复合型脱细胞真皮基质生物敷料及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种复合型脱细胞真皮基质生物敷料及其制备方法，通过采用脂肪醇聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚、十二烷基磺酸钠以合适的比例混合，对皮肤进行脱脂后，采用合适比例的Dispase与Trypsin‑EDTA复合酶对皮肤进行脱细胞处理后，浸泡于羧甲基壳聚糖、透明质酸、羟乙基纤维素、氯化钙和硫酸角质素混合溶液并以氧化海藻酸钠进行交联反应，基于脱脂率高且保持了原有皮肤胶原的含量的特点，并配合羧甲基壳聚糖、透明质酸、羟乙基纤维素、氯化钙和硫酸角质素的联合协效作用，制备得到的复合型脱细胞真皮基质生物敷料，具有良好的抗菌、促愈合的功效，且该敷料能同时兼具良好的机械性能，易于平铺敷于伤口表面，不易破损。

Compound acellular dermal matrix biological dressing and its preparation method

The invention provides a composite acellular dermal matrix biological dressing and its preparation method. After degreasing the skin by mixing aliphatic alcohol polyoxyethylene ether, nonylphenol polyoxyethylene ether and sodium dodecyl sulfonate in an appropriate proportion, the skin is treated with a suitable proportion of Dispase and Trypsin EDTA complex enzyme, and soaked in carboxymethyl chitosan and permeated. Mineral acid, hydroxyethyl cellulose, calcium chloride and keratin sulfate were mixed and crosslinked with sodium alginate oxide. Based on the characteristics of high degreasing rate and maintaining the original skin collagen content, and combined with the synergistic effect of carboxymethyl chitosan, hyaluronic acid, hydroxyethyl cellulose, calcium chloride and keratin sulfate, a composite acellular dermal matrix was prepared. Biological dressing has good anti-bacterial and healing effect, and it has good mechanical properties at the same time. It is easy to spread on the wound surface and is not easy to be damaged.

【技术实现步骤摘要】
复合型脱细胞真皮基质生物敷料及其制备方法
本专利技术属于生物医用材料领域，特别涉及一种复合型脱细胞真皮基质生物敷料。
技术介绍
脱细胞真皮基质敷料就是一种可以用于全层皮肤缺损的真皮替代物以及用于烧伤等皮肤损伤创面愈合的医用敷料，它是天然皮肤经过一系列处理去除了表皮和真皮中的细胞成分，但保留了真皮细胞外基质成分和其三维空间结构，这样的结构可以为皮肤再生提供“真皮模板”，诱导移植后宿主细胞成分如成纤维细胞、内皮细胞等在支架结构中分化、生长。但传统方法制得的脱细胞真皮基质(ADM)敷料存在渗透性差、抗菌性能低、生物相容性差等缺点，在烧伤，糖尿病足溃疡、压疮、下肢静脉溃疡、不愈性手术切口、外伤、慢性伤口、供皮区等各类伤口的治疗中，存在愈合周期长、易疤痕增生、易感染等缺点，严重影响创面愈合效果。基于此，有必要提供一种能够兼顾促进创面愈合效果、生物相容性好、刺激性小，且机械性能好的复合型脱细胞真皮基质生物敷料。
技术实现思路
