The present disclosure relates to the field of fluorescent dyes, and in particular to combinations and methods for increasing fluorescence signals and reducing fluorescence quenching.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于增强荧光的组合物和方法
本公开涉及荧光染料领域，并且特别涉及用于增加荧光信号和减少荧光猝灭的组合物和方法。
技术介绍
荧光标记的生物分子广泛用于各种方法，包括与定量测定和细胞成像有关的方法。生物分子如抗体、抗原、DNA和RNA被荧光标记并用于如免疫荧光(IFC)、流式细胞术、荧光激活细胞分选(FACS)、免疫组织化学(IHC)、蛋白质印迹、药物结合研究、酶动力学、成像(免疫细胞化学ICC)包括HCA、体内成像以及核酸杂交等应用中。荧光染料继续被选择用于这些应用，因为它们易于使用并且不仅特异且敏感，而且还提供多路复用选项。然而，并非所有应用都适合荧光标记。例如，在许多应用中，随着增加量的荧光标记物(高染料与蛋白质的比率)被添加到生物分子中(猝灭)，荧光的强度可以降低。此外，通过生物分子的荧光标记引起的空间位阻也可以降低荧光。需要展现增强的信号强度的荧光标记物和缀合方法。
技术实现思路
本文公开了通过例如经修饰的接头、化学物质和特定方案增加与生物分子缀合的荧光染料的强度的组合物和方法。因此，本专利技术的一个方面是改善染料的性能。已经发现，与用单独的染料制备的相应缀合物...
【技术保护点】
1.一种包含第一抗体的组合物，其中两个或更多个荧光标记物和两个或更多个间隔分子共价连接到所述第一抗体，和其中所述荧光标记物和间隔分子彼此不共价连接。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.01 US 62/382,5941.一种包含第一抗体的组合物，其中两个或更多个荧光标记物和两个或更多个间隔分子共价连接到所述第一抗体，和其中所述荧光标记物和间隔分子彼此不共价连接。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述第一抗体表现出高于用等量荧光标记物但没有所述间隔分子制备的第二抗体的荧光发射水平。3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述第一抗体表现出高于第二抗体的荧光发射水平，其中所述第一抗体和所述第二抗体各自具有相同数量的共价结合的荧光标记物，并且其中所述第二抗体不具有共价结合的间隔分子。4.根据权利要求1所述的组合物，其中与不存在所述间隔分子时的猝灭相比，所述间隔分子减少所述荧光标记物的猝灭。5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子通过反应性基团与所述抗体缀合。6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述反应性基团是胺基。7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述胺基在赖氨酸残基上。8.根据权利要求1所述的组合物，其中所述荧光标记物通过缀合分子与所述抗体缀合。9.根据权利要求1所述的组合物，其中所述荧光标记物带正电荷。10.根据权利要求1所述的组合物，其中所述荧光标记物是Alexa染料或DyLightTM染料。11.根据权利要求1所述的组合物，其中所述荧光标记物是选自由以下组成的组的染料：Alexa350、Alexa405、Alexa430、Alexa488、Alexa500、Alexa514、Alexa532、Alexa546、Alexa555、Alexa568、Alexa594、Alexa610-X、Alexa633、Alexa647、Alexa660、Alexa680、Alexa700、Alexa750、Alexa790、AMCA-X、630/650、650/665、FL、TMR、TR、TR-X、Cascade二硝基苯基、荧光素、HEX、JOE、MarinaOregon488、Oregon514、PacificBlueTM、PacificOrangeTM、RhodamineGreenTM、7、9、21、35、ROX、RhodamineRedTM、TET、TAMRA、四甲基罗丹明、FAM、Texas或7-羟基-9H-(1，3-二氯-9，9-二甲基吖啶-2-酮)琥珀酰亚胺酯(DDAO-SE)。12.根据权利要求1所述的组合物，其中所述荧光标记物是选自由以下组成的组的染料：DyLightTM350、DyLightTM405、DyLightTM488、DyLightTM550、DyLightTM594、DyLightTM633、DyLightTM650、DyLightTM680、DyLightTM755和DyLightTM800。13.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子是带负电荷或中性的。14.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子选自乙酸酯和聚乙二醇(PEG)。15.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子包含乙酰基。16.