及带有UAS序列的反式增强子DNA与结合GAL4的CRISPR系统的互作，激活靶基因表达。

【技术特征摘要】
1.一种基于GAL4-UAS系统的CRISPR辅助反式增强子激活基因表达的方法，其特征在于，通过融合GAL4的CRISPR系统将带有UAS序列的增强子DNA反式募集到靶基因上，依靠带有UAS序列的反式增强子DNA本身以及带有UAS序列的反式增强子DNA与结合GAL4的CRISPR系统的互作，激活靶基因表达。2.根据权利要求1所述的基于GAL4-UAS系统的CRISPR辅助反式增强子激活基因表达的方法，其特征在于，所述CRISPR系统指CRISPR蛋白与其引导RNA(sgRNA)形成的可与靶DNA序列结合的复合物。3.根据权利要求2所述的基于GAL4-UAS系统的CRISPR辅助反式增强子激活基因表达的方法，其特征在于，所述与靶DNA序列结合的复合物为死亡Cas9(dCas9)蛋白与其sgRNA结合形成的复合物dCas9/sgRNA。4.根据权利要求3所述的基于GAL4-UAS系统的CRISPR辅助反式增强子激活基因表达的方法，其特征在于，所述dCas9包括常规dCas9蛋白以及经过基因融合改造过的dCas9蛋白，所述经过基因融合改造过的dCas9蛋白为融合各种激活域(AD)的dCas9-AD蛋白。5.根据权利要求4所述的基于GAL4-UAS系统的CRISPR辅助反式增强子激活基因表达的方法，其特征在于，所述dCas9为一...

【专利技术属性】
技术研发人员：王进科，徐新慧，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32