基于此，本专利技术的目的在于提供一种复合型脱细胞真皮基质生物敷料，能够兼顾促进创面愈合效果、生物相容性好、刺激性小，且机械性能好的效果。为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种复合型脱细胞真皮基质生物敷料的制备方法，包括以下步骤：(1)将皮肤样品浸泡于脱脂剂中超声处理脱脂，得脱脂皮肤；所述脱脂剂中包括脂肪醇聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚、十二烷基磺酸钠；(2)脱细胞：将脱脂皮肤反复冻融后，置于复合酶溶液中孵育过夜，得脱细胞皮肤；(3)将所述脱细胞皮肤浸渍于羧甲基壳聚糖、透明质酸、羟乙基纤维素、氯化钙和硫酸角质素的混合溶液中；滴加氧化海藻酸钠溶液进行交联，即得。在其中一些实施例中，所述脱脂剂为：18wt％～22wt％脂肪醇聚氧乙烯醚、13wt％～17wt％壬基酚聚氧乙烯醚和4wt％～6wt％十二烷基磺酸钠的混合液。在其中一些实施例中，所述脱脂剂中：18wt％～22wt％脂肪醇聚氧乙烯醚、13wt％～17wt％壬基酚聚氧乙烯醚和4wt％～6wt％十二烷基磺酸钠以体积比为1:(1～5):(1～3)混合。在其中一些实施例中，所述将皮肤样品浸泡于脱脂剂中超声处理脱脂的时间为3～5h。在其中一些实施例中，步骤(3)所述的混合溶液为：4wt％～6wt％羧甲基壳聚糖、10wt％～20wt％透明质酸、5wt％～10wt％羟乙基纤维素、1wt％～5wt％氯化钙、5wt％～7wt％硫酸角质素，和/或步骤(3)所述的混合溶液4wt％～6wt％羧甲基壳聚糖、10wt％～20wt％透明质酸、5wt％～10wt％羟乙基纤维素、1wt％～5wt％氯化钙、5wt％～7wt％硫酸角质素按体积比1:(2～8)：(2～5)：(1～5):(3～6)的混合。在其中一些实施例中，步骤(3)所述的滴加氧化海藻酸钠溶液进行交联为：滴加10wt％～25wt％氧化海藻酸钠进行交联，交联20～60min；和/或步骤(3)所述的滴加的氧化海藻酸钠溶液与所述混合溶液的体积比为(1～3)：50。在其中一些实施例中，所述脱脂皮肤反复冻融后，置于复合酶溶液中孵育过夜为：从-80℃到37℃反复冻融2～4次后，置于4℃于复合酶溶液中孵育过夜。在其中一些实施例中，步骤(2)所述复合酶溶液为：2.5wt％～3.5wt％Dispase与0.2wt％～0.3wt％trypsin-EDTA以体积比1:(2～5)混合得到；和/或步骤(2)所述的复合酶溶液中孵育过夜后，还包括以下步骤：加入含有血清的DMEM培养基终止消化；将脱细胞样品置于抗生素溶液浸泡4～6分钟，PBS浸泡8～12分钟，重复3～5次。本专利技术还提供了一种复合型脱细胞真皮基质生物敷料，具体技术方案如下：一种复合型脱细胞真皮基质生物敷料，由如上所述的制备方法制备得到。本专利技术还提供了复合型脱细胞真皮基质生物敷料的应用，具体技术方案如下：上述复合型脱细胞真皮基质生物敷料在促进皮肤愈合中的应用。基于上述技术方案，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术针对敷料的促进创面愈合效果、生物相容性及机械性能之间难以兼顾的问题，通过采用脂肪醇聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚、十二烷基磺酸钠以合适的比例混合，对皮肤进行脱脂后，采用合适比例的Dispase与Trypsin-EDTA复合酶对皮肤进行脱细胞处理后，浸泡于羧甲基壳聚糖、透明质酸、羟乙基纤维素、氯化钙和硫酸角质素混合溶液并以氧化海藻酸钠进行交联反应，基于脱脂率高且保持了原有皮肤胶原的含量的特点，并配合羧甲基壳聚糖、透明质酸、羟乙基纤维素、氯化钙和硫酸角质素的联合协效作用，制备得到的复合型脱细胞真皮基质生物敷料，具有良好的抗菌、促愈合的功效，且该敷料能同时兼具良好的机械性能，易于平铺敷于伤口表面，不易破损，应用效果好。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将参照实施例对本专利技术进行更全面的描述，以下给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。实施例中所用到的各种常用试剂，均为市售产品。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。