一种提高蛋白表达效率的方法及表达载体技术

技术编号:21422801 阅读:62 留言:0更新日期:2019-06-22 09:29
本发明专利技术提供一种提高蛋白表达效率的方法及表达载体,包括:在高密度生长阶段,控制重组毕赤酵母生长阶段的温度为30℃,使用25%氨水和30%磷酸调节pH,使体系的pH控制在5.5,并按预设时间加入10ng/ml‑1μg/ml的褪黑激素;在高效表达阶段,当补料生长阶段结束后,将发酵温度降至22℃,同时流加含12mL/L PTM1的100%的甲醇;控制发酵液中甲醇浓度达到20g/L,诱导90h后结束发酵。不仅可以用于改造任意目的基因以提高其表达效率,还可以用于构建具有高表达效率特征的表达载体,使目的基因的蛋白表达效率提高2~5倍。

【技术实现步骤摘要】
一种提高蛋白表达效率的方法及表达载体
本专利技术涉及生物
,更具体地,涉及一种提高蛋白表达效率的方法及表达载体。
技术介绍
巴斯德毕赤酵母表达系统是目前最优秀、应用最广泛的外源基因表达系统之一。巴斯德毕赤酵母表达系统作为真核表达系统,有许多其它蛋白表达系统所不具备的优点。可对表达的蛋白进行加工折叠和翻译后修饰,从而使表达出的蛋白具有生物活性,具有强有力的乙醇氧化酶(AOX1)基因启动子,可严格调控外源蛋白的表达,营养要求低,培养基廉价,生长快,与昆虫、哺乳动物等高等真核细胞相比,易于进行操作和培养。巴斯德毕赤酵母对需氧生长有强的偏好,这一生理学特性使它能高密度发酵生长,表达量高,有利于工业放大生产。巴斯德毕赤酵母自身分泌的蛋白(背景蛋白)非常少,有利于外源蛋白的分离和纯化。表达的外源蛋白可分泌到胞外,分泌的内源蛋白少,外源蛋白分离纯化简便;外源基因通过质粒整合到基因组上,基因工程菌株遗传稳定性好;胞内表达蛋白的分选和区域化,增加了表达蛋白的稳定性,减少表达产物对宿主菌的毒害作用;糖基化程度低,与酿酒酵母相比,巴斯德毕赤酵母不产生过度的糖基化;所分泌的糖蛋白的免疫原性较低,更利于本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高蛋白表达效率的方法,其特征在于,包括:在高密度生长阶段,控制重组毕赤酵母生长阶段的温度为30℃,使用25%氨水和30%磷酸调节pH,使体系的pH控制在5.5,并按预设时间加入10ng/ml‑1μg/ml的褪黑激素;当发酵罐中甘油耗尽时,DO上升,以指数流加法流加含12mL/LPTM1的50%甘油,流速采用先上升后下降的方式,以通气量和搅拌转速控制DO在30%,直至菌体干重达到130g/L;在补料生长阶段,F为补料流速,Fccm为连续培养基本补料培养基CCM的流速,Fm为甲醇培养基的流速,w1为CCM补料比例,单位为%(W/V);F=Fccm*w1+FmD=F/V=μD为稀释率,V为...

【技术特征摘要】
1.一种提高蛋白表达效率的方法,其特征在于,包括:在高密度生长阶段,控制重组毕赤酵母生长阶段的温度为30℃,使用25%氨水和30%磷酸调节pH,使体系的pH控制在5.5,并按预设时间加入10ng/ml-1μg/ml的褪黑激素;当发酵罐中甘油耗尽时,DO上升,以指数流加法流加含12mL/LPTM1的50%甘油,流速采用先上升后下降的方式,以通气量和搅拌转速控制DO在30%,直至菌体干重达到130g/L;在补料生长阶段,F为补料流速,Fccm为连续培养基本补料培养基C...

【专利技术属性】
技术研发人员:冷毅斌吴娟寇小娟
申请(专利权)人:武汉巴菲尔生物技术服务有限公司
类型:发明
国别省市:湖北,42

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