丁香脂素在制备抗类风湿性关节炎药物中的用途制造技术

本发明专利技术公开了丁香脂素在制备抗类风湿性关节炎药物中的用途。丁香脂素是一种双四氢呋喃类木脂素，本发明专利技术首次发现丁香脂素能够明显抑制类风湿关节炎滑膜细胞的增殖，诱导类风湿关节炎滑膜细胞的凋亡。因此，该化合物可用于制备预防和/或治疗类风湿关节炎的药物，具有较高的临床应用价值和开发前景。

Application of eugenol in the preparation of anti-rheumatoid arthritis drugs

The invention discloses the use of eugenol in the preparation of anti-rheumatoid arthritis drugs. Syringin is a kind of ditetrahydrofuran lignans. It is found for the first time that syringin can significantly inhibit the proliferation of rheumatoid arthritis synovial cells and induce apoptosis of rheumatoid arthritis synovial cells. Therefore, the compound can be used to prepare drugs for the prevention and/or treatment of rheumatoid arthritis, and has high clinical value and development prospects.

【技术实现步骤摘要】
丁香脂素在制备抗类风湿性关节炎药物中的用途
：本专利技术涉及医药
，特别涉及一种丁香脂素在制备抗类风湿性关节炎药物中的用途。
技术介绍
：类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是一种以关节病变为主的慢性全身性的自身免疫性疾病，目前其发病机制尚不明了，临床认为RA的发病主要是由于患者自身免疫功能失调，导致过敏反应，使抗炎细胞变质变性，沉积于关节部位并使关节组织畸形、致残。据调查，世界范围内RA的发病率大约为1-2％，我国RA患者总数已超过400万，且发病率仍呈上升趋势。目前，对于类风湿关节炎主要采用非甾体抗炎药(双氯灭痛、阿司匹林等)和免疫抑制剂(6-巯基嘌呤等)进行治疗，但这些药物均存在明显的不良反应，如前者损伤胃肠道粘膜导致消化性溃疡，后者作用选择性差，易于诱发感染等。因此，研究开发安全、有效的治疗类风湿关节炎药物是当前的一项紧迫任务。近年来，国内外学者在植物药治疗RA方面进行了广泛而深入的研究，发现许多天然药物如雷公藤多苷、白芍总苷、毒藤碱等具有较好的RA治疗作用。因此，从植物药中开发出安全高效的RA治疗药物具有广阔的前景。
技术实现思路
：有鉴于此，有必要提供一种丁香脂素在制备抗类风湿性关节炎药物中的用途。本专利技术的目的在于提供一种化合物丁香脂素在抑制类风湿关节炎滑膜细胞增殖以及预防和/或治疗类风湿关节炎中的应用。本专利技术所涉及的化合物丁香脂素结构式如式I所示：丁香脂素是一种双四氢呋喃型木脂素，具有抗氧化、抗炎、抗胃溃疡等作用。但目前未见丁香脂素用于防治类风湿关节炎相关疾病的报道。本专利技术所提供的丁香脂素的应用包括两方面：1)为其在制备预防和/或治疗类风湿关节炎的产品中的应用；2)为其在制备抑制类风湿关节炎滑膜细胞增殖的产品中的应用。具体表现在丁香脂素能够明显抑制类风湿关节炎滑膜细胞的增殖，诱导类风湿关节炎滑膜细胞的凋亡，可用于制备预防和/或治疗类风湿关节炎的药物。此外，以丁香脂素为有效成分制备的下述产品：1)预防和/或治疗类风湿关节炎的产品；2)抑制类风湿关节炎滑膜细胞增殖的产品，也属于本专利技术的保护范围。本专利技术中预防和/或治疗类风湿关节炎的药物以及抑制类风湿关节炎滑膜细胞增殖的药物均可通过注射、喷射、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。上述药物可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。以上各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。本专利技术的专利技术人首次通过药理实验证明丁香脂素具有显著的抑制类风湿关节炎滑膜细胞增殖和诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡的活性，可用于制备预防和/或治疗类风湿关节炎的药物，因此其具有较高的临床应用价值和开发前景。附图说明：图1是本专利技术实施例1中不同浓度的丁香脂素对类风湿关节炎滑膜细胞增殖抑制作用的统计结果图。图2是本专利技术实施例2中不同浓度的丁香脂素对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡促进作用的统计结果图。