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子包含乙酸酯分子。17.根据权利要求1所述的组合物，其中所述乙酸酯分子是磺基-NHS-乙酸酯。18.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子包含(PEG)n或由(PEG)n组成，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。19.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子包含MS-(PEG)n，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。20.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子包含选自烷酰基、烯酰基和炔酰基(-C(O)CnHm)的基团或由所述基团组成，其中n是1至20个原子，其中m＞n，其中所述碳原子可以通过单键、双键和/或三键相互连接。21.根据权利要求1所述的组合物，其中所述烷基、烯基和/或炔基进一步被-(OCH2CH2O)x-(CH2)y-OR取代，其中x是1至20，y是1至6，R是H或C1-6烷基。22.根据权利要求21所述的组合物，其中所述烷基、烯基和/或炔基进一步被铵(-NH3+)、季铵((-NR3+)基团取代，其中R是C1-6烷基。23.根据权利要求1所述的组合物，其中所述荧光染料包含一个或多个Alexa350、Alexa405、Alexa430、Alexa488、Alexa500、Alexa514、Alexa532、Alexa546、Alexa555、Alexa568、Alexa594、Alexa610-X、Alexa633、Alexa647、Alexa660、Alexa680、Alexa700、Alexa750、Alexa790、AMCA-X、630/650、650/665、FL、TMR、TR、TR-X、Cascade二硝基苯基、荧光素、HEX、JOE、MarinaOregon488、Oregon514、PacificBlueTM、PacificOrangeTM、RhodamineGreenTM、7、9、21、35、ROX、RhodamineRedTM、TET、TAMRA、四甲基罗丹明、FAM、Texas或7-羟基-9H-(1，3-二氯-9，9-二甲基吖啶-2-酮)琥珀酰亚胺酯(DDAO-SE)，和来自由以下组成的组：DyLightTM350、DyLightTM405、DyLightTM488、DyLightTM550、DyLightTM594、DyLightTM633、DyLightTM650、DyLightTM680、DyLightTM755和DyLightTM80；和所述间隔分子包含以下中的一个或多个：磺基-NHS-乙酸酯；(PEG)n，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15；MS-(PEG)n，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15；烷酰基、烯酰基或炔酰基(-C(O)CnHm)，其中n是1至20个原子，其中m＞n，其中所述碳原子可以通过单键、双键和/或三键相互连接；或烷基、烯基或炔基进一步被-(OCH2CH2O)x-(CH2)y-OR取代，其中x是1至20，y是1至6，R是H或C1-6烷基，或其中所述烷基、烯基和/或炔基进一步被铵(-NH3+)、季铵((-NR3+)基团取代，其中R是C1-6烷基。24.根据权利要求23所述的组合物，其中所述烷基、烯基和/或炔基进一步被鏻基团(-PQ3+)取代，其中Q是芳基、取代的芳基或C1-6烷基。25.根据权利要求1所述的组合物，其中荧光标记物与抗体的比率为1至50。26.根据权利要求25所述的组合物，其中荧光标记物与抗体的比率为5至30。27.根据权利要求25所述的组合物，其中荧光标记物与抗体的比率为1至20。28.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子与抗体的比率为1至50。29.根据权利要求28所述的组合物，其中所述间隔分子与抗体的比率为5至30。30.根据权利要求28所述的组合物，其中所述间隔分子与抗体的比率为5至30。31.根据权利要求28所述的组合物，其中所述间隔分子与抗体的比率为1至20。32.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物0.1至25、1至15或2.5至10倍的量摩尔过量的。33.根据权利要求32所述的组合物，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物2.5倍的量摩尔过量的。34.根据权利要求33所述的组合物，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物5倍的量摩尔过量的。35.根据权利要求33所述的组合物，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物7.5倍的量摩尔过量的。36.根据权利要求33所述的组合物，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物10倍的量摩尔过量的。37.根据权利要求33所述的组合物，其中所述抗体上由所述多个荧光标记物占据的结合位点的百分比为1％至99％。