本发明专利技术涉及circRNA及其在检测缺氧缺血性脑损伤中的应用。针对目前没有有效的缺氧缺血性脑损伤诊断方法这一难题，发明专利技术人采用高通量测序技术对缺氧缺血性脑损伤模型进行circRNA转录组测序并运用生物信息学方法进行分析，寻找到与缺氧缺血性脑损伤相关的circRNA，为缺氧缺血性脑损伤的诊断提供了新的分子诊断标志物，为临床检测提供了研究基础。
【技术实现步骤摘要】
circRNA及其在检测缺氧缺血性脑损伤中的应用
本专利技术属于疾病检测领域，具体涉及circRNA及其在制备缺氧缺血性脑损伤诊断试剂中的应用。
技术介绍
近年来，环状RNA(circularRNA，circRNA)成为继miRNA与1ncRNA后的又一非编码RNA研究热点，受到国内外学者的广泛关注。目前，circRNA的生物学功能研究仍处于探索阶段，其作用机制主要包括以下4种：①miRNA海绵作用：位于胞质中的ecircRNA可通过竞争性内源RNA机制，结合miRNA阻止其与下游靶基因结合，从而调控基因表达。miRNA海绵作用是目前疾病中研究最多的circRNA作用机制。②转录及剪接调控作用：部分circRNA可以影响亲本基因的表达，现有研究显示其可能通过与线性剪接相互竞争从而负向调控亲本基因表达。③circRNA——蛋白相互作用：circRNA也可与蛋白质相关作用以调控基因表达，CircRNA可用于存储、分类、转运RNA结合蛋白到特定的亚细胞单位。④翻译蛋白：虽然circRNA一直被认为是非编码RNA，但最近研究表明部分circRNA可能具有翻译功能。缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemicbraindamage，HIBD)是因脑组织部分或完全缺氧、脑血流量减少或暂停导致的脑损伤，最终可造成神经细胞的凋亡和坏死。新生儿缺氧缺血性脑病由于围产期窒息缺氧所引起的脑损伤，严重者可造成永久性神经功能损害，是儿童神经系统损伤的常见原因之一。遗憾的是，目前对缺氧缺血性脑损伤诊断至今不甚明了，也无有效的治疗方法。因此，国内外相继成立缺氧缺血脑病研究中心进行此项研究。高通量测序技术的广泛应用为疾病发病机理的研究提供了更加全面和快速的分析手段，专利技术人对缺氧缺血性脑损伤模型进行circRNA转录组测序并运用生物信息学方法进行分析，寻找与缺氧缺血性脑损伤相关的circRNA，进一步通过RT-PCR进行了验证，本申请为缺氧缺血性脑损伤的诊断提供了新的分子诊断标志物，为临床缺血缺氧性脑损伤的基因检测提供研究基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种与缺氧缺血性脑损伤相关的circRNA，序列与SEQIDNO.1具有90％以上序列同源性。术语“同源”是主要是指序列上的同源，也就是用来说明两个或多个RNA或DNA序列具有相同的祖先。同源的序列一般有相似的功能。一般来说，当相似程度高于50％时，常推测检测序列和目标序列可能是同源序列；当相似性程度低于20％时，就难以确定其是否具有同源性。优选的，序列与SEQIDNO.1具有95％、96％、97％、98％或99％以上序列同源性。更优选的，circRNA序列为SEQIDNO.1。本专利技术的目的在于提供一种检测缺氧缺血性脑损伤的试剂，试剂采用测序技术、核酸杂交技术或核酸扩增技术检测样品circRNA及其调控的基因的表达水平，circRNA序列为SEQIDNO.1。进一步，circRNA调控的基因选自下列miRNA中的一种或几种：rno-let-7b-5p、rno-miR-10a-5p、rno-miR-10b-5p、rno-miR-1188-5p、rno-miR-1199-5p、rno-miR-122-5p、rno-miR-125a-3p、rno-miR-125b-5p、rno-miR-128-1-5p、rno-miR-128-2-5p、rno-miR-128-3p、rno-miR-138-5p、rno-miR-146b-3p、rno-miR-150-5p、rno-miR-17-1-3p、rno-miR-181a-1-3p、rno-miR-184、rno-miR-185-5p、rno-miR-194-3p、rno-miR-199a-5p、rno-miR-203a-5p、rno-miR-205、rno-miR-212-3p、rno-miR-216a-3p、rno-miR-23b-5p、rno-miR-24-1-5p、rno-miR-25-5p、rno-