一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法，可以方便一起携带检测卡和样本稀释液，且所述试纸卡槽的设置可以快速、精准的将所述试纸条放置到所述卡体中，所述卡盖与所述卡体的设置可以方便更换所述试纸条，可以重复利用，既节约成本，也符合环保的要求；所述调节板的设置可以保持所述试纸条在所述卡体中水平，有利于全血更好的爬升、层析。

【技术实现步骤摘要】
一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法
专利技术涉及体外诊断
具体地说，是涉及一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
手足口病（hand，footandmouthdisease，HFMD）是一种婴幼儿人群常见的急性传染病，是以发热和手、足、口腔出现皮疹、疱疹和小溃疡为临床表现的传染性疾病，多发于５岁以下儿童。少数患者可出现无菌性脑膜炎、脑炎及急性弛缓性麻痹等中枢神经系统症状的严重并发症，严重者可导致死亡。自2008年我国HFMD大流行后，HFMD已成为我国严重的公共卫生问题之一。截至2018年4月，全国已报道HFMD发病1644.8万例，婴幼儿死亡3545例。近年来，中国大陆地区引起手足口病的主要病原体是肠道病毒71(EV71)和柯萨奇病毒A16(CoxA16)。然而，自2008年开始，柯萨奇病毒A6(CoxA6)在部分地区逐渐出现并成为引发手足口病暴发流行的优势菌株。CoxA6和CoxA10均属于小核糖核酸病毒科的肠道病毒属。病毒颗粒为二十面立体结构的球形或卵圆形，直径22～30nm，呈圆形颗粒状。自2008年在新加坡的暴发流行，CoxA6和CoxA10成为手足口病的主要致病血清型，共占该病的35.3%。2010年中国台湾和日本手足口病大暴发的主要病原是CoxA6。2012年印度手足口病的主要病原是CoxA6和CoxA16，而EV71和CoxA10则次之。2013年以前，中国多地区暴发流行的手足口病病原以EV71和CoxA16为主，CoxA6和CoxA10次之。2013年以后，CoxA6和CoxA10相关的手足口病的比例逐渐上升，成为国内手足口病感染的优势病原体。目前，我国的手足口病病原诊断市场，仍然以检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型为主，也出现了检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒，如专利《一种检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒》，专利号（201410012004.1）。虽然聚合酶链反应（PCR）检测快速、特异性和敏感性高，但其高敏感性也使PCR法对实验环境和仪器要求比较高，存在着技术条件要求高、操作复杂、不易普及的问题，一般基层实验室难以开展，且价格也相对较高。同时，由于手足口病的易感人群为5岁以下儿童，检测抗原需要取咽拭子，检测抗体需取全血，对于幼儿来说，明显取指尖血更易操作，但指尖取血量最多不超过40µL。因此，对IgM抗体检测试剂盒的要求必须灵敏度高、取血量少。由于乳胶颗粒粒径大可提高灵敏度，对样品垫处理以过滤红细胞实现全血检测，同时样本稀释液中加入消除假阳成分，最终设计开发出一种特异针对柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的快速检测试剂。
技术实现思路
专利技术的目的在于克服上述传统技术的不足之处，提供一种能同时检测柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体，检测灵敏度高、全血用量少，满足幼儿快速检测需要的一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法。专利技术的目的是通过以下技术措施来达到的：一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒，包括盒体，所述盒体内设有第一凹槽，所述第一凹槽放置检测卡，所述盒体内设有第二凹槽，所述第二凹槽放置样本稀释液的瓶体；所述检测卡包括卡盖，与所述卡盖卡接的卡体，以及能更换的位于所述卡盖与所述卡体之间的试纸条；其特征在于：所述卡盖上依次设有稀释液加样孔、样本加样孔、观测孔和安装标示孔，所述卡盖上设有与所述卡体卡接的第一卡接装置；所述卡体上设有与所述第一卡接装置卡接的第二卡接装置，所述卡体上还设有放置所述试纸条的试纸卡槽。