一种毛囊祖细胞的注射药剂制造技术

本发明专利技术属于毛发再生领域，公开了一种毛囊祖细胞的注射药剂。所述的毛囊祖细胞的注射药剂包括毛囊祖细胞的获取和毛囊祖细胞簇的形成。本发明专利技术对离体的毛囊祖细胞进行各种处理，毛囊祖细胞来源丰富，首先通过分离酶对其进行消化，然后切取毛囊隆突部，再通过胰蛋白酶对隆突部进行消化，并对其进行分离、培养、再分离、再培养，再次收集培养后的毛囊表皮中的角质祖细胞和毛囊真皮中特殊的成纤维细胞，即毛囊真皮乳头细胞，经过培养得到毛囊祖细胞，进一步培养形成毛囊祖细胞簇。本发明专利技术制备的毛囊祖细胞簇注射药剂适合在人的头皮种植，对秃发治疗效果明显，且较少产生免疫排斥。

An injection agent for hair follicle progenitor cells

The invention belongs to the field of hair regeneration and discloses an injection agent for hair follicle progenitor cells. The injection agent of the hair follicle progenitor cell includes the acquisition of the hair follicle progenitor cell and the formation of the hair follicle progenitor cell cluster. The hair follicle progenitor cells in vitro are processed in various ways. The source of the hair follicle progenitor cells is rich. First, the hair follicle progenitor cells are digested by separating enzymes, then the hair follicle protuberance parts are cut off, digested by trypsin, and then separated, cultured, separated and re-cultured. The cultured hair follicle epidermis keratin progenitor cells and the special hair follicle dermis are collected again. Fibroblasts, dermal papilla cells of hair follicles, are cultured to produce hair follicle progenitor cells, which are further cultured to form hair follicle progenitor cell clusters. The hair follicle progenitor cell cluster injection agent prepared by the invention is suitable for human scalp implantation, has obvious therapeutic effect on alopecia, and produces less immune rejection.