图中：“*”表示统计学中的差异显著性。具体实施方式：为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1：丁香脂素对类风湿关节炎滑膜细胞增殖的抑制作用细胞：人类风湿关节炎滑膜细胞(RA-FLS)；药物：丁香脂素；方法：1.RA-FLS的复苏从液氮灌中迅速取出RA-FLS冻存管，放进温度为37℃的恒温水浴锅，不间断的摇晃，加快细胞解冻。待解冻完全后，在超净台内将冻存管内的RA-FLS悬浮液用移液器移至10mL无菌离心管中，离心5min，转速1000r/min。倒掉上清液，加入5mL完全培养液，用移液器持续吹打至均匀的细胞悬液，将RA-FLS接种于25mL细胞培养瓶中，放入细胞培养箱中培养，培养箱条件设置为温度37℃，CO2浓度5％。24h后在显微镜下观察RA-FLS的生长情况，当发现细胞贴壁、呈三角形及不规则梭形时，表明细胞生长情况良好。2.RA-FLS的传代在显微镜下观察，当RA-FLS贴壁生长到占整个细胞培养瓶底部的80％左右时，即可进行细胞传代。倒掉培养瓶中的原培养液，用PBS冲洗2次，目的是将原培养液洗净，避免影响细胞消化；加入0.25％胰蛋白酶消化液进行消化，并于显微镜下观察RA-FLS消化情况，待镜下看见大部分细胞变圆时加入适量的胎牛血清(FBS)终止消化，随后加入一定量的完全培养液于培养瓶中，用无菌吸管反复吹打培养瓶内壁，呈均匀的细胞悬液；用细胞计数板对细胞进行计数，计数完毕后，将RA-FLS接种于2个新的培养瓶内，并加入适量的完全培养液，放入细胞培养箱中培养，培养箱条件设置为温度37℃，CO2浓度5％，即一传二的方式传代培养。3.MTT法测定细胞抑制率取适量的丁香脂素用DMEM分别配成0.01、0.1、1、5、10μM的培养液。取处于对数生长期的RA-FLS，倒掉培养瓶中的原培养液，用PBS冲洗2次，加入0.25％胰蛋白酶消化液进行消化，并于显微镜下观察RA-FLS消化情况，待镜下看见细胞大部分变圆时加入适量的FBS终止消化，随后加入一定量的培养液于培养瓶中，用无菌吸管不停地吹打培养瓶内壁，呈均匀的细胞悬液，用细胞计数板进行计数，用培养液调节细胞浓度为1×105个/mL，将RA-FLS接种于96孔无菌细胞培养板中，每孔100μL，放入细胞培养箱中培养，培养箱条件设置为温度37℃，CO2浓度5％。孵育24h后，将96孔板分为6组(即空白对照组、0.01、0.1、1、5、10μM药物组，每组6个复孔)，吸掉孔中的原培养液，分别加入等量的DMEM和不同浓度的含药培养基，放入细胞培养箱中干预。干预24h及48h后，每个孔中加入20μLMTS，37℃孵育1.5h，用酶联免疫检测仪测定各孔在540nm波长处的吸光度，计算各组细胞的抑制率。计算公式如下：细胞抑制率/％＝(1-空白对照组OD值/各浓度药物组OD值)×100％结果：请同时参阅图1，浓度为0.1～10μM的丁香脂素能够明显抑制RA-FLS的增殖，且抑制作用随药物浓度的增大而增强。实施例2：丁香脂素对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡的促进作用细胞：人类风湿关节炎滑膜细胞(RA-FLS)；药物：丁香脂素；方法：1.RA-FLS的复苏与实施例1相同。2.RA-FLS的传代与实施例1相同。3.TUNEL法测定细胞凋亡细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的分阶段的过程，染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300kb的大片段。然后大约30％的染色体DNA在Ca2+和Mg2+依赖的核酸内切酶作用下，在核小体单位之间被随机切断，形成180～200bp核小体DNA多聚体。DNA双链断裂或只要一条链上出现缺口而产生的一系列DNA的3’-OH末端可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸化酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3’-末端，从而可进行凋亡本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.丁香脂素在制备预防和/或治疗类风湿关节炎的产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.丁香脂素在制备预防和/或治疗类风湿关节炎的产品中的应用。2.丁香脂素在制备抑制类风湿关节炎滑膜细胞增殖的产品中的应用。3.如权利要求1所述的丁香脂素在制备预防和/或治疗类风湿关节炎的产品中的应用，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚遥，李娟，杨丹，李玮琦，
申请(专利权)人：宁夏医科大学，
类型：发明
国别省市：宁夏,64