经操纵的免疫调节因子以及由此改变的免疫力制造技术

本发明专利技术涉及具有改善的免疫效果的经人工操纵的免疫系统。更具体而言，本发明专利技术涉及功能被人工改变的免疫系统，所述免疫系统包含经人工操纵的免疫调节因子以及包含该经人工操纵的免疫调节因子的细胞。根据具体实施方式考虑在内的是包含经人工操纵的免疫调节基因(例如PD‑1、CTLA‑4、A20、DGKα、DGKζ、FAS、EGR2、PPP2R2D、PSGL‑1、KDM6A以及TET2)和/或其表达产物的免疫系统。

Manipulated immunoregulatory factors and the resulting changes in immunity

The present invention relates to an artificial manipulated immune system with improved immune effect. More specifically, the present invention relates to an immune system whose function is artificially altered. The immune system comprises an artificially manipulated immune regulatory factor and a cell containing the artificially manipulated immune regulatory factor. According to the specific implementation, the immune system including the artificially manipulated immune regulatory genes (such as PD_1, CTLA_4, A20, DGKa, DGK_, FAS, EGR2, PPP2R2D, PSGL_1, KDM6A and TET2) and/or their expression products is considered.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经操纵的免疫调节因子以及由此改变的免疫力
本专利技术涉及具有改善的免疫效力的经人工操纵的免疫系统。更具体而言，本专利技术涉及人工修饰免疫系统，所述人工修饰免疫系统包含经人工操纵的免疫调节因子以及包含该经人工操纵的免疫调节因子的免疫细胞。
技术介绍
细胞治疗剂是使用活细胞诱导再生以修复受损或患病的细胞/组织/实体的药物，其为通过物理、化学或生物操纵(例如对自体细胞、同种异体细胞或异种细胞进行离体培养、增殖、选择等)产生的药物。其中，免疫调节细胞治疗剂是通过使用免疫细胞(例如树突细胞、自然杀伤细胞、T细胞等)调节体内的免疫应答来实现疾病治疗目的的药物。目前，正在开发的免疫调节细胞治疗剂主要靶向癌症治疗作为适应证。与传统用于癌症治疗的手术疗法、抗癌剂和放射疗法不同的是，免疫调节细胞治疗剂具有的治疗机制和效力在于通过将免疫细胞直接给予患者来活化免疫功能，从而获得疗效；免疫调节细胞治疗剂有望在未来的新兴生物学中扮演重要角色。导入细胞的抗原的物理和化学特性根据免疫调节细胞治疗剂的类型而彼此不同。当以病毒载体等形式将外源基因导入免疫细胞时，这些细胞将能够同时具有细胞治疗剂和基因治疗剂的特征。可采用如下方式来实施免疫调节细胞治疗剂的给予：通过利用多种抗体和细胞因子活化多种免疫细胞(例如通过单采(apheresis)从患者分离的外周血单核细胞(PBMC)、T细胞、NK细胞等)，随后离体增殖并再次注射至患者中；或者将其中导入有基因(例如T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR))的免疫细胞再次注射至患者中。过继性免疫疗法涉及离体产生的自体抗原特异性免疫细胞(例如T细胞)的递送，其可能成为治疗多种免疫疾病以及癌症的有希望的策略。最近报道了免疫细胞治疗剂可以以多种方式使用，例如作为自体免疫抑制剂等以及表现出抗癌功能。因此，免疫细胞治疗剂可以通过调控免疫应答而用于多种适应证中。因此，在对用于过继性免疫疗法的经操纵的免疫细胞的治疗效力进行开发和改善方面具有巨大需求。
