dsRNA在马铃薯甲虫防治中的应用及产品制造技术

dsRNA在马铃薯甲虫防治中的应用及产品，涉及基因产品在马铃薯甲虫防治中的应用及衍生产品。本发明专利技术dsRNA产品稳定性强、生产技术成熟、成本低，是有效价廉的专一性强、绿色、环保的“基因农药”产品。本发明专利技术dsRNA产品在马铃薯甲虫防治中的应用对于马铃薯甲虫的防治具有重大和深远的意义。本发明专利技术马铃薯甲虫杀虫剂低剂量喷施马铃薯植株叶片后，盆栽马铃薯植株上能够持续防虫28天以上，防效达80％以上；室外强紫外条件下，本发明专利技术马铃薯甲虫杀虫剂对马铃薯甲虫仍具有较强的毒杀作用，田间防控持效期在3周左右，且防效从50％逐渐下降至10％左右。

【技术实现步骤摘要】
dsRNA在马铃薯甲虫防治中的应用及产品
本专利技术涉及一种基因产品在马铃薯甲虫防治中的应用及衍生产品。
技术介绍
马铃薯是世界上重要的粮、菜、饲兼用作物和工业原料作物，近年来，由于其比较经济效益明显等特点在我国种植面积不断增大，目前已成为我国继水稻、小麦、玉米之后的第4大主粮作物。马铃薯甲虫Leptinotarsadecemlineata又名马铃薯叶甲，英文名ColoradoPotatoBeetle(CPB)隶属鞘翅目，叶甲科，被公认为世界范围内马铃薯的毁灭性害虫，也是我国对外重大检疫对象之一。其寄主范围相对较窄，主要危害马铃薯、茄子、栽培番茄、天仙子、黄花刺茄等20余种茄科植物。该重大外来有害生物自上个世纪90年代初马铃薯甲虫首次传入我国的新疆地区以来，其不断扩散蔓延，目前已成为新疆马铃薯种植业最突出、最主要的植保问题，并对我国甘肃等内地马铃薯主要种植区相关种植业的健康发展构成了巨大威胁。由于其具有高繁殖率、暴食性、兼性滞育、迁飞和世代重叠等特性，环境适应能力和生态可塑性极强，极易产生强抗药性，探索并开展其新型生防防治技术等相关研究已成为一个热点。RNAi(RNAinterference,RNA干扰)是一种古老的、在多细胞真核生物中存在的、通过外源的dsRNA、siRNA或内源的miRNA引发的在转录后基因沉默的现象(Post-transcriptionalGeneSilencing,PTGS)。一般认为，该过程主要参与病毒免疫、基因表达调控等过程。但目前RNAi技术仍有明显不足：①引发RNAi作用的dsRNA或siRNA在环境中易被无处不在的核酸酶降解，故不稳定；②生产和保存的dsRNA技术尚未成熟，生产成本高。
技术实现思路
本专利技术dsRNA产品稳定性强、生产技术成熟、成本低，是有效价廉的专一性强、绿色、环保的“基因农药”产品。本专利技术dsRNA产品在马铃薯甲虫防治中的应用对于马铃薯甲虫的防治具有重大和深远的意义。本专利技术dsLdalphasnap在马铃薯甲虫防治中的应用，dsLdalphasnap的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。进一步的，dsLdalphasnap作为马铃薯甲虫杀虫剂的活性成分。优选的，用含有表达dsLdalphasnap的转基因工程菌的菌液作为马铃薯甲虫杀虫剂。进一步的，用原核表达载体构建表达dsLdalphasnap的表达载体。本专利技术马铃薯甲虫杀虫剂有效成分为dsLdalphasnap，dsLdalphasnap的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。进一步的，马铃薯甲虫杀虫剂为含有表达dsLdalphasnap的转基因工程菌的菌液。本专利技术dsLdalphasnap表达载体，编码dsLdalphasnap的DNA序列如SEQIDNO:2所示，载体为原核表达载体。进一步的，所述的原核表达载体为pET-2p。本专利技术马铃薯甲虫致死基因dsLdalphasnap的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。本专利技术表达dsLdalphasnap的转基因工程菌，以大肠杆菌EscherichiacoliHTl15(DE3)为宿主，以dsLdalphasnap表达载体为转录表达载体。本专利技术马铃薯甲虫杀虫剂对马铃薯甲虫幼虫具有特异性、致死效率高，作用过程快的优点。本专利技术马铃薯甲虫杀虫剂低剂量喷施马铃薯植株叶片后，盆栽马铃薯植株上能够持续防虫28天以上，防效达80％以上；室外强紫外条件下，本专利技术马铃薯甲虫杀虫剂对马铃薯甲虫仍具有极强的毒杀作用，田间防控持效期在3周左右，且防效从50％逐渐下降至10％左右。本专利技术技术方案在世界上首次构建出原核表达的dsRNA。用原核表达dsRNA可以大幅减少dsRNA的生产成本，本专利技术每毫升菌液发酵量可达50μg，即便选用价格昂贵的进口蛋白胨、酵母提取物等制作培养基，1g的生产成本也不到100美金。附图说明图1是实施例1喂食浓度梯度的dsRNA后第一天幼虫取食的危害等级，其中L1为喂食dsLdalphasnap菌液，L11为喂食dsATPaseA菌液、L12为喂食dsATPaseE菌液。