The invention relates to the field of pharmaceutical synthesis and chemical industry, in particular to a purification method of Degu insulin precursor. The inclusion body obtained by fermentation of Escherichia coli is denatured, renatured, digested by enzyme and purified by cation exchange chromatography in one step, and the Degu insulin precursor with purity over 98% can be prepared. The denatured sample in the invention does not undergo cation exchange chromatography. The process of capturing proinsulin and refolding it directly; the purity after enzymatic digestion is about 30%, and more than 98% of the purity of Degu insulin precursor can be directly obtained by one-step ion exchange chromatography; the invention reduces the preparation process of Degu insulin precursor, reduces the purification step, reduces the loss caused by multi-process steps, simplifies the production process and reduces the production cost.
【技术实现步骤摘要】
一种德谷胰岛素前体的纯化方法
本专利技术涉及药物合成及化工领域,特别涉及一种德谷胰岛素前体的纯化方法。
技术介绍
糖尿病是一种常见的代谢内分泌疾病,其已成为继心脑血管疾病、恶性肿瘤的第三大威胁人类健康的慢性非传染性疾病。糖尿病常常伴有多种并发症,容易引起多种器官损害、功能性障碍和衰竭,危害很大。目前,中国已成为世界上糖尿病患者人数最多的国家。胰岛素为最有效的糖尿病治疗药物之一,而德谷胰岛素前体可与小分子连接形成长效德谷胰岛素,这种独特的结构使得德谷胰岛素形成多六聚体,能够稳定、持久的发挥降糖作用,可大大提高用药安全性。德谷胰岛素前体一般有两种来源,一种为包涵体来源,另一种为分泌蛋白来源。一般包涵体来源的德谷胰岛素前体胰岛素原的捕获方法为阳离子层析纯化,然后经复性、酶切,得到德谷胰岛素前体粗品,再经纯化步骤得到德谷胰岛素前体。分泌蛋白来源的德谷胰岛素前体胰岛素原经前处理(微滤或盐析),阳离子层析捕获,酶切得到德谷胰岛素前体粗品,再经纯化步骤得到德谷胰岛素前体。现有技术中,德谷胰岛素前体的纯化方法存在工艺复杂、效率低、成本高等缺陷。
技术实现思路
本专利技术解决现有技术中存在的上述技术问题,提供一种德谷胰岛素前体的纯化方法。为解决上述问题,本专利技术的技术方案如下:一种德谷胰岛素前体纯化方法,包括以下步骤:步骤1,大肠杆菌发酵结束后,离心收集菌体,进行破碎,离心收集包涵体沉淀;步骤2,将所述离心收集包涵体沉淀溶解;步骤3,将溶解后的包涵体复性;步骤4,将复性后的德谷胰岛素前体进行酶切转换,得到粗品德谷胰岛素前体;步骤5,采用阳离子交换层析纯化粗品德谷胰岛素前体,制 ...
【技术保护点】
1.一种德谷胰岛素前体纯化方法,其特征在于,采用阳离子交换层析,通过洗脱液洗脱得到纯品;所述洗脱液由洗脱缓冲液A与洗脱缓冲液B按照1:3的比例混合形成;所述缓冲液A为磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、乳酸缓冲液中任意一种,所述缓冲液A中还包括:有机相;所述有机相为甲醇、乙腈、乙醇、正丙醇中任意一种;所述缓冲液B为磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、乳酸缓冲液中任意一种,所述缓冲液B中还包括:有机相和无机盐;所述有机相为甲醇、乙腈、乙醇、正丙醇中任意一种;所述无机盐为的氯化铵、硫酸铵、氯化钠中任意一种。
【技术特征摘要】
1.一种德谷胰岛素前体纯化方法,其特征在于,采用阳离子交换层析,通过洗脱液洗脱得到纯品;所述洗脱液由洗脱缓冲液A与洗脱缓冲液B按照1:3的比例混合形成;所述缓冲液A为磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、乳酸缓冲液中任意一种,所述缓冲液A中还包括:有机相;所述有机相为甲醇、乙腈、乙醇、正丙醇中任意一种;所述缓冲液B为磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、乳酸缓冲液中任意一种,所述缓冲液B中还包括:有机相和无机盐;所述有机相为甲醇、乙腈、乙醇、正丙醇中任意一种;所述无机盐为的氯化铵、硫酸铵、氯化钠中任意一种。2.如权利要求1所述的德谷胰岛素前体纯化方法,其特征在于,所述缓冲液A和缓冲液B的pH为2.0-4.0。3.如权利要求1所述的德谷胰岛素前体纯化方法,其特征在于,所述缓冲液A和缓冲液B的pH为3.5。4.如权利要求1所述的德谷胰岛素前体纯化方法,其特征在于,所述缓冲液A为质量分数为10%的正丙醇和20mmol/L乳...
【专利技术属性】
技术研发人员:梅丽,张媛,文良柱,李秀,
申请(专利权)人:江苏万邦医药科技有限公司,江苏万邦生化医药集团有限责任公司,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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