一种新circRNA及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种新circRNA及其用途,具体的涉及该新circRNA在制备缺氧缺血性脑损伤诊断试剂中的应用。现有研究显示circRNA在疾病的发生和发展中发挥着重要的作用，有望成为例如癌症、心脏病、神经系统疾病、动脉硬化等疾病的生物标志物。本申请发现了新的circRNA，并且其与缺氧缺血性脑损伤具有很好的相关性，具有非常重要的研究价值和临床应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种新circRNA及其用途
本专利技术属于疾病检测领域，具体涉及一种新circRNA及其用途，更具体的涉及该新circRNA在制备缺氧缺血性脑损伤诊断试剂中的应用。
技术介绍
环状RNA(circularRNA，circRNA)，一种新型的内源非编码RNA，是近期RNA领域的研究热点，circRNA是一类通过反向剪接将3’和5’末端连接起来形成的环形RNA分子。按照剪接来源的不同，circRNA可分为内含子来源环状RNA以及外显子来源环状RNA。circRNA具有如下特征：1)属于非编码RNA；2)富集在细胞浆，成环易出膜；3)具有特异的反向剪接位点；4)稳定，不易被核酸外切酶降解；5)有一定的组织特异性，时序特异性，疾病特异性；6)表达丰度高；7)物种保守性好；8)可充当竞争性内源RNA(ceRNA)的角色，进而调控靶基因的表达。一些研究表明circRNA在体内含量丰富，并且比线性RNA稳定，呈现组织特异性表达模式。两个独立的实验组发现内源性circRNA可以作为microRNA(miRNA)海绵来发挥作用，这意味着circRNA可以与miRNA结合，从而阻断miRNA对其靶标表达的抑制作用。这表明circRNA在疾病的发生和发展中发挥着重要的作用，有望成为例如癌症、心脏病、神经系统疾病、动脉硬化等疾病的生物标志物。缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemicbraindamage，HIBD)是因脑组织部分或完全缺氧、脑血流量减少或暂停导致的脑损伤，最终可造成神经细胞的凋亡和坏死。目前对该病的提前诊断缺乏有效方法。专利技术人对缺氧缺血性脑损伤模型进行circRNA转录组测序分析，寻找与缺氧缺血性脑损伤非常相关的9个circRNA，专利技术人发现的几个circRNA是现有数据库中未曾发现的新的circRNA，并且与HIBD具有很好的相关性，具有非常重要的研究价值和临床应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新的circRNA，序列与SEQIDNO.1具有90％以上序列同源性。术语“同源”是主要是指序列上的同源，也就是用来说明两个或多个RNA或DNA序列具有相同的祖先。同源的序列一般有相似的功能。一般来说，当相似程度高于50％时，常推测检测序列和目标序列可能是同源序列；当相似性程度低于20％时，就难以确定其是否具有同源性。优选的，序列与SEQIDNO.1具有95％、96％、97％、98％或99％以上序列同源性。更优选的，circRNA序列为SEQIDNO.1。本专利技术的目的在于提供上述circRNA在制备缺氧缺血性脑损伤诊断制剂中的应用。优选的，样本为脑组织或外周血。更优选的，样本为大鼠的脑组织。本专利技术的目的在于提供一种检测缺氧缺血性脑损伤的试剂，试剂采用测序技术、核酸杂交技术或核酸扩增技术检测样品circRNA及其调控的miRNA的表达水平，circRNA序列与SEQIDNO.1具有90％以上序列同源性。进一步，circRNA在缺氧缺血性脑损伤样本中高表达。本专利技术中的核酸杂交技术包括但不限于原位杂交(ISH)、微阵列或Northern杂交。优选的，采用二代测序技术、三代测序技术、探针杂交技术、基因芯片技术或荧光定量PCR技术检测样本中circRNA及其调控的miRNA的表达水平。优选的，试剂含有与circRNA杂交的探针或扩增circRNA的特异性引物。本专利技术的目的在于提供上述试剂在制备缺氧缺血性脑损伤诊断制剂中的应用。