The invention provides a method for establishing an Entretinib-resistant lung cancer cell line and its application in medical research, belonging to the field of biomedical technology. The method for establishing an Entretinib-resistant lung cancer cell line provided by the invention can gradually improve the drug resistance of lung cancer cells and obtain Entretinib-resistant lung cancer cells by using a culture medium containing Entretinib solution with gradually increasing concentration, and has good research and utilization value when the drug-resistant cells are applied to drug research.
【技术实现步骤摘要】
一种恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法及其在医药研究中的应用
本专利技术涉及生物医学
,具体而言,涉及一种恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法及其在医药研究中的应用。
技术介绍
恩曲替尼(Entrectinib,Ent)是一种泛NTRK(NTRK1,NTRK2和NTRK3),ROS1和ALK抑制剂,是目前临床证实具有高效中枢神经活性的口服酪氨酸激酶抑制剂。恩曲替尼可以通过血脑屏障,对肺癌、头颈部肿瘤、淋巴瘤、黑色素瘤、神经内分泌肿瘤等多种肿瘤起作用,目前主要用于肺癌的治疗。临床数据表明ROS1重排的肿瘤患者中,恩曲替尼治疗的总缓解率达86%(12/14例),其中2例患者出现了完全缓解。另一项关于13例ROS1重排非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)患者的研究结果显示,有11例患者接受恩曲替尼治疗后获得缓解(85%),其中1例携带ROS1基因融合患者的疗效持续时间达27个月。在携带NRTK重排基因的多种肿瘤患者中,恩曲替尼治疗缓解率为100%(5/5例),分别包括IMNA-NTRK1重排的结直肠癌患者、BCAN-NTRK1重排的星形细胞瘤患者、ETV6-NTRK3重排的婴儿型纤维肉瘤患者、SQSTM1-NTRK1重排的NSCLC患者。恩曲替尼治疗ALK融合患者的缓解率与克唑替尼的治疗结果相仿,为57%,但恩曲替尼可以更好地透过血脑屏障。考虑到肺癌存在着高度异质性,且肿瘤细胞耐药无法避免,这就有可能导致恩曲替尼治疗失败。目前有关恩曲替尼耐药肺癌细胞系的构建研究尚不全面。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种恩曲替尼耐药 ...
【技术保护点】
1.一种恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法,其特征在于,包括以下步骤:以含胎牛血清的RPMI‑1640培养基培养肺癌细胞,所述肺癌细胞的密度达到50%‑65%,用恩曲替尼药液浓度为0.45‑0.6μmol/L的培养基初诱导培养至密度达到75%‑85%,传代并用恩曲替尼药液浓度为0.45‑0.6μmol/L的培养基进行再诱导培养至所述肺癌细胞正常生长,得到第一诱导细胞;传代所述第一诱导细胞后用恩曲替尼药液浓度为1.8‑2.4μmol/L的培养基进行第一冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第一冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为3.6‑4.5μmol/L的培养基对所述第一冲击细胞进行第二冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第二冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为9.5‑11.8μmol/L的培养基对所述第二冲击细胞进行第三冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第三冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为14.2‑15.5μmol/L的培养基对所述第三冲击细胞进行第四冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第四冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为28.8‑30.6μmol/L的培养基对所述第四冲击细胞进行终冲击诱导至细胞稳定生长并传代 ...
【技术特征摘要】
1.一种恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法,其特征在于,包括以下步骤:以含胎牛血清的RPMI-1640培养基培养肺癌细胞,所述肺癌细胞的密度达到50%-65%,用恩曲替尼药液浓度为0.45-0.6μmol/L的培养基初诱导培养至密度达到75%-85%,传代并用恩曲替尼药液浓度为0.45-0.6μmol/L的培养基进行再诱导培养至所述肺癌细胞正常生长,得到第一诱导细胞;传代所述第一诱导细胞后用恩曲替尼药液浓度为1.8-2.4μmol/L的培养基进行第一冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第一冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为3.6-4.5μmol/L的培养基对所述第一冲击细胞进行第二冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第二冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为9.5-11.8μmol/L的培养基对所述第二冲击细胞进行第三冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第三冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为14.2-15.5μmol/L的培养基对所述第三冲击细胞进行第四冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到第四冲击细胞;用恩曲替尼药液浓度为28.8-30.6μmol/L的培养基对所述第四冲击细胞进行终冲击诱导至细胞稳定生长并传代,得到恩曲替尼耐药的肺癌细胞。2.根据权利要求1所述的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法,其特征在于,所述肺癌细胞为H3122。3.根据权利要求2所述的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法,其特征在于,所述肺癌细胞处于对数生长期。4.根据权利要求1所述的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法,其特征在于,所述第一冲击诱导后还包括以所述恩曲替尼药液浓度为0.45-0.6μmol/L的培养基进行第一恢复培养至稳定生长并传代,再以恩曲替尼药液浓度为1.8-2.4μmol/L的培养基进行冲击诱导;所述第二冲击诱导后包括以恩曲替尼药液浓度为1.8-2.4μmol...
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