非遗传修饰的包膜病毒制造技术

本发明专利技术涉及修饰的包膜病毒，其中所述病毒包含至少一种非遗传地连接至或者插入/穿过所述病毒包膜的抗肿瘤、肿瘤特异性肽；包含所述病毒的药物组合物；以及利用所述病毒治疗癌症的方法。

Non-genetically modified envelope virus

The present invention relates to a modified envelope virus comprising at least one antineoplastic and tumor-specific peptide that is non-hereditarily connected to or inserted/passed through the envelope of the virus; a pharmaceutical composition comprising the virus; and a method for treating cancer using the virus.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】非遗传修饰的包膜病毒专利
本专利技术涉及修饰的包膜病毒，其中所述病毒包含至少一种非遗传地连接至或插入/穿过所述病毒包膜的抗肿瘤、肿瘤特异性肽；包含所述病毒的药物组合物；以及使用所述病毒治疗癌症的方法。专利技术背景当前用于有效癌症治疗的范例是增强肿瘤浸润性肿瘤特异性T效应细胞的活性以及增加它的量。这些被称为CD8+T细胞的T效应细胞，特别是细胞毒性T细胞淋巴细胞(CTL)是针对肿瘤的保护性免疫应答的关键组分。这些肿瘤特异性CTL存在于肿瘤组织，并且肿瘤浸润性CTL的量与患者存活率之间存在明显的相关性。最近批准的靶向诸如PD-1、PD-L1和CTLA-4的免疫检查点分子的抗体在临床上已极大的令人兴奋，其功能是中断肿瘤微环境中的负反馈系统以增强在先存在的抗肿瘤免疫应答。使用这些免疫检查点抑制剂抗体可在10-20％的癌症患者中产生持久的应答。然而，由于缺乏抗肿瘤免疫应答或者肿瘤微环境方面的其他免疫抑制，其余80-90％的患者无应答。为了扩大响应检查点抑制剂疗法的患者群体，我们开发了名为PeptiENV的包膜病毒载体平台，用于增强或产生广泛的抗肿瘤免疫并将肿瘤特异性T效应细胞招募到肿瘤微环境中。有利地，通过用免疫刺激性PeptiENV病毒和免疫检查点抑制剂抗体的组合治疗患者，我们期望增加免疫检查点抑制剂疗法的应答者数量。本专利申请描述了PeptiENV平台，其包括以下新方法：将免疫调节肽包被并插入病毒包膜上，接着可以容易地在抗原呈递细胞上交叉呈递。目前，没有以激活免疫系统为目的将肽非遗传地连接至病毒包膜上的方法。WO2005/060541教导了被插入至病毒外壳中以干扰病毒膜并破坏病毒膜的抗病毒肽。一些病毒具有覆盖其保护性蛋白质衣壳的病毒包膜。包膜通常来源自宿主细胞膜的部分(磷脂和蛋白质)，但包括一些病毒糖蛋白。它们可以帮助病毒避开宿主免疫系统。包膜表面的糖蛋白用于鉴定和结合宿主膜上的受体位点。然后病毒包膜与宿主膜融合，允许衣壳和病毒基因组进入并感染宿主。可选地，除了通过病毒和宿主细胞膜的融合进入宿主细胞之外，一些病毒可以使用内吞作为进入机制。实质上，我们已经发现了使用已知的治疗和临床批准的病毒，以抗病毒免疫为代价来增强抗肿瘤免疫的新方法。
技术实现思路
根据第一方面，提供选自下述的修饰的包膜病毒：单纯疱疹病毒1(HSV-1)、单纯疱疹病毒2(HSV-2)、牛痘病毒、印第安纳型水疱性口炎病毒(VSV)、麻疹病毒(MeV)、马拉巴病毒和新城疫(NDV)病毒，其中所述病毒包含至少一种非遗地传连接至或插入/穿过病毒包膜的抗肿瘤、肿瘤特异性肽。本文提到的修饰的包膜病毒是指非遗传修饰以将所述至少一种抗肿瘤、肿瘤特异性肽包含于其病毒包膜中的病毒。为避免疑义，所述病毒可能包含或不包含使其适于除非遗传性进行将所述至少一种抗肿瘤、肿瘤特异性肽连接至或穿过病毒包膜之外的目的任何其他遗传修饰。本领域技术人员将认识到，一些病毒具有覆盖其保护性蛋白质衣壳的病毒包膜。包膜通常来源于宿主细胞膜的部分(磷脂和蛋白质)，但包括一些病毒糖蛋白。它们可以帮助病毒避开宿主免疫系统。包膜表面的糖蛋白用于鉴定和结合宿主膜上的受体位点。在感染期间，病毒包膜与宿主膜融合，允许衣壳和病毒基因组进入并感染宿主。因此，连接至或插入或穿过病毒包膜的肽可用作抗原以引发免疫应答。