技术实现思路
技术问题作为示例性实施方式，本专利技术提供了具有改善的免疫效果的经人工操纵的免疫系统。作为示例性实施方式，本专利技术提供了经人工操纵的免疫调节因子以及包含该经人工操纵的免疫调节因子的细胞。作为示例性实施方式，本专利技术提供了用于对免疫细胞的功能进行修饰(例如增强或抑制)的方法。作为示例性实施方式，本专利技术提供了对伴有免疫异常的疾病的治疗和/或预防用途，所述用途包含免疫功能经修饰的免疫调节因子和/或免疫细胞作为有效成分。作为示例性实施方式，本专利技术通过增强免疫细胞的增殖、存活、细胞毒性、浸润和细胞因子释放来提供抗癌功能。作为示例性实施方式，本专利技术提供了免疫调节基因(例如PD-1、CTLA-4、A20、DGKα、DGKζ、FAS、EGR2、PPP2R2D、PSGL-1、KDM6A、TET2等)和/或所述基因的表达产物。作为示例性实施方式，本专利技术提供了用于对免疫细胞进行基因组编辑的组合物以及使用所述组合物的方法，所述组合物包含可适用于对免疫调节基因的活性进行调节的引导核酸-编辑蛋白复合体。作为示例性实施方式，本专利技术提供了能够用于对免疫调节基因(例如PD-1、CTLA-4、A20、DGKα、DGKζ、FAS、EGR2、PPP2R2D、PSGL-1、KDM6A、TET2等)进行操纵的引导核酸-编辑蛋白复合体。技术方案为了解决这些问题，本专利技术提供了具有改善的免疫效果的经人工操纵的免疫系统。更具体而言，本专利技术涉及经人工操纵的免疫系统，所述经人工操纵的免疫系统包含经人工操纵的免疫调节因子和包含所述经人工操纵的免疫调节因子的免疫细胞。本专利技术提供了用于特定目的的经基因操纵或修饰的免疫调节因子。术语“免疫调节因子”是其功能与免疫应答的形成和性能相关的物质，包括所有具有免疫应答调节功能的各种物质，可以为非天然(即经人工操纵的)的物质。例如，免疫调节因子可为在免疫细胞中表达的经基因操纵或修饰的基因或蛋白。免疫调节因子可在使免疫细胞活化或失活方面发挥功能。免疫调节因子可发挥功能来促进免疫应答(例如免疫细胞生长调节因子、免疫细胞死亡调节因子、免疫细胞功能丧失因子或细胞因子分泌元件等)。在本专利技术的示例性实施方式中，免疫调节因子可为例如经基因操纵或修饰的PD-1基因、CTLA-4基因、TNFAIP3(A20)基因、DGKA基因、DGKZ基因、FAS基因、EGR2基因、PPP2R2D基因、TET2基因、PSGL-1基因或KDM6A基因。在本专利技术的示例性实施方式中，免疫调节因子可包含两种以上经基因操纵或修饰的基因。例如，可对选自于由如下基因所组成的组中的两种以上基因进行人工操纵或修饰：PD-1基因、CTLA-4基因、TNFAIP3(A20)基因、DGKA基因、DGKZ基因、FAS基因、EGR2基因、PPP2R2D基因、TET2基因、PSGL-1基因或KDM6A基因。作为本专利技术的优选实例，免疫调节因子可为TNFAIP3(A20)基因、DGKA基因、DGKZ基因、FAS基因、EGR2基因、PSGL-1基因或KDM6A基因。因此，在本专利技术的示例性实施方式中，提供了一种或多种在核酸序列中进行了修饰的经人工操纵的免疫调节因子，所述免疫调节因子选自于由如下免疫调节因子所组成的组：PD-1基因、CTLA-4基因、TNFAIP3(A20)基因、DGKA基因、DGKZ基因、FAS基因、EGR2基因、PPP2R2D基因、TET2基因、PSGL-1基因以及KDM6A基因。