本专利技术提供了一种复合型脱细胞真皮基质生物敷料的制备方法，包括以下步骤：(1)将皮肤样品浸泡于脱脂剂中超声处理脱脂，得脱脂皮肤；所述脱脂剂中包括脂肪醇聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚、十二烷基磺酸钠；(2)脱细胞：将脱脂皮肤反复冻融后，置于复合酶溶液中孵育过夜，得脱细胞皮肤；(3)将所述脱细胞皮肤浸渍于羧甲基壳聚糖、透明质酸、羟乙基纤维素、氯化钙和硫酸角质素的混合溶液中；滴加氧化海藻酸钠溶液进行交联，即得。优选地，所述脱脂剂为：18wt％～22wt％脂肪醇聚氧乙烯醚、13wt％～17wt％壬基酚聚氧乙烯醚和4wt％～6wt％十二烷基磺酸钠的混合液；更优选的，三者以以体积比为1:(1～5):(1～3)混合。进一步优选地，采用20％脂肪醇聚氧乙烯醚、15％壬基酚聚氧乙烯醚和5％十二烷基磺酸钠以1:3:2的合适的比例混合，在其协同作用下，在制备脱细胞真皮基质过程中，能够实现很好的脱脂效果，并且减少皮肤胶原的损失。优选地，采用上述脱脂剂进行脱脂处理的时间为3～5h，具体地，将皮肤样品浸泡于脱脂剂中超声处理脱脂的时间为3～5h。进一步地，步骤(3)所述的混合溶液为：4wt％～6wt％羧甲基壳聚糖、10wt％～20wt％透明质酸、5wt％～10wt％羟乙基纤维素、1wt％～5wt％氯化钙、5wt％～7wt％硫酸角质素的混合溶液；优选地，4wt％～6wt％羧甲基壳聚糖、10wt％～20wt％透明质酸、5wt％～10wt％羟乙基纤维素、1wt％～5wt％氯化钙、5wt％～7wt％硫酸角质素的混合溶液按体积比1:(2～8)：(2～5)：(1～5):(3～6)的混合，优选为1:5:3:3:4。优选地，步骤(3)所述的滴加氧化海藻酸钠溶液进行交联为：滴加10wt％～25wt％氧化海藻酸钠进行交联，交联20～60min。其中一些实施例中，滴加的氧化海藻酸钠溶液与所述混合溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复合型脱细胞真皮基质生物敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将皮肤样品浸泡于脱脂剂中超声处理脱脂，得脱脂皮肤；所述脱脂剂中包括脂肪醇聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚、十二烷基磺酸钠；(2)脱细胞：将脱脂皮肤反复冻融后，置于复合酶溶液中孵育过夜，得脱细胞皮肤；(3)将所述脱细胞皮肤浸渍于羧甲基壳聚糖、透明质酸、羟乙基纤维素、氯化钙和硫酸角质素的混合溶液中；滴加氧化海藻酸钠溶液进行交联，即得。

【技术特征摘要】
1.一种复合型脱细胞真皮基质生物敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将皮肤样品浸泡于脱脂剂中超声处理脱脂，得脱脂皮肤；所述脱脂剂中包括脂肪醇聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚、十二烷基磺酸钠；(2)脱细胞：将脱脂皮肤反复冻融后，置于复合酶溶液中孵育过夜，得脱细胞皮肤；(3)将所述脱细胞皮肤浸渍于羧甲基壳聚糖、透明质酸、羟乙基纤维素、氯化钙和硫酸角质素的混合溶液中；滴加氧化海藻酸钠溶液进行交联，即得。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述脱脂剂为：18wt％～22wt％脂肪醇聚氧乙烯醚、13wt％～17wt％壬基酚聚氧乙烯醚和4wt％～6wt％十二烷基磺酸钠的混合液。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述脱脂剂中：18wt％～22wt％脂肪醇聚氧乙烯醚、13wt％～17wt％壬基酚聚氧乙烯醚和4wt％～6wt％十二烷基磺酸钠以体积比为1:(1～5):(1～3)混合。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述将皮肤样品浸泡于脱脂剂中超声处理脱脂的时间为3～5h。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的混合溶液为：4wt％～6wt％羧甲基壳聚糖、10wt％～20wt％透明质酸、5wt％～10wt％羟乙基纤维素、1wt％～5wt％氯化钙、5wt％～7wt％硫酸角质素，和/或步骤(3)所述的混合溶液4wt％～6wt％羧甲基壳聚糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄燕飞，车七石，刘少辉，
申请(专利权)人：广州润虹医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44