适用于片状载体袋的CHO细胞生产分泌型蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种适用于片状载体袋的CHO细胞生产分泌型蛋白的方法，包括以下步骤：(1)CHO细胞复苏；(2)片状载体袋中CHO细胞培养；(3)收集分泌蛋白；(4)分泌蛋白纯化。本发明专利技术提供了适用于一次性片状载体袋CHO细胞生产EPO、TPO、TPA等分泌型蛋白产物的工艺，采用一次性片状载体袋CHO细胞生产分泌型蛋白产物的工艺在放大的过程中可以容易将细胞和载体分离，细胞转入下一个一次性片状载体袋得以实现，使得大规模生产和高密度细胞生产更加便利。同时使用片状载体袋生产EPO、TPO、TPA可以直接在普通环境下可以实现，直接收获上清液，操作过程简单；且在前期细胞增殖阶段减少转瓶操作，降低操作污染风险，减少人力成本。

A Method for Producing Secretory Proteins by CHO Cells Suitable for Flake Carrier Bags

The invention discloses a method for producing secretory proteins by CHO cells suitable for sheet carrier bags, which comprises the following steps: (1) recovery of CHO cells; (2) culture of CHO cells in sheet carrier bags; (3) collection of secretory proteins; (4) purification of secretory proteins. The invention provides a process suitable for producing EPO, TPO, TPA and other secretory protein products by disposable flake carrier bag CHO cells. The process of producing secretory protein products by disposable flake carrier bag CHO cells can easily separate cells and carriers in the enlargement process, and the cells can be transferred to the next disposable flake carrier bag to realize large-scale production and high density fine production. Cell production is more convenient. At the same time, the production of EPO, TPO and TPA with flake carrier bags can be realized directly in ordinary environment, the supernatant can be harvested directly, the operation process is simple, and in the early stage of cell proliferation, the bottle-turning operation can be reduced, the risk of operation pollution can be reduced, and the cost of manpower can be reduced.

【技术实现步骤摘要】
适用于片状载体袋的CHO细胞生产分泌型蛋白的方法
本专利技术涉及生命科学
，特别是细胞培养；具体的说是涉及一种适用于片状载体袋的CHO细胞生产分泌型蛋白的方法。
技术介绍
微载体培养细胞的工艺，发展至今，也已经非常成熟，相对于消化困难，片状载体在这方面有它独到的优势，但消化后，细胞和微载体的分离，也是相当困难，不配备相应的分离设备，根本无法分离，而且微载体在实际生产中较片状载体成本高昂，控制更加艰难，目前市场上用中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞生产分泌型蛋白如EPO\TPO\TPA等产品均用玻璃的或者不锈钢生物反应器来生产，市场上生产分泌性蛋白，如EPO、TPO、TPA等是采用固定床方式，而本专利技术采用一次性片状载体袋CHO细胞生产分泌型蛋白产物的工艺，在放大生产的过程中可以容易将细胞和载体分离，细胞转入下一个一次性片状载体袋得以实现，使得大规模生产和高密度细胞生产更加便利，目前市场上无用一次性片状载体袋装置用CHO细胞生产EPO、TPO、TPA等分泌型蛋白产物的工艺。
技术实现思路
为解决上述
技术介绍
中提出的问题，本专利技术的目的在于提供一种适用于片状载体袋的CHO细胞生产分泌型本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.适用于片状载体袋的CHO细胞生产分泌型蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)CHO细胞复苏取CHO细胞冻存管于37‑40℃水浴，融化后将CHO细胞悬液吸至装有生长液的方瓶内，待细胞汇合度达到80‑90％后，扩大传代，转到方瓶中，其中分种比为1:2‑3；(2)片状载体袋中CHO细胞培养将(1)中方瓶内细胞接种至装有培养基的片状载体袋，细胞接种密度为4E+5个/ml，然后将片状载体袋置于摆床中平衡过夜，其中，片状载体袋培养条件为温度37℃、PH7.2、溶解氧50％；摆床的摆床角度7°、速度30RPM；(3)收集分泌蛋白向(2)中的片状载体袋中连续灌流培养基，并补加7.5％NaHCO3，同...

【技术特征摘要】
1.适用于片状载体袋的CHO细胞生产分泌型蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)CHO细胞复苏取CHO细胞冻存管于37-40℃水浴，融化后将CHO细胞悬液吸至装有生长液的方瓶内，待细胞汇合度达到80-90％后，扩大传代，转到方瓶中，其中分种比为1:2-3；(2)片状载体袋中CHO细胞培养将(1)中方瓶内细胞接种至装有培养基的片状载体袋，细胞接种密度为4E+5个/ml，然后将片状载体袋置于摆床中平衡过夜，其中，片状载体袋培养条件为温度37℃、PH7.2、溶解氧50％；摆床的摆床角度7°、速度30RPM；(3)收集分泌蛋白向(2)中的片状载体袋中连续灌流培养基，并补加7.5％NaHCO3，同时收集上清液，每天收集上清液的体积为1-1.5个片状载体袋工作体积，连续收集25-30天，所得上清液即分泌蛋白；(4)分泌蛋白纯化将(3)所收集的上清液依次经过1um和0.45um滤芯过滤器过滤，然后将过滤后的上清液经纯化得到高纯度的分泌蛋白，再将所得的分泌蛋白进行超滤浓缩，得分泌蛋白原液。2.根据权利要求1所述的适用于片状载体袋的CHO细胞生产分泌型蛋白的方法，其特征在于，步骤(4)中，纯化得高纯度的分泌蛋白的具体方法为：将过滤后的上清液依次经过亲和层析、分子筛层析、C4反相柱层析、超滤换盐和离子交换层析所得；其中，亲和层析纯化条件具体为：采用Bluesepherose层析柱，用PBS缓冲液平衡柱4CV，流速30cm/h；上样体积20CV，以1.0mol/lNaCl、20mmol/LTris-HCl溶液洗脱收集蛋白；分子筛层析纯化条件具体为：用100mmol/lNaCl、20mmol/LTris-HCl3CV平衡柱子，流速30cm/h，基线平稳后上样2.5mg/ml的收集蛋白；C4反相柱层析纯化条件具体为：用20％乙醇、100mmol/lNaCl和20mmol/LTris-HCl平衡柱子，流速20cm/h，上样量4.0mg/ml，以20％乙醇、100mmol/lNaCl和20mmol/LTris-HCl溶液洗涤；50％乙醇、100mmol/...

【专利技术属性】
技术研发人员：王树华，甄宝贵，李驰，吴菲菲，
申请(专利权)人：武汉赛科成科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42