【技术实现步骤摘要】
一种毛囊祖细胞的注射药剂
本专利技术属于毛发再生领域，尤其涉及一种毛囊祖细胞的注射药剂。
技术介绍
目前，业内常用的现有技术是这样的：脱发是指头发脱落的现象。正常脱落的头发都是处于退行期及休止期的毛发，由于进入退行期与新进入生长期的毛发不断处于动态平衡，故能维持正常数量的头发。病理性脱发是指头发异常或过度的脱落，其原因很多：(1)雄激素性脱发，为常染色体显性遗传,其遗传特征需在雄激素作用下才表现出来；(2)神经性脱发，精神压力过大时常常出现脱发增多，在精神压力的作用下，人体立毛肌收缩、头发直立，植物神经或中枢神经机能发生紊乱，毛囊毛乳头发生改变和营养不良，从而导致毛发生长功能抑制，毛发进入休止期而出现脱发；(3)内分泌脱发，毛发生长受多种内分泌激素的影响，所以当发生内分泌异常时多引起脱发疾病，如产后、更年期脱发；(4)营养性脱发，毛发是身体状况的外在表现，机体营养不良和新陈代谢异常可引起发质和发色的改变，严重营养不良甚至导致弥漫性脱发；(5)物理性脱发，常见的引起脱发的物理性因素包括机械性刺激和接触放射性物质；(6)化学性脱发，化学因素可以导致毛发颜色改变甚至脱发；(7)感染性脱发，各种病原体的感染是毛发疾病中一类重要因素，主要包括细菌、病毒、真菌、螺旋体、寄生虫等感染；(8)症状性脱发，某些系统性或局部疾病都可伴发脱发；(9)先天性脱发，发育缺陷所引起的头发完全缺失或稀疏，患者常见头发稀疏细小，或出生时头发正常，不久就脱落不再生，可分为孤立缺陷和其他畸形；(10)季节性脱发，一般夏季容易脱发，因为夏天温度高毛孔扩张导致脱发，秋冬之际不易脱发，因为这时期温度下降毛孔闭合。其中，男性区域秃发是一种常见疾病，其经常是通过头发的移植手术而治疗。在此过程中，来自非秃发区域的头皮内的毛囊被切除下来，并且通过再移植从而实现满头全发的梦想。事实上，在此过程中，由于能够获得用于重新分布的毛囊的数量有限，因此没有形成新头发。综上所述，现有技术存在的问题是：男性区域性秃发频发，目前治疗这种秃发一般采取头发移植来治疗。在此过程中，由于能够获得用于重新分布的毛囊的数量有限，因此没有形成新头发。解决上述技术问题的难度和意义：本专利技术对离体的毛囊祖细胞进行各种处理，毛囊祖细胞来源丰富，首先通过分离酶对其进行消化，然后切取毛囊隆突部，再通过胰蛋白酶对隆突部进行消化，并对其进行分离、培养、再分离、再培养，再次收集培养后的上层未贴附角质形成细胞和毛囊真皮成纤维细胞，经过培养得到毛囊祖细胞，进一步培养形成毛囊祖细胞簇。本专利技术制备的毛囊祖细胞簇注射药剂适合在人的头皮种植，对秃发治疗效果明显，且较少产生免疫排斥。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种毛囊祖细胞的注射药剂，本专利技术是这样实现的，一种毛囊祖细胞的注射药剂，其制备步骤包括：毛囊祖细胞的获取和毛囊祖细胞簇的形成。进一步，毛囊祖细胞的获取包括以下步骤：步骤一：利用分离酶对离体的毛囊进行第一消化培养；步骤二：切取第一次消化后毛囊的毛囊隆突部进行第二消化培养；步骤三：利用胰酶对第二次消化后获得的毛囊隆突部进行第三次消化培养；步骤四：终止消化，对经过三次消化处理得到的毛囊隆突部进行离心收集得到毛囊细胞；步骤五：将毛囊细胞在无血清的含各种氨基酸和葡萄糖的培养液中培养，进行初步分离，获得初步分离产物；步骤六：将初步分离产物置于培养皿中培养，离心后收集得到毛囊表皮中的角质祖细胞和毛囊真皮中特殊的成纤维细胞，即毛囊真皮乳头细胞；步骤七：取上层毛囊真皮乳头细胞进行培养，得到毛囊祖细胞。进一步，步骤一中，利用分离酶对离体的毛囊进行第一消化培养，具体为：(1)取头发数根，利用75％酒精冲洗2～次；(2)截取生长期的毛囊组织，剪碎，利用0.35％分离酶，34℃～36℃，消化35-40min；(3)25℃,1000r/min离心2～4min，去除上清，将毛囊组织和消化的细胞种入36孔板中，6％CO2孵育箱培养。进一步，步骤二中，采用在解剖显微镜下切取步骤一得到毛囊隆突部。进一步，步骤三中，利用胰酶对第二次消化后获得的毛囊隆突部进行第三次消化培养，具体为：(1)取第二次消化后获得的毛囊隆突部，剪碎，利用0.65ml0.20％胰酶+0.06％EDTA，37℃消化5min，多次吹打；(2)25℃，800r/min离心6～8min，取上清液置EP管中，加入0.65mlDMEM/F12培养液；(3)利用0.65ml0.20％胰酶+0.06％EDTA消化3min，25℃,800-1200r/min离心2～4min，去除上清，将毛囊组织和消化的细胞种入36孔板中，6％CO2孵育箱培养。进一步，步骤五中，初步分离优选采用密度梯度离心。进一步，步骤六中，培养的条件优选为培养皿中铺设有30平方厘米胶原蛋白，培养温度为37℃，5％CO2。进一步，步骤七中，培养液优选为20％血清的含各种氨基酸和葡萄糖的培养基(DMEM)条件培养液；培养过程中，优选为每2天换一次培养基。进一步，毛囊祖细胞簇的形成包括以下步骤：步骤一：取毛囊祖细胞，利用RPMl1640培养基进行培养，扩增毛囊祖细胞数量；步骤二：使经培养的毛囊祖细胞形成细胞簇；步骤三：使用注射器收集毛囊祖细胞簇，制成药剂，冷藏备用。综上所述，本专利技术的优点及积极效果为：本专利技术对离体的毛囊祖细胞进行各种处理，毛囊祖细胞来源丰富，首先通过分离酶对其进行消化，然后切取毛囊隆突部，再通过胰蛋白酶对隆突部进行消化，并对其进行分离、培养、再分离、再培养，再次收集培养后的上层毛囊表皮中的角质祖细胞和毛囊真皮中特殊的成纤维细胞，即毛囊真皮乳头细胞，经过培养得到毛囊祖细胞，进一步培养形成毛囊祖细胞簇。本专利技术制备的毛囊祖细胞簇注射药剂适合在人的头皮种植，对秃发治疗效果明显，且较少产生免疫排斥。附图说明图1是本专利技术实施例提供的毛囊祖细胞的获取操作步骤流程图图2是本专利技术实施例提供的毛囊祖细胞簇的形成步骤流程图具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术实施例提供的毛囊祖细胞的注射药剂，其制备步骤包括：毛囊祖细胞的获取和毛囊祖细胞簇的形成。下面结合附图对本专利技术的原理做进一步的说明：如图1所示，本专利技术实施例提供的毛囊祖细胞的获取包括以下步骤：S101：利用分离酶对离体的毛囊进行第一消化培养；S102：切取第一次消化后毛囊的毛囊隆突部进行第二消化培养；S103：利用胰酶对第二次消化后获得的毛囊隆突部进行第三次消化培养；S104：终止消化，对经过三次消化处理得到的毛囊隆突部进行离心收集得到毛囊细胞；S105：将毛囊细胞在无血清的含各种氨基酸和葡萄糖的培养液中培养，进行初步分离，获得初步分离产物；S106：将初步分离产物置于培养皿中培养，离心后收集得到毛囊表皮中的角质祖细胞和毛囊真皮中特殊的成纤维细胞，即毛囊真皮乳头细胞；S107：取上层毛囊真皮乳头细胞进行培养，得到毛囊祖细胞。步骤S101中，本专利技术实施例提供的利用分离酶对离体的毛囊进行第一消化培养，具体为：(1)取头发数根，利用75％酒精冲洗2～次；(2)截取生长期的毛囊组织，剪碎，利用0.35％分离酶，34℃本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种毛囊祖细胞的注射药剂，其特征在于，所述的毛囊祖细胞的注射药剂包括毛囊祖细胞的获取和毛囊祖细胞簇的形成。