miR-301b-3p、rno-miR-30c-2-3p、rno-miR-324-5p、rno-miR-329-5p、rno-miR-342-5p、rno-miR-345-3p、rno-miR-349、rno-miR-34a-5p、rno-miR-34c-5p、rno-miR-351-5p、rno-miR-3543、rno-miR-3544、rno-miR-3558-3p、rno-miR-3568、rno-miR-3583-3p、rno-miR-361-3p、rno-miR-370-3p、rno-miR-382-5p、rno-miR-421-5p、rno-miR-450b-3p、rno-miR-493-3p、rno-miR-501-5p、rno-miR-505-5p、rno-miR-509-5p、rno-miR-5132-3p、rno-miR-532-3p、rno-miR-540-3p、rno-miR-541-3p、rno-miR-6316、rno-miR-6323、rno-miR-6328、rno-miR-652-3p、rno-miR-665、rno-miR-702-3p、rno-miR-7578、rno-miR-770-3p、rno-miR-7b、rno-miR-873-3p、rno-miR-883-3p、rno-miR-92b-3p、rno-miR-92b-5p。进一步，circRNA在缺氧缺血性脑损伤样本中高表达。本专利技术中的核酸杂交技术包括但不限于原位杂交(ISH)、微阵列或Northern杂交。优选的，采用二代测序技术、三代测序技术、探针杂交技术、基因芯片技术或荧光定量PCR技术检测样本中circRNA基因及其调控的基因的表达水平。优选的，试剂含有与circRNA杂交的探针或扩增circRNA的特异性引物。一种缺氧缺血性脑损伤检测荧光定量PCR试剂盒，试剂盒采用特异的引物检测SEQIDNO.1的表达水平。进一步，引物序列为SEQIDNO.2和SEQIDNO.3。进一步，该PCR试剂盒适合于目前存在市场上的所有类型荧光定量基因扩增仪，灵敏度高，定量快速准确、稳定性好，具有良好的应用前景。进一步，上述荧光定量PCR试剂盒组分包括：特异性引物、内参引物、荧光定量PCR反应液。其中所述的特异性引物包括上游引物和下游引物，上游引物序列为SEQIDNO.2，下游引物序列为SEQIDNO.3。所述内参引物为GAPDH内参引物。所述的试剂盒还包含RNA抽提试剂。优选Reagent进行样本RNA提取。本专利技术的目的在于提供上述试剂在制备缺氧缺血性脑损伤诊断制剂中的应用。优选的，样本为脑组织或外周血。更优选的，样本为大鼠的脑组织。本申请的优点：1、本申请为缺氧缺血性脑损伤的诊断提供了新的分子诊断标志物。2、检测发现本申请提供的circRNA在缺氧缺血性脑损伤中特异性高表达，检测准确率较高，提供了一种更加快速、准确的检测方法。定义：环状RNA(circularRNA，circRNA)，亦称环形RNA，是最近几年研究确认的一种新型的非编码RNA(noncodingRNA，ncRNA)分子。根据RNA构成的不同，环状RNA可分为三类：外显子环本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种与缺氧缺血性脑损伤相关的circRNA，序列与SEQ ID NO.1具有90％以上序列同源性。
【技术特征摘要】
1.一种与缺氧缺血性脑损伤相关的circRNA，序列与SEQIDNO.1具有90％以上序列同源性。2.一种检测缺氧缺血性脑损伤的试剂，其特征在于，试剂采用测序技术、核酸杂交技术或核酸扩增技术检测样品circRNA及其调控的基因的表达水平，circRNA序列为SEQIDNO.1。3.根据权利要求2所述的试剂，其特征在于，circRNA在缺氧缺血性脑损伤样本中高表达。4.根据权利要求2所述的试剂，其特征在于，采用二代测序技术、三代测序技术、探针杂交技术、基因芯片技术或荧光定量PCR技术检测样本中circRNA及其调控的基因的表达水平。5.根据权利要求4所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨丽君，崔红，赵贺华，张囡，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京友谊医院，
类型：发明
国别省市：北京,11
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