本文提及的抗肿瘤肽是指可以引发针对肿瘤的免疫应答的肽。本文提及的肿瘤特异性肽是指可以引发针对特定一种或多种肿瘤的免疫应答的肽。在优选实施方案中，所述肽是患者识别的或患者特异性的。对于本领域技术人员显而易见的是，肽的确切性质可以根据待治疗的肿瘤的性质而变化，实际上该技术的特异性意味着将使用不同的抗肿瘤、肿瘤特异性肽来治疗呈现不同类型癌症的个体，甚至不同的抗肿瘤、肿瘤特异性肽可用于治疗呈现相同类型癌症的个体。在本专利技术的又一实施方案中，所述肽长度为8-50个氨基酸，理想长度为15-35个氨基酸。最理想地，所述肽的长度选自：8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49以及50个氨基酸。最理想地，多个所述肽连接至或插入/穿过病毒包膜。这些肽可以是相同的或代表仅含有较少修饰的相同抗原，即彼此具有大于90％的序列同一性，并且最理想的是彼此具有大于92％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性。可选地，许多不同的抗肿瘤、肿瘤特异性肽非遗传地连接至或插入/穿过病毒包膜。更优选地，所述肽还包含至少一个切割位点，例如但不限于组织蛋白酶切割位点或弗林蛋白酶切割位点。更优选地，所述肽包含至少一个免疫蛋白酶体加工位点。这些位点的实例及其相对于缀合肽结构的相对定位如图7所示。理想地，一种抗肿瘤、肿瘤特异性肽位于一对免疫蛋白酶体加工位点之间，并且其上游是至少一个切割位点，理想地，弗林蛋白酶切割位点(上游)之后有组织蛋白酶切割位点。有利地，我们发现这些肽在连接至或插入/穿过选定的包膜病毒(HSV-1和-2、牛痘病毒、VSV、MeV、马拉巴病毒和NDV)时，可以通过将抗病毒免疫转化为抗肿瘤免疫而引发增加的肿瘤特异性免疫应答并显著增强抗肿瘤效力。与其他平台相比，该平台的优势在于通过将患者识别的诱导抗肿瘤、肿瘤特异性肽非遗传地连接至或插入/穿过病毒包膜，我们可以在临床上使用医疗批准的病毒。这意味着只需通过用来自所述患者的一组新的肿瘤特异性肽包被病毒，就可以非常快速地对MHC-I上呈递的患者肿瘤抗原的变化作出反应。本专利技术的另一个重要特征在于，选择用于该平台的病毒只需要经过一次严格的质量控制和批准阶段，因此与其他平台相比节省了时间和金钱，所述其他平台中的具有遗传上引入修饰的病毒在每次引入新的修饰或肽时都需要经过检查阶段，因而几乎不可能在个体化用药中使用这些平台。在本专利技术的又一优选实施方案中，使用细胞穿透肽或胆固醇缀合肽(购自PepScan或Ontores)将所述肽连接至或插入/穿过所述病毒包膜。如本领域技术人员已知的，细胞穿透肽(CPP)是促进细胞吸收/摄取多种分子组件(从纳米尺寸颗粒到小的化学分子和大的DNA片段)的短肽。这种“货物”通过经共价键的化学连接或通过非共价相互作用与肽结合。CPP的功能是将货物运送到细胞中，这一过程通常通过胞吞发生。CPP通常具有下述氨基酸组成：含有高相对丰度的带正电荷的氨基酸(如赖氨酸或精氨酸)，或者具有含有极性/带电荷的氨基酸和非极性疏水氨基酸的交替模式的序列。这两种类型的结构分别被称为聚阳离子或两性的。第三类CPP是疏水肽，其仅含有非极性残基，具有低净电荷或具有对细胞摄取非常重要的疏水氨基酸基团。当与所述抗肿瘤、肿瘤特异性肽连接时，本专利技术设想使用任何已知的CCP。在不希望受到对作用机制的解释的束缚的情况下，我们认为尽管CPP通常通过脂质双分子层运送其货物，出于我们的目的，如果不是全部，则由CPP序列与我们的免疫原性肽组成的肽部分地穿过脂质双层，而其他部分似乎可以通过物理性疏水/亲水相互作用足以粘附于其上。与所述肽缀合时的CPP的实例显示在图7B中。如本领域技术人员所知，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.修饰的包膜病毒，其选自包括以下的组：单纯疱疹病毒1(HSV‑1)、单纯疱疹病毒2(HSV‑2)、牛痘病毒、印第安纳型水疱性口炎病毒(VSV)、麻疹病毒(MeV)、马拉巴病毒和新城疫(NDV)病毒，其中所述病毒包含至少一种非遗传地连接至或者插入/穿过病毒包膜的抗肿瘤、肿瘤特异性肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.27 GB 1616365.11.