【技术特征摘要】
1.一种毛囊祖细胞的注射药剂，其特征在于，所述的毛囊祖细胞的注射药剂包括毛囊祖细胞的获取和毛囊祖细胞簇的形成。2.如权利要求1所述的毛囊祖细胞的注射药剂，其特征在于，所述毛囊祖细胞的获取包括以下步骤：步骤一：利用分离酶对离体的毛囊进行第一消化培养；步骤二：切取第一次消化后毛囊的毛囊隆突部进行第二消化培养；步骤三：利用胰酶对第二次消化后获得的毛囊隆突部进行第三次消化培养；步骤四：终止消化，对经过三次消化处理得到的毛囊隆突部进行离心收集得到毛囊细胞；步骤五：将毛囊细胞在无血清的含各种氨基酸和葡萄糖的培养液中培养，进行初步分离，获得初步分离产物；步骤六：将初步分离产物置于培养皿中培养，离心后收集得到毛囊表皮中的角质祖细胞和毛囊真皮中特殊的成纤维细胞，即毛囊真皮乳头细胞；步骤七：取上层毛囊真皮乳头细胞进行培养，得到毛囊祖细胞。3.如权利要求1所述的毛囊祖细胞的注射药剂，其特征在于，所述步骤一中，利用分离酶对离体的毛囊进行第一消化培养，具体为：(1)取头发数根，利用75％酒精冲洗2～次；(2)截取生长期的毛囊组织，剪碎，利用0.35％分离酶，34℃～36℃，消化35-40min；(3)25℃,1000r/min离心2～4min，去除上清，将毛囊组织和消化的细胞种入36孔板中，6％CO2孵育箱培养。4.如权利要求1所述的毛囊祖细胞的注射药剂，其特征在于，所述步骤二中，采用在解剖显微镜下切取步骤一得到毛囊隆突部。5.如权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：林博杰，陈亚蓓，
申请(专利权)人：广西医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：广西,45