作为一种改进，所述第一卡接装置包括所述卡盖周边与所述卡体接触的一面设有卡接凹槽，所述卡盖内朝向所述卡体的一面设有若干卡接圆柱；所述第二卡接装置包括所述卡体周边朝向所述卡盖的一面上设有与所述卡接凹槽配合的卡接凸起，所述卡体上设有若干圆柱体，所述圆柱体内设有与所述卡接圆柱配合的圆柱凹槽。作为进一步的改进，所述试纸卡槽包括第一试纸条限位板和第二试纸条限位板，所述第一试纸条限位板与所述第二试纸条限位板之间的距离为所述试纸条的宽度，所述第一试纸条限位板与所述第二试纸条限位板的两端分别设有固定挡板，两所述固定挡板之间的距离为所述试纸条的长度；所述试纸卡槽还包括若干保持所述试纸条水平的调节板；所述试纸卡槽还包括第一试纸条放置标识和第二试纸条放置标识，所述第一试纸条放置标识与所述第二试纸条放置标识位于同一水平线上，且所述第一试纸条放置标识、所述第二试纸条放置标识的两个相近端之间的距离为所述试纸条的宽度。作为进一步的改进，所述试纸条包括基层，所述基层上依次设有样品垫层、乳胶层、硝酸纤维素膜和吸水层，所述吸水层的上方覆盖设有专用标签条，所述乳胶层的上方覆盖设有白贴，所述样品垫层与所述稀释液加样孔和所述样本加样孔相对应；所述硝酸纤维素膜与所述观测孔相对应，所述专用标签条与所述安装标示孔相对应。作为进一步的改进，所述样品垫层包括第一样品垫层，设置在所述第一样品垫层上方的第二样品垫层；所述第一样品垫层为滤血膜，所述第二样品垫层为经过样品垫层预处理液处理的垫层；所述乳胶层为固相有鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜；所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述检测线为包被重组柯萨奇病毒A6型抗原的检测线T1和包被重组柯萨奇病毒A10型抗原的检测线T2；所述质控线为包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C。本专利技术的另一个目的是：一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：步骤一、样本稀释液的制备；步骤二、样品垫层的制备（1）样品垫层预处理液的配制（2）第二样品垫层预处理将裁切好的玻璃纤维至浸泡于所述步骤（1）的样品垫层预处理液中，静置5～8分钟取出，经过干燥处理后封存备用；（3）第一样品垫层的处理将购买的滤血膜裁成宽长30cm，宽0.7cm的长条；步骤三、乳胶层的制备（1）微球活化；（2）将鼠抗人IgM单克隆抗体偶联至活化乳胶微球；步骤四、硝酸纤维素膜的制备（1）包被重组柯萨奇病毒A6型抗原：用pH7.2～7.5的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A6型抗原稀释至0.2～0.4mg/mL固相于硝酸纤维素膜上，形成重组柯萨奇病毒A6型抗原检测线；（2）包被重组柯萨奇病毒A10型抗原：用pH7.2～7.5的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A10型抗原稀释至0.3～0.5mg/mL固相于步骤（1）相应的硝酸纤维素膜上，形成重组柯萨奇病毒A10型抗原检测线；（3）包被羊抗鼠IgG抗体：用pH8.0～8.2的PBS缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释至1.4～1.6mg/mL，并分别喷于所述步骤（2）相应的硝酸纤维素膜上，形成羊抗鼠IgG抗体质控线；五、试纸条的制备（1）在基层（作为支持物）中间位置粘贴硝酸纤维素膜；（2）在基层上固定硝酸纤维素膜的一端粘贴吸水层，吸水层覆盖硝酸纤维素膜边沿约1.0～2.0mm；（3）吸水层上覆盖专用标签条；（4）在基层上硝酸纤维素膜的另一端粘贴乳胶层（鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜），乳胶层覆盖硝酸纤维素膜约1.0～2.0mm；（5）在基层靠近端面的位置粘贴第一样品垫层滤血膜，宽度约7.0～7.5mm；（6）在基层本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒，包括盒体，所述盒体内设有第一凹槽，所述第一凹槽放置检测卡，所述盒体内设有第二凹槽，所述第二凹槽放置样本稀释液的瓶体；所述检测卡包括卡盖，与所述卡盖卡接的卡体，以及能更换的位于所述卡盖与所述卡体之间的试纸条；其特征在于：所述卡盖上依次设有稀释液加样孔、样本加样孔、观测孔和安装标示孔，所述卡盖上设有与所述卡体卡接的第一卡接装置；所述卡体上设有与所述第一卡接装置卡接的第二卡接装置，所述卡体上还设有放置所述试纸条的试纸卡槽。

