一种采用不对称卟啉化合物测定甲硝唑含量的荧光光谱方法技术

本发明专利技术属于药物分析研究领域，具体涉及一种采用胶束增敏荧光猝灭分析法对肉桂酰氨基卟啉与甲硝唑之间的相互作用进行研究，利用甲硝唑对卟啉化合物这一荧光探针分子的荧光猝灭作用，荧光强度下降程度与该物质的浓度比成例，建立一种灵敏度高，选择性好，操作简便，可用于日常药物甲硝唑含量测定的新的荧光分析法；所述的甲硝唑含量测定的新的荧光分析法未见文献报道；所述的肉桂酰氨基卟啉(I)结构如下：

A Fluorescence Spectrometric Method for the Determination of Metronidazole by Asymmetric Porphyrin Compounds

The invention belongs to the field of pharmaceutical analysis, in particular to the study of the interaction between cinnamoyl aminoporphyrin and metronidazole by micellar sensitized fluorescence quenching analysis method, and the fluorescence quenching effect of metronidazole on porphyrin compound, a fluorescence probe molecule, in which the fluorescence intensity decreases in proportion to the concentration of the substance, so as to establish a high sensitivity and good selectivity. The new fluorescence analysis method for metronidazole content determination has not been reported in the literature. The structure of the cinnamoyl aminoporphyrin (I) is as follows:

【技术实现步骤摘要】
一种采用不对称卟啉化合物测定甲硝唑含量的荧光光谱方法
本专利技术涉及一种采用胶束增敏荧光猝灭分析法对肉桂酰氨基卟啉与甲硝唑之间的相互作用进行研究，利用甲硝唑对卟啉化合物这一荧光探针分子的荧光猝灭作用，荧光强度下降程度与该物质的浓度比成例，建立一种灵敏度高，选择性好，操作简便，可用于日常药物甲硝唑含量测定的新的荧光分析法。
技术介绍
甲硝唑在临床上的应用已有几十年的历史，主要用于抗滴虫和抗阿米巴原虫等，近年来广泛用于治疗厌氧菌感染。目前甲硝唑的含量测定方法有紫外分光光度法、多元校正-吸光光度法、高效液相色谱法、转换曲线分光光度法、双波长法、系数倍率法及联立方程组新解法、非水滴定法等，这些方法有些费时费力，方法繁琐，有些测量要求高。因此，需要探索一种新的灵敏度高、操作简便、选择性强的甲硝唑含量的测定方法。文献研究表明：随着卟啉光物理学性质研究的深入，卟啉被广泛应用于药物分析领域，利用四(苯并-15-冠-5)卟啉瑞利散射光谱法可用来测定L-谷氨酰胺含量；利用荧光分子探针的设计原理合成了四(4-氨基苯基)卟啉，并对其在水中的荧光性质进行了研究，并应用于水中钴离子和镍离子的识别等。因此，为了更加深入地研究卟啉光物理学性质及其在药物分析领域的应用，采用胶束增敏荧光猝灭分析法对肉桂酰氨基卟啉与甲硝唑之间的相互作用进行研究，利用甲硝唑对卟啉化合物这一荧光探针分子的荧光猝灭作用，荧光强度下降程度与该物质的浓度比成例，建立一种灵敏度高，选择性好，操作简便，可用于日常药物甲硝唑含量测定的新的荧光分析法。本领域目前需要建立一种灵敏度高、操作简便、选择性强的甲硝唑含量的测定的荧光分析方法。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种采用胶束增敏荧光猝灭分析法对肉桂酰氨基卟啉与甲硝唑之间的相互作用进行研究，利用甲硝唑对卟啉化合物这一荧光探针分子的荧光猝灭作用，荧光强度下降程度与该物质的浓度比成例，建立一种灵敏度高，选择性好，操作简便，可用于日常药物甲硝唑含量测定的新的荧光分析法，所述的方法未见文献报道；所述的肉桂酰氨基卟啉(I)的结构如下：其中，所述R表示氢原子或卤素原子或羟基或氨基或氰基或羧基或选自C1～C15的烷基、取代的C1～C15的烷基、C1～C15的烷氧基、取代的C1～C15的烷氧基、C1～C15的烯烃基、C1～C15的炔烃基、C6～C15的芳基和C1～C15的杂环基中的一种或多种；本专利技术提供了一种采用胶束增敏荧光猝灭分析法对肉桂酰氨基卟啉与甲硝唑之间的相互作用进行研究，利用甲硝唑对卟啉化合物这一荧光探针分子的荧光猝灭作用，荧光强度下降程度与该物质的浓度比成例，建立一种灵敏度高，选择性好，操作简便，可用于日常药物甲硝唑含量测定的新的荧光分析法，包括以下步骤：a)光谱测量条件的选择配制一定浓度的肉桂酰氨基卟啉溶液，进行UV-vis谱图扫描，初步确定激发波长范围。在不同激发波长下测其荧光强度，调整激发和发射狭缝宽度使荧光强度(F值)尽可能在1000左右，并观察其峰所在位置以便确定荧光扫描的激发波长范围；b)微乳液的选择表面活性剂在微乳液中的主要作用是降低界面张力和形成吸附膜，促使微乳液形成。主要采用阳离子型表面活性剂所组成的微乳液用于卟啉与甲硝唑相互作用的研究；所用的阳离子型表面活性剂为季铵盐类，优选十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)；c)缓冲体系的选择采用缓冲溶液体系作为卟啉与甲硝唑相互作用的介质，所用的缓冲体系包括PBS缓冲溶液，Britton-Robinson缓冲溶液，醋酸-醋酸钠缓冲溶液，KH2PO4-Na2B4O7缓冲溶液，优选Britton-Robinson缓冲溶液；d)组分添加的顺序组分添加顺序的不同使得ΔF变化很大，对实验的结果影响较大，添加组分包括：卟啉，甲硝唑，微乳液，缓冲液，优选组分添加的顺序为：卟啉+甲硝唑+微乳液+B-R缓冲液；e)共存物质的干扰实验研究甲硝唑片剂常用的辅料，对其测量误差影响，甲硝唑片剂常用的辅料在此体系中的浓度分别为甲硝唑浓度的40倍、500倍、500倍及500倍，但其测量误差最大的仅有3.1％，相对误差数值均小于5％。可以证明这些辅料的存在并不会对甲硝唑含量测定产生影响；所用辅料包括常见辅料：淀粉、糊精、阿拉伯胶及葡萄糖；f)标准曲线的测定在最佳的实验条件下测定不同浓度甲硝唑溶液与肉桂酰氨基卟啉作用的荧光强度，建立甲硝唑溶液与肉桂酰氨基卟啉相互作用的标准曲线；优选测定条件：0.3mL的1×10-5mol/L的肉桂酰氨基卟啉溶液、一系列不同体积的10μg/mL甲硝唑溶液、0.5mL的CTAB微乳液和1.5mL的pH4.10的B-R缓冲溶液，用水定容并摇匀，室温下静置15min，最佳条件下测量其荧光强度；g)检测限的测定根据公式：LOD＝3σ/K，σ是空白实验测定超过10次的标准偏差，K为标准曲线斜率。在最佳实验条件下测定体系的荧光强度；优选测定条件：在10mL容量瓶中分别按顺序加入以下物质：0.3mL的1×10-5mol/L的肉桂酰氨基卟啉溶液、0.5mL的CTAB微乳液和1.5mL的pH4.10的B-R缓冲溶液，用水定容，并摇匀，室温静置15min，相同条件下重复11次，测量其荧光强度；本专利技术提供了一种采用胶束增敏荧光猝灭分析法对肉桂酰氨基卟啉与甲硝唑之间的相互作用进行研究，利用甲硝唑对卟啉化合物这一荧光探针分子的荧光猝灭作用，建立一种灵敏度高，选择性好，操作简便，可用于日常药物甲硝唑含量测定的新的荧光分析法；具体实施方式为了进一步理解本专利技术，下面结合实施例对本专利技术优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本专利技术的特征和优点，而不是对本专利技术权利要求的限制。实施例中的肉桂酰氨基卟啉具体结构如下：实施例1光谱测量条件的选择配制2.8×10-6mol/L的肉桂酰氨基卟啉溶液，进行UV-vis谱图扫描，初步确定激发波长范围。在10mL容量瓶中按顺序加入：1.0×10-5mol/L的肉桂酰氨基卟啉0.25mL、CTAB微乳液0.5mL和pH4.10的B-R缓冲溶液1.5mL，用水定容至刻度，摇匀室温静置5分钟后，在不同激发波长下测其荧光强度，调整激发和发射狭缝宽度使荧光强度(F值)尽可能在1000左右，并观察其峰所在位置以便确定荧光扫描的波长范围。通过肉桂酰氨基卟啉的UV-vis谱图，最大吸收峰在420nm，初步确定其最大激发波长应在420nh左右。实验研究表明：肉桂酰氨基卟啉与甲硝唑反应体系在进行荧光强度测量时，最佳激发波长为410nm，荧光图谱发射峰分别在648nm和710nm，激发和发射狭缝宽度分别为5nm/10nm；实施例2微乳液的选择采用不同表面活性剂形成的不同微乳液为反应介质。实验结果表明，使用CTAB微乳液为反应介质时，荧光猝灭程度最明显(ΔF最大)，因此，CTAB微乳液为卟啉与甲硝唑相互作用的最佳反应介质，在10mL容量瓶中最适量为0.5mL。实施例3组分添加的顺序将所有组分包括：卟啉，甲硝唑，微乳液，缓冲液按不同顺序添加，测定荧光猝灭程度，研究表明第一组(添加顺序为：卟啉+甲硝唑+微乳液+B-R缓冲液)荧光猝灭程度为110.809，数值最大的，表明该添加顺序最为敏感，因此优选组分添加的顺序为：卟啉+甲硝唑+微乳液+B-R缓冲液；以上所述，仅是本专利技术的部分实本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一类可用于甲硝唑含量测定的荧光分析的肉桂酰氨基卟啉，其特征是具有下述通式(I)：

