当前位置: 首页 > 专利查询>牛晓敏专利>正文

一种恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法及其在医药研究中的应用技术

技术编号:21240485 阅读:37 留言:0更新日期:2019-06-01 03:25
本发明专利技术提供了一种恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法及其在医药研究中的应用,属于生物医学技术领域。本发明专利技术提供的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法,通过使用浓度逐步升高含有恩曲替尼药液的培养基对肺癌细胞进行冲击培养,逐步提高细胞的耐药能力,获得恩曲替尼的耐药肺癌细胞;并将耐药细胞应用到药物研究中,具有较好的研究利用价值。

Establishment of an Entretinib-resistant lung cancer cell line and its application in medical research

The invention provides a method for establishing an Entretinib-resistant lung cancer cell line and its application in medical research, belonging to the field of biomedical technology. The method for establishing an Entretinib-resistant lung cancer cell line provided by the invention can gradually improve the drug resistance of lung cancer cells and obtain Entretinib-resistant lung cancer cells by using a culture medium containing Entretinib solution with gradually increasing concentration, and has good research and utilization value when the drug-resistant cells are applied to drug research.

【技术实现步骤摘要】
一种恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法及其在医药研究中的应用
本专利技术涉及生物医学
,具体而言,涉及一种恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法及其在医药研究中的应用。
技术介绍
恩曲替尼(Entrectinib,Ent)是一种泛NTRK(NTRK1,NTRK2和NTRK3),ROS1和ALK抑制剂,是目前临床证实具有高效中枢神经活性的口服酪氨酸激酶抑制剂。恩曲替尼可以通过血脑屏障,对肺癌、头颈部肿瘤、淋巴瘤、黑色素瘤、神经内分泌肿瘤等多种肿瘤起作用,目前主要用于肺癌的治疗。临床数据表明ROS1重排的肿瘤患者中,恩曲替尼治疗的总缓解率达86%(12/14例),其中2例患者出现了完全缓解。另一项关于13例ROS1重排非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)患者的研究结果显示,有11例患者接受恩曲替尼治疗后获得缓解(85%),其中1例携带ROS1基因融合患者的疗效持续时间达27个月。在携带NRTK重排基因的多种肿瘤患者中,恩曲替尼治疗缓解率为100%(5/5例),分别包括IMNA-NTRK1重排的结直肠癌患者、BCAN-NTRK1重排的星形细胞瘤患者、ETV6-NTRK3重排的婴儿型纤维肉瘤患者、SQSTM1-NTRK1重排的NSCLC患者。恩曲替尼治疗ALK融合患者的缓解率与克唑替尼的治疗结果相仿,为57%,但恩曲替尼可以更好地透过血脑屏障。考虑到肺癌存在着高度异质性,且肿瘤细胞耐药无法避免,这就有可能导致恩曲替尼治疗失败。目前有关恩曲替尼耐药肺癌细胞系的构建研究尚不全面。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法,该建立方法通过循序渐进地逐渐提高恩曲替尼浓度的冲击实验,获得耐药能力提高的肺癌细胞系。本专利技术的第二目的在于提供上述的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法,及获得的恩曲替尼耐药肺癌细胞在医药研究中的应用。为了实现本专利技术的上述目的,采用以下技术方案:一种恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法,包括以下步骤:以含胎牛血清的RPMI-1640培养基培养肺癌细胞,肺癌细胞的密度达到50%-65%,用恩曲替尼药液浓度为0.45-0.6μmol/L的培养基初诱导培养至密度达到75%-85%,传代并用恩曲替尼药液浓度为0.45-0.6μmol/L的培养基进行再诱导培养至肺癌细胞正常生长,得到第一诱导细胞;传代第一诱导细胞后用恩曲替尼药液浓度为1.8-2.4μmol/L的培养基进行第一冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第一冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为3.6-4.5μmol/L的培养基对第一冲击细胞进行第二冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第二冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为9.5-11.8μmol/L的培养基对第二冲击细胞进行第三冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第三冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为14.2-15.5μmol/L的培养基对第三冲击细胞进行第四冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第四冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为28.8-30.6μmol/L的培养基对第四冲击细胞进行终冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到恩曲替尼耐药的肺癌细胞。上述的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法获得的恩曲替尼耐药肺癌细胞在医药研究中的应用。与现有技术相比,本专利技术的有益效果包括:本专利技术提供的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法,通过使用浓度逐步升高含有恩曲替尼药液的培养基对肺癌细胞进行冲击培养,逐步提高细胞的耐药能力,获得恩曲替尼的耐药肺癌细胞;并可以将耐药细胞应用到药物研究中,具有较好的研究应用价值。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案,下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。应当理解,以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例,因此不应被看作是对范围的限定。对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实施例提供细胞形态显微观察对比图;图2为本专利技术实验例提供的细胞增殖率结果图;图3为本专利技术实验例提供的耐药性实验结果图;图4为本专利技术实验例提供的细胞迁移能力显微观察对比图;图5为本专利技术实验例提供的细胞迁移能力结果图;图6为本专利技术实验例提供的细胞克隆能力显微观察对比图;图7为本专利技术实验例提供的细胞克隆能力结果图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述,但是本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本专利技术,而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合本专利技术实施例中的附图,对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然,所描述的实施例是本专利技术一部分实施例,而不是全部的实施例。因此,以下对在附图中提供的本专利技术实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本专利技术的范围,而是仅仅表示本专利技术的选定实施例。基于本专利技术中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本专利技术保护的范围。下面对本专利技术实施例的一种恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法及其在医药研究中的应用进行具体说明。一种恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法,包括以下步骤:以含胎牛血清的RPMI-1640培养基培养肺癌细胞,肺癌细胞的密度达到50%-65%,用恩曲替尼药液浓度为0.45-0.6μmol/L的培养基初诱导培养至密度达到75%-85%,传代并用恩曲替尼药液浓度为0.45-0.6μmol/L的培养基进行再诱导培养至肺癌细胞正常生长,得到第一诱导细胞;传代第一诱导细胞后用恩曲替尼药液浓度为1.8-2.4μmol/L的培养基进行第一冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第一冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为3.6-4.5μmol/L的培养基对第一冲击细胞进行第二冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第二冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为9.5-11.8μmol/L的培养基对第二冲击细胞进行第三冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第三冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为14.2-15.5μmol/L的培养基对第三冲击细胞进行第四冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第四冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为28.8-30.6μmol/L的培养基对第四冲击细胞进行终冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到恩曲替尼耐药的肺癌细胞。根据本专利技术实施例的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法,通过选择肺癌细胞进行恢复培养,然后利用逐渐提高的恩曲替尼药液浓度的培养基进行冲击培养,提高细胞的耐受能力,以获得恩曲替尼耐药的肺癌细胞系。在本专利技术的一些实施例中,肺癌细胞为H3122。恩曲替尼(Entrectinib,Ent)是一种泛NTRK(NTRK1,NTRK2和NTRK3),ROS1和ALK抑制剂,是目前临床证实具有高效中枢神经活性的口服酪氨酸激酶抑制剂。恩曲替尼可以通过血脑屏障,对肺癌、头颈部肿瘤、淋巴瘤、黑色素瘤、神经内分泌肿瘤等多种肿瘤起作用,目前主要用于肺癌的治疗。H3122细胞是一类EML4-ALK融合阳性的肺癌细胞系,利用H3122肺癌细胞获得恩曲替尼的耐药细胞株更具有针对性。在本专利技术的一些实施例中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法,其特征在于,包括以下步骤:以含胎牛血清的RPMI‑1640培养基培养肺癌细胞,所述肺癌细胞的密度达到50%‑65%,用恩曲替尼药液浓度为0.45‑0.6μmol/L的培养基初诱导培养至密度达到75%‑85%,传代并用恩曲替尼药液浓度为0.45‑0.6μmol/L的培养基进行再诱导培养至所述肺癌细胞正常生长,得到第一诱导细胞;传代所述第一诱导细胞后用恩曲替尼药液浓度为1.8‑2.4μmol/L的培养基进行第一冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第一冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为3.6‑4.5μmol/L的培养基对所述第一冲击细胞进行第二冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第二冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为9.5‑11.8μmol/L的培养基对所述第二冲击细胞进行第三冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第三冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为14.2‑15.5μmol/L的培养基对所述第三冲击细胞进行第四冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第四冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为28.8‑30.6μmol/L的培养基对所述第四冲击细胞进行终冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到恩曲替尼耐药的肺癌细胞。...