【技术特征摘要】
1.一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒，包括盒体，所述盒体内设有第一凹槽，所述第一凹槽放置检测卡，所述盒体内设有第二凹槽，所述第二凹槽放置样本稀释液的瓶体；所述检测卡包括卡盖，与所述卡盖卡接的卡体，以及能更换的位于所述卡盖与所述卡体之间的试纸条；其特征在于：所述卡盖上依次设有稀释液加样孔、样本加样孔、观测孔和安装标示孔，所述卡盖上设有与所述卡体卡接的第一卡接装置；所述卡体上设有与所述第一卡接装置卡接的第二卡接装置，所述卡体上还设有放置所述试纸条的试纸卡槽。2.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒，其特征在于：所述第一卡接装置包括所述卡盖周边与所述卡体接触的一面设有卡接凹槽，所述卡盖内朝向所述卡体的一面设有若干卡接圆柱；所述第二卡接装置包括所述卡体周边朝向所述卡盖的一面上设有与所述卡接凹槽配合的卡接凸起，所述卡体上设有若干圆柱体，所述圆柱体内设有与所述卡接圆柱配合的圆柱凹槽。3.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒，其特征在于：所述试纸卡槽包括第一试纸条限位板和第二试纸条限位板，所述第一试纸条限位板与所述第二试纸条限位板之间的距离为所述试纸条的宽度，所述第一试纸条限位板与所述第二试纸条限位板的两端分别设有固定挡板，两所述固定挡板之间的距离为所述试纸条的长度；所述试纸卡槽还包括若干保持所述试纸条水平的调节板；所述试纸卡槽还包括第一试纸条放置标识和第二试纸条放置标识，所述第一试纸条放置标识与所述第二试纸条放置标识位于同一水平线上，且所述第一试纸条放置标识、所述第二试纸条放置标识的两个相近端之间的距离为所述试纸条的宽度。4.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒，其特征在于：所述第一凹槽设有取出槽。5.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒，其特征在于：所述试纸条包括基层，所述基层上依次设有样品垫层、乳胶层、硝酸纤维素膜和吸水层，所述吸水层的上方覆盖设有专用标签条，所述乳胶层的上方覆盖设有白贴，所述样品垫层与所述稀释液加样孔和所述样本加样孔相对应；所述硝酸纤维素膜与所述观测孔相对应，所述专用标签条与所述安装标示孔相对应。6.如权利要求5所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒，其特征在于：所述样品垫层包括第一样品垫层，设置在所述第一样品垫层上方的第二样品垫层；所述第一样品垫层为滤血膜，所述第二样品垫层为经过样品垫层预处理液处理的垫层；所述乳胶层为固相有鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜；所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述检测线为包被重组柯萨奇病毒A6型抗原的检测线T1和包被重组柯萨奇病毒A10型抗原的检测线T2；所述质控线为包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C。7.一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：步骤一、样本稀释液的制备；步骤二、样品垫层的制备（1）样品垫层预处理液的配制（2）第二样品垫层预处理将裁切好的玻璃纤维至浸泡于所述步骤（1）的样品垫层预处理液中，静置5～8分钟取出，经过干燥处理后封存备用；（3）第一样品垫层的处理将购买的滤血膜裁成宽长30cm，宽0.7cm的长条；步骤三、乳胶层的制备（1）微球活化；（2）将鼠抗人IgM单克隆抗体偶联至活化乳胶微球；步骤四、硝酸纤维素膜的制备（1）包被重组柯萨奇病毒A6型抗原：用pH7.2～7.5的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A6型抗原稀释至0.2～0.4mg/mL固相于硝酸纤维素膜上，形成重组柯萨奇病毒A6型抗原检测线；（2）包被重组柯萨奇病毒A10型抗原：用pH7.2...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨致亭，黎村艳，姚立琼，吴佳玲，李贞，杨明霞，
申请(专利权)人：潍坊市康华生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37