进一步，circRNA调控的miRNA选自下列miRNA中的一种或几种：rno-let-7a-2-3p、rno-let-7c-5p、rno-let-7e-5p、rno-let-7g-3p、rno-miR-103-1-5p、rno-miR-105、rno-miR-106b-3p、rno-miR-1224、rno-miR-128-2-5p、rno-miR-134-5p、rno-miR-146a-5p、rno-miR-146b-5p、rno-miR-148a-5p、rno-miR-149-3p、rno-miR-15a-3p、rno-miR-1843b-3p、rno-miR-194-3p、rno-miR-195-3p、rno-miR-196b-3p、rno-miR-199a-3p、rno-miR-20b-3p、rno-miR-210-3p、rno-miR-210-5p、rno-miR-214-3p、rno-miR-214-5p、rno-miR-222-3p、rno-miR-222-5p、rno-miR-223-3p、rno-miR-23a-3p、rno-miR-27a-3p、rno-miR-27a-5p、rno-miR-27b-3p、rno-miR-293-3p、rno-miR-298-3p、rno-miR-3084c-3p、rno-miR-3120、rno-miR-320-5p、rno-miR-324-3p、rno-miR-328a-5p、rno-miR-328b-3p、rno-miR-33-5p、rno-miR-337-5p、rno-miR-342-5p、rno-miR-3473、rno-miR-349、rno-miR-34c-5p、rno-miR-3542、rno-miR-3543、rno-miR-3558-3p、rno-miR-3562、rno-miR-3586-5p、rno-miR-381-5p、rno-miR-448-5p、rno-miR-449a-3p、rno-miR-487b-5p、rno-miR-494-5p、rno-miR-497-3p、rno-miR-501-5p、rno-miR-532-5p、rno-miR-540-3p、rno-miR-541-5p、rno-miR-547-5p、rno-miR-551b-3p、rno-miR-598-5p、rno-miR-6215、rno-miR-6314、rno-miR-6316、rno-miR-6321、rno-miR-6324、rno-miR-6332、rno-miR-664-1-5p、rno-miR-664-2-5p、rno-miR-666-3p、rno-miR-666-5p、rno-miR-678、rno-miR-702-5p、rno-miR-711、rno-miR-742-5p、rno-miR-758-3p、rno-miR-761、rno-miR-770-3p、rno-miR-878、rno-miR-92a-3p、rno-miR-92b-5p、rno-miR-96-5p、rno-miR-98-5p。一种缺氧缺血性脑损伤检测荧光定量PCR试剂盒，试剂盒采用特异的引物检测样品circRNA的表达水平，circRNA序列与SEQIDNO.1具有90％以上序列同源性。进一步，引物序列为SEQIDNO.2和SEQIDNO.3。进一步，该PCR试剂盒适合于目前存在市场上的所有类型荧光定量基因扩增仪，灵敏度高，定量快速准确、稳定性好，具有良好的应用前景。进一步，上述荧光定量PCR试剂盒组分包括：特异性引物、内参引物、荧光定量PCR反应液。其中所述的特异性引物包括上游引物和下游引物，上游引物序列为SEQIDNO.2，下游引物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新的circRNA，序列与SEQ ID NO.1具有90％以上序列同源性。

【技术特征摘要】
1.一种新的circRNA，序列与SEQIDNO.1具有90％以上序列同源性。2.权利要求1中的circRNA在制备缺氧缺血性脑损伤诊断制剂中的应用。3.一种检测缺氧缺血性脑损伤的试剂，其特征在于，试剂采用测序技术、核酸杂交技术或核酸扩增技术检测样品circRNA及其调控的miRNA的表达水平，circRNA序列为SEQIDNO.1。4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，采用二代测序技术、三代测序技术、探针杂交技术、基因芯片技术或荧光定量PCR技术检测样本中circRNA及其调控的miRNA的表达水平。5.根据权利要求4所述的试剂，其特征在于，试剂含有与circ...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨丽君，崔红，赵贺华，张囡，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京友谊医院，
类型：发明
国别省市：北京,11