核酸序列中的修饰可不受限制地为通过引导核酸-编辑蛋白复合体进行的人工操纵。术语“引导核酸-编辑蛋白复合体”是指经由引导核酸和编辑蛋白间的相互作用形成的复合体，该核酸-蛋白复合体包含引导核酸和编辑蛋白。引导核酸-编辑蛋白复合体可用于修饰对象物。所述对象物可为靶核酸、基因、染色体或蛋白。例如，所述基因可为通过引导核酸-编辑蛋白复合体进行人工操纵的免疫调节基因。其中，经人工操纵的所述免疫调节基因在组成所述免疫调节基因的核酸序列中的原型间隔区邻近基序(PAM)序列中或在临近所述PAM序列的5'端和/或3'端的连续的1bp-50bp碱基序列区内包含选自于由如下修饰所组成的组中的至少一种修饰：一个或多个核苷酸的删除或插入；利用不同于野生型基因的一个或多个核苷酸进行的置换；以及一个或多个外源核苷酸的插入；在组成所述免疫调节基因的核酸序列中的至少一个核苷酸的化学修饰。核酸修饰可发生于基因的启动子区。核酸修饰可发生于基因的外显子区。在一个示例性实施方式中，50％的修饰可发生于基因编码区的上游部分。核酸修饰可发生于基因的内含子区。核酸修饰可发生于基因的增强子区。PAM序列可为例如如下序列中的一种或多种(以5'至3'方向来描述)：NGG(N为A、T、C或G)；NNNNRYAC(N各自独立地为A、T、C或G；R为A或G；Y为C或T)；NNAGAAW(N各自独立地为A、T、C或G；W为A或T)；NNNNGATT(N各自独立地为A、T、C或G)；NNGRR(T)(N各自独立地为A、T、C或G；R为A或G；Y为C或T)；以及TTN(N为A、T、C或G)。此外，在另一实施方式中，本专利技术提供了引导核酸，所述引导核酸能够与选自于由如下基因所组成的组中的至少一种基因的核酸序列中的靶序列SEQI本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.经人工操纵的免疫调节基因，所述经人工操纵的免疫调节基因选自于由在核酸序列中具有修饰的如下基因所组成的组：PD‑1、CTLA‑4、A20、Dgkα、Dgkζ、Fas、EGR2、PPP2R2D、PSGL‑1、KDM6A以及Tet2。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.08.12 KR 10-2016-0103308;2017.05.08 US 62/5021.经人工操纵的免疫调节基因，所述经人工操纵的免疫调节基因选自于由在核酸序列中具有修饰的如下基因所组成的组：PD-1、CTLA-4、A20、Dgkα、Dgkζ、Fas、EGR2、PPP2R2D、PSGL-1、KDM6A以及Tet2。2.如权利要求1所述的经人工操纵的免疫调节基因，其中，通过引导核酸-编辑蛋白复合体人工产生所述核酸序列中的修饰。3.如权利要求1所述的经人工操纵的免疫调节基因，其中，所述免疫调节基因是A20、Dgkα、Dgkζ、EGR2、PSGL-1或KDM6A。4.如权利要求1所述的经人工操纵的免疫调节基因，其中，所述基因是通过引导核酸-编辑蛋白复合体进行人工操纵的免疫调节基因，所述经人工操纵的免疫调节基因在组成所述免疫调节基因的核酸序列中的原型间隔区邻近基序(PAM)序列中或在临近所述PAM序列的5'端和/或3'端的连续的1bp-50bp核苷酸序列区内包含选自于由如下修饰所组成的组中的至少一种修饰：一个或多个核苷酸的删除或插入；利用不同于野生型基因的一个或多个核苷酸进行的置换；以及至少一个外源核苷酸的插入；在组成所述免疫调节基因的核酸序列中的至少一个核苷酸的化学修饰。5.如权利要求1所述的经人工操纵的免疫调节基因，其中，所述核酸的修饰发生于所述基因的启动子区。6.如权利要求1所述的经人工操纵的免疫调节基因，其中，所述核酸的修饰发生于所述基因的外显子区。7.如权利要求1所述的经人工操纵的免疫调节基因，其中，所述核酸的修饰发生于所述基因的内含子区。8.如权利要求1所述的经人工操纵的免疫调节基因，其中，所述核酸的修饰发生于所述基因的增强子区。