修饰的包膜病毒，其选自包括以下的组：单纯疱疹病毒1(HSV-1)、单纯疱疹病毒2(HSV-2)、牛痘病毒、印第安纳型水疱性口炎病毒(VSV)、麻疹病毒(MeV)、马拉巴病毒和新城疫(NDV)病毒，其中所述病毒包含至少一种非遗传地连接至或者插入/穿过病毒包膜的抗肿瘤、肿瘤特异性肽。2.根据权利要求1所述的修饰的包膜病毒，其中所述肽具有选自包括以下长度的组：8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49以及50个氨基酸。3.根据权利要求1或2所述的修饰的包膜病毒，其中多种所述肽非遗传地连接至或插入/穿过所述病毒包膜。4.根据权利要求3所述的修饰的包膜病毒，其中所述肽是相同的；所述肽彼此之间具有大于90％、91％、92％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性；或者所述肽代表多种不同的抗原。5.根据前述权利要求中任一项所述的修饰的包膜病毒，其中所述肽是MHC-I限制性的。6.根据前述权利要求中任一项所述的修饰的包膜病毒，其中所述肽是MHC-II限制性的。7.根据权利要求3-6中任一项所述的修饰的包膜病毒，其中所述肽包含MHC-I限制性肽和MHC-II限制性肽的混合物。8.根据前述权利要求中任一项所述的修饰的包膜病毒，其中所述肽包含含有多种不同抗原的融合分子。9.根据权利要求1-8中任一项所述的修饰的包膜病毒，其中所述肽还包含至少一个切割位点。10.根据权利要求1-9中任一项所述的修饰的包膜病毒，其中所述肽还包含至少一个免疫蛋白酶体加工位点。11.根据权利要求1-10中任一项所述的修饰的包膜病毒，其中所述肽位于一对免疫蛋白酶体加工位点之间，并且其上游或下游是至少一个切割位点。12.根据前述权利要求中任一项所述的修饰的包膜病毒，其中所述肽非共价连接至或插入/穿过所述病毒包膜。13.根据前述权利要求中任一项的修饰的包膜病毒，其中使用细胞穿透肽或胆固醇缀合肽将所述肽非遗传地连接至或插入/穿过所述病毒包膜。14.根据前述权利要求中任一项所述的修饰的包膜病毒，其中使用选自包括以下的组的细胞穿透肽或胆固醇缀合肽将所述肽非遗传地连接至或插入/穿过所述病毒包膜：GRKKRRQRRRPQ(SEQIDNO：1)，CPP序列位于所述抗肿瘤、肿瘤特异性肽的N或C末端；RQIKIWFQNRRMKWKK(SEQIDNO：2)，CPP序列位于所述抗肿瘤、肿瘤特异性肽的N或C末端；KLALKLALKALKAALKLA(SEQIDNO：3)，CPP序列位于所述抗肿瘤、肿瘤特异性肽的N或C末端；RRRRRRRRR(SEQIDNO：4)，CPP序列位于所述抗肿瘤、肿瘤特异性肽的N或C末端；KETWWETWWTEWSQPKKKRKV(SEQIDNO：5)，CPP序列位于所述抗肿瘤、肿瘤特异性肽的N或C末端；AGYLLGKINLKALAALAKKIL(SEQIDNO：6)，CPP序列位于所述抗肿瘤、肿瘤特异性肽的N或C末端；AGLWRALWRLLRSLWRLLWRA(SEQIDNO：7)，CPP序列位于所述抗肿瘤、肿瘤特异性肽的N或C末端；以及胆固醇部分位于所述抗肿瘤、肿瘤特异性肽的N或C末端。15.根据权利要求14所述的修饰的包膜病毒，其中所述肽选自包括以下的组：GRKKRRQRRRPQRVRRALISLEQLESIINFEKLTEW(SEQIDNO:8)；RQIKIWFQNRRMKWKKRWEKISIINFEKLYKLK(SEQIDNO:9)；KLALKLALKALKAALKLARWEKISIINFEKLYKLK(SEQIDNO:10)；RRRRRRRRRRWEKISIINFEKLYKLK(SEQIDNO:11)；RWEKISIINFEKLYKLRRRRRRRRR(SEQIDNO:12)；RWEKISIINFEKLYKLKETWWETWWTEWSQPKKKRKV(SEQIDNO:13)；RWEKISIINFEKLYKLAGYLLGKINLKALAALAKKIL(SEQIDNO:14)；AGLWRALWRLLRSLWRLLWRARWEKISIINFEKLYKLK(SEQIDNO:15)；GRKKRRQRRRPQRWEKISIINFEKLYKL(SEQIDNO:16)；GRKKRRQRRRPQRWE...

【专利技术属性】
技术研发人员：文森佐·史汝乐，克里斯蒂安·卡帕索，埃尔科·耶洛玛基，
申请(专利权)人：瓦洛治疗公司，
类型：发明
国别省市：芬兰,FI