【技术特征摘要】
1.一类可用于甲硝唑含量测定的荧光分析的肉桂酰氨基卟啉，其特征是具有下述通式(I)：其中，所述R表示氢原子或卤素原子或羟基或氨基或氰基或羧基或选自C1～C15的烷基、取代的C1～C15的烷基、C1～C15的烷氧基、取代的C1～C15的烷氧基、C1～C15的烯烃基、C1～C15的炔烃基、C6～C15的芳基和C1～C15的杂环基中的一种或多种。2.对权利要求1所述的肉桂酰氨基卟啉(I)与甲硝唑之间的相互作用采用胶束增敏荧光猝灭分析法进行研究，利用甲硝唑对卟啉化合物这一荧光探针分子的荧光猝灭作用，建立一种灵敏度高，选择性好，操作简便，可用于日常药物甲硝唑含量测定的新的荧光分析法，其特征在于步骤和条件如下：a)组分添加的顺序将所有组分包括：所述的肉桂酰氨基卟啉(I)，甲硝唑，微乳液，缓冲液按不同顺序添加，测定荧光猝灭程度，优选组分添加顺序为：卟啉+甲硝唑+微乳液+B-R缓冲液；b)微乳液的选择采用不同表面活性剂形成的不同微乳液为反应介质，优先采用阳离子型表面活性剂所组成的微乳液用于所述的肉桂酰氨基卟啉(I)与甲硝唑相互作用的研究，所述的阳离子型表面活性剂为季铵盐类，优选十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)；c)缓冲体系的选择采用缓冲溶液体系作为所述的肉桂酰氨基卟啉(I)与甲硝唑相互作用的介质，所用的缓冲体系包括PBS缓冲溶液，Britton-Robinson缓冲溶液，醋酸-醋酸钠缓冲...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵宝娟，吴玉莹，李倩，刘涛，唐小宇，王丹，王晓东，徐天玉，
申请(专利权)人：天津工业大学，
类型：发明
国别省市：天津,12