9.如权利要求4所述的经人工操纵的免疫调节基因，其中，所述PAM序列包括如下序列中的一种或多种，所述序列以5'至3'方向来描述：NGG，其中N为A、T、C或G；NNNNRYAC，其中N各自独立地为A、T、C或G；R为A或G；Y为C或T；NNAGAAW，其中N各自独立地为A、T、C或G；W为A或T；NNNNGATT，其中N各自独立地为A、T、C或G；NNGRR(T)，其中N各自独立地为A、T、C或G；R为A或G；Y为C或T；以及TTN，其中N为A、T、C或G。10.引导核酸，所述引导核酸能够与选自于由如下基因所组成的组中的至少一种基因的核酸序列中的靶序列SEQIDNO：1-SEQIDNO：289分别形成互补结合：PD-1、CTLA-4、A20、Dgkα、Dgkζ、Fas、EGR2、PPP2R2D、PSGL-1、KDM6A以及Tet2。11.如权利要求10所述的引导核酸，所述引导核酸包括选自于由如下引导核酸所组成的组中的至少一种引导核酸：能够与A20基因核酸序列中的靶序列SEQIDNO：6和SEQIDNO：11分别形成互补结合的引导核酸；能够与Dgkα基因核酸序列中的靶序列SEQIDNO：19、SEQIDNO：20、SEQIDNO：21和SEQIDNO：23分别形成互补结合的引导核酸；能够与EGR2基因核酸序列中的靶序列SEQIDNO：25形成互补结合的引导核酸；能够与PPP2R2D基因核酸序列中的靶序列SEQIDNO：64形成互补结合的引导核酸；能够与PD-1基因核酸序列中的靶序列SEQIDNO：87和SEQIDNO：89分别形成互补结合的引导核酸；能够与Dgkζ基因核酸序列中的靶序列SEQIDNO：109、SEQIDNO：110、SEQIDNO：111、SEQIDNO：112和SEQIDNO：113分别形成互补结合的引导核酸；能够与Tet-2基因核酸序列中的靶序列SEQIDNO：126、SEQIDNO：128和SEQIDNO：129分别形成互补结合的引导核酸；能够与PSGL-1基因核酸序列中的靶序列SEQIDNO：182形成互补结合的引导核酸；能够与FAS基因核酸序列中的靶序列SEQIDNO：252、SEQIDNO：254、SEQIDNO：257和SEQIDNO：264分别形成互补结合的引导核酸；以及能够与KDM6A基因核酸序列中的靶序列SEQIDNO：285形成互补结合的引导核酸。12.如权利要求10所述的引导核酸，其中，所述引导核酸是18bp-23bp的核苷酸。13.经人工操纵的免疫细胞，所述经人工操纵的免疫细胞包含：至少一种经人工操纵的免疫调节基因，所述经人工操纵的免疫调节基因选自于由在核酸序列中具有修饰的如下基因所组成的组：PD-1、CTLA-4、A20、Dgkα、Dgkζ、Fas、EGR2、PPP2R2D、PSGL-1、KDM6A以及Tet2；以及所述基因表达的至少一种产物。14.如权利要求13所述的经人工操纵的免疫细胞，其中，所述免疫细胞为选自于由如下细胞所组成的组中的至少一种细胞：T细胞、CAR-T细胞、NK细胞和NKT细胞。15.如权利要求13所述的经人工操纵的免疫细胞，其中，所述免疫调节基因的活性被抑制或失活。16.如权利要求13所述的经人工操纵的免疫细胞，其中，所述免疫细胞进一步包含嵌合抗原受体(CAR)。17.如权利要求14所述的经人工操纵的免疫细胞，其中，所述T细胞进一步包含嵌合抗原受体(CAR)或经操纵的TCR(T细胞受体)。18.如权利要求13所述的经人工操纵的免疫细胞，其中，所述免疫细胞进一步包含引导核酸-编辑蛋白复合体或者编码所述引导核酸-编辑蛋白复合体的核酸序列。19.如权利要求18所述的经人工操纵的免疫细胞，其中，所述编辑蛋白是选自于由如下编辑蛋白所组成的组中...

【专利技术属性】
技术研发人员：金奭中，金润荣，柳浩成，郑仁英，李贞慜，
申请(专利权)人：株式会社图尔金，
类型：发明
国别省市：韩国,KR