图2是实施例1喂食浓度梯度的dsRNA后第二天幼虫取食的危害等级，其中L1为喂食dsLdalphasnap菌液，L11为喂食dsATPaseA菌液、L12为喂食dsATPaseE菌液。图3是实施例1喂食浓度梯度的dsRNA后第三天幼虫取食的危害等级，其中L1为喂食dsLdalphasnap菌液，L11为喂食dsATPaseA菌液、L12为喂食dsATPaseE菌液。图4是实施例1喂食浓度梯度的dsRNA后第四天幼虫取食的危害等级，其中L1为喂食dsLdalphasnap菌液，L11为喂食dsATPaseA菌液、L12为喂食dsATPaseE菌液。图5是实施例1喂食马铃薯甲虫2龄幼虫dsRNA菌液后第7天的存活率，其中L1为喂食dsLdalphasnap菌液，L11为喂食dsATPaseA菌液、L12为喂食dsATPaseE菌液。图6是实施例1喂食dsRNA菌液的马铃薯甲虫幼虫化蛹率，其中L1为喂食dsLdalphasnap菌液，L11为喂食dsATPaseA菌液、L12为喂食dsATPaseE菌液。图7是实施例1喂食dsRNA菌液的马铃薯甲虫2龄幼虫的盆栽一个月后回收率统计图，其中L1为喂食dsLdalphasnap菌液，L11为喂食dsATPaseA菌液、L12为喂食dsATPaseE菌液。图8是实施例1喂食dsLdalphasnap菌液的马铃薯甲虫2龄幼虫的盆栽一个月后长势图。图9是实施例1喂食dsRNA菌液的马铃薯甲虫2龄幼虫的盆栽每周回收幼虫体重的统计图，其中L1为喂食dsLdalphasnap菌液，L11为喂食dsATPaseA菌液、L12为喂食dsATPaseE菌液。图10是实施例1喷施dsRNA菌液田间马铃薯植株对马铃薯甲虫2龄幼虫死亡率统计图，其中L1为喂食dsLdalphasnap菌液，L11为喂食dsATPaseA菌液、L12为喂食dsATPaseE菌液。具体实施方式本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一：本实施方式dsLdalphasnap在马铃薯甲虫防治中的应用，其中dsLdalphasnap的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：dsLdalphasnap作为马铃薯甲虫杀虫剂的活性成分。其它与实施方式一相同。具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二的不同点是：用含有表达dsLdalphasnap的转基因工程菌的菌液作为马铃薯甲虫杀虫剂。其它与实施方式一或二相同。具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式三的不同点是：所述含有表达dsLdalphasnap的转基因工程菌是以大肠杆菌EscherichiacoliHTl15(DE3)为宿主，以dsLdalphasnap表达载体为转录表达载体。其它与实施方式三相同。EscherichiacoliHTl15(DE3)为RNA酶Ⅲ缺陷型菌株。具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式四的不同点是：所述dsLdalphasnap表达载体为原核表达载体。其它与实施方式四相同。具体实施方式六：本实施方式与具体实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.dsLdalpha snap在马铃薯甲虫防治中的应用，其特征在于，dsLdalpha snap的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

【技术特征摘要】
1.dsLdalphasnap在马铃薯甲虫防治中的应用，其特征在于，dsLdalphasnap的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，dsLdalphasnap作为马铃薯甲虫杀虫剂的活性成分。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，用含有表达dsLdalphasnap的转基因工程菌的菌液作为马铃薯甲虫杀虫剂。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，用原核表达载体构建表达dsLdalphasnap的表达载体。5.马铃薯甲虫杀虫剂，其特征在于，马铃薯甲虫杀虫剂有效成分为dsLdalphasnap，dsLdalphasnap的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。6.根据权利要求5所述的马铃薯甲虫杀虫...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭文超，付开赟，丁新华，吐尔逊·阿合买提，何江，王小武，班小莉，刘文，黄红梅，王娜，
申请(专利权)人：新疆农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：新疆,65