【技术特征摘要】
1.一种恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法,其特征在于,包括以下步骤:以含胎牛血清的RPMI-1640培养基培养肺癌细胞,所述肺癌细胞的密度达到50%-65%,用恩曲替尼药液浓度为0.45-0.6μmol/L的培养基初诱导培养至密度达到75%-85%,传代并用恩曲替尼药液浓度为0.45-0.6μmol/L的培养基进行再诱导培养至所述肺癌细胞正常生长,得到第一诱导细胞;传代所述第一诱导细胞后用恩曲替尼药液浓度为1.8-2.4μmol/L的培养基进行第一冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第一冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为3.6-4.5μmol/L的培养基对所述第一冲击细胞进行第二冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第二冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为9.5-11.8μmol/L的培养基对所述第二冲击细胞进行第三冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第三冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为14.2-15.5μmol/L的培养基对所述第三冲击细胞进行第四冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第四冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为28.8-30.6μmol/L的培养基对所述第四冲击细胞进行终冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到恩曲替尼耐药的肺癌细胞。2.根据权利要求1所述的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法,其特征在于,所述肺癌细胞为H3122。3.根据权利要求2所述的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法,其特征在于,所述肺癌细胞处于对数生长期。4.根据权利要求1所述的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法,其特征在于,所述第一冲击诱导后还包括以所述恩曲替尼药液浓度为0.45-0.6μmol/L的培养基进行第一恢复培养至稳定生长并传代,再以恩曲替尼药液浓度为1.8-2.4μmol/L的培养基进行冲击诱导;所述第二冲击诱导后包括以恩曲替尼药液浓度为1.8-2.4μmol...

【专利技术属性】
技术研发人员:牛晓敏陆舜陈智伟
申请(专利权)人:牛晓敏
类型:发明
国别省市:上海,31

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1