38.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子的存在使所述荧光标记物的可检测的萤光增加至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％、至少125％、至少150％、至少200％、至少300％、至少400％或至少500％。39.一种用于增加荧光标记的生物分子的萤光的方法，所述方法包含：(a)将间隔分子与生物分子缀合；和(b)将荧光标记物与所述生物分子缀合；其中步骤(a)和(b)可以同时或以任何顺序进行，和其中所述间隔物和荧光标记物彼此不缀合。40.根据权利要求39所述的方法，其中与不存在所述间隔分子时的猝灭相比，所述间隔分子减少所述荧光标记物的猝灭。41.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子通过反应性基团与所述抗体缀合。42.根据权利要求41所述的方法，其中所述反应性基团是胺基。43.根据权利要求42所述的方法，其中所述胺基在赖氨酸残基上。44.根据权利要求39所述的方法，其中所述荧光标记物带正电荷。45.根据权利要求39所述的方法，其中所述荧光染料选自Alexa和DyLightTM。46.根据权利要求39所述的方法，其中所述荧光标记物选自由以下组成的组：Alexa350、Alexa405、Alexa430、Alexa488、Alexa500、Alexa514、Alexa532、Alexa546、Alexa555、Alexa568、Alexa594、Alexa610-X、Alexa633、Alexa647、Alexa660、Alexa680、Alexa700、Alexa750、Alexa790、AMCA-X、630/650、650/665、FL、TMR、TR、TR-X、Cascade二硝基苯基、荧光素、HEX、JOE、MarinaOregon488、Oregon514、PacificBlueTM、PacificOrangeTM、RhodamineGreenTM、7、9、21、35、ROX、RhodamineRedTM、TET、TAMRA、四甲基罗丹明、FAM、Texas和7-羟基-9H-(1，3-二氯-9，9-二甲基吖啶-2-酮)琥珀酰亚胺酯(DDAO-SE)。47.根据权利要求39所述的方法，其中所述荧光标记物选自由以下组成的组：DyLightTM350、DyLightTM405、DyLightTM488、DyLightTM550、DyLightTM594、DyLightTM633、DyLightTM650、DyLightTM680、DyLightTM755和DyLightTM800。48.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子是带负电荷或中性的。49.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子选自乙酸酯和聚乙二醇(PEG)。50.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子包含乙酰基。51.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子包含乙酸酯分子。52.根据权利要求39所述的方法，其中所述乙酸酯分子是磺基-NHS-乙酸酯。53.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子包含(PEG)n，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。54.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子包含MS-(PEG)n，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。55.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子包含选自烷酰基、烯酰基和炔酰基(-C(O)CnHm的基团，其中n是1至20个原子，其中m＞n，其中所述碳原子可以通过单键、双键和/或三键相互连接。56.根据权利要求55所述的方法，其中所述烷基、烯基和/或炔基进一步被-(OCH2CH2O)x-(CH2)y-OR取代，其中x是1至20，y是1至6，R是H或C1-6烷基。57.根据权利要求55所述的方法，其中所述烷基、烯基和/或炔基进一步被铵(-NH3+)、季铵((-NR3+)基团取代，其中R是C1-6烷基。58.根据权利要求55所述的方法，其中所述烷基、烯基和/或炔基进一步被鏻基团(-PQ3+)取代，其中Q是芳基、取代的芳基或C1-6烷基。59.根据权利要求39所述的方法，其中荧光标记物与抗体的比率为1至50。60.根据权利要求59所述的方法，其中荧光标记物与抗体的比率为5至30。61.根据权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·德塞，M·恩兰德，K·吉，M·贝克，R·阿吉勒，S·斯维尼，A·卢卡维什尼科夫，SJ·黄，
申请(专利权)人：生命科技股份有限公司，皮尔斯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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