本发明专利技术提供了一种减轻内质网应激的4‑苯基丁酸溶液及其制备方法，属于溶剂配制技术领域。所述方法包括如下步骤：1)将4‑苯基丁酸与无血清DME/F‑12培养基混合，将得到的共混物在48～52℃的水浴中涡旋8～12min，得到预处理液；2)将所述步骤1)的预处理液静置22～26h，得到减轻内质网应激的4‑苯基丁酸溶液。本发明专利技术通过将含有4‑苯基丁酸的DME/F‑12培养基置于空气中，使溶液碱性化，平衡酸性物质对细胞的损害，从而使制备得到的减轻内质网应激的4‑苯基丁酸溶液能够减小对细胞的毒性。
A 4-phenylbutyric acid solution for alleviating endoplasmic reticulum stress and its preparation method
The invention provides a 4 phenylbutyric acid solution for alleviating endoplasmic reticulum stress and a preparation method thereof, belonging to the technical field of solvent preparation. The method comprises the following steps: 1) mixing 4 phenylbutyric acid with serum-free DME/F_12 medium, whirling the obtained blend in a water bath at 48-52 C for 8-12 minutes to obtain a pretreatment solution; 2) stating the pretreatment solution of step 1 for 22-26 hours to obtain a 4 phenylbutyric acid solution to alleviate endoplasmic reticulum stress. By placing DME/F_12 medium containing 4 phenylbutyric acid in air, the solution is alkalinized to balance the damage of acidic substances to cells, so that the prepared 4 phenylbutyric acid solution which alleviates endoplasmic reticulum stress can reduce the toxicity to cells.
【技术实现步骤摘要】
一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液及其制备方法
本专利技术属于溶剂配制
，具体涉及一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液及其制备方法。
技术介绍
内质网是细胞中一种重要的膜性网状细胞器，主要参与蛋白质、脂类和糖类的合成和代谢、调控钙离子的储存和释放。在人体各组织和器官细胞中，肝细胞中内质网最为丰富。当机体出现生理或者病理因素(营养缺乏、酸中毒、病毒感染等)时均可导致内质网稳态被破坏。而内质网稳态一旦遭到破坏，内质网内的钙离子水平骤变、错误折叠蛋白和未折叠蛋白累积均可诱导内质网应激(endoplasmicreticulumstress，ERS)，继而出现未折叠蛋白反应和应激反应。未折叠蛋白反应是介导ERS的重要环节，持续强烈的ERS会激活细胞的凋亡信号通路。很多疾病均与内质网应激有关，如心血管疾病、呼吸系统疾病、病毒性肝炎、自身免疫性疾病等。探讨内质网应激与其相关疾病分子机制已成为近年来的新挑战。目前诱导内质网应激的诱导剂包括毒胡萝卜素、衣霉素、油酸、硬脂酸、棕榈酸等。4-苯基丁酸(PBA)可以作为一种分子伴侣，逆转蛋白质分子的错误移位或错误聚集，帮助其建立正常的空间结构，从而减轻内质网的负担、抑制内质网应激信号感应，减轻内质网应激导致的组织损伤。内质网诱导剂和PBA的使用，可以更加充分探讨内质网应激的分子机制，但现有技术中配制PBA溶液的方法为采用水浴使4-苯基丁酸得到PBA溶液，但这种溶液呈酸性，对细胞有明显的细胞毒性作用，采用碳酸氢钠或氢氧化钠将PH值调至细胞培养最适PH值后，仍对细胞有明显的损伤作用。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液及其制备方法，本专利技术提供的制备方法使配制得到的4-苯基丁酸溶液能够有效减轻对细胞的毒害作用。为了解决上述问题，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供了一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液的制备方法，包括如下步骤：1)将4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基混合，将得到的共混物在48～52℃的水浴中涡旋8～12min，得到预处理液；2)将所述步骤1)的预处理液静置22～26h，得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。优选的，所述步骤1)中4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基的质量体积比为32.8mg:20mL。优选的，所述步骤1)中涡旋的时间为10min。优选的，所述步骤2)中静置时在超净台紫外线照射条件下进行。优选的，所述步骤2)中进行静置后还包括过滤除菌。优选的，所述过滤除菌的方法为膜过滤除菌，所述膜的孔径为0.22μm。优选的，所述步骤2)中静置的时间为24h。本专利技术提供了一种上述方案所述方法制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。优选的，当所述减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液进行稀释时，采用质量浓度为15％～20％的胎牛血清培养基进行稀释。与现有技术相比，本专利技术提供的技术方案具有以下优点：本专利技术提供了一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液的制备方法，包括如下步骤：1)将4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基混合，将得到的共混物在48～52℃的水浴中涡旋8～12min，得到预处理液；2)将所述步骤1)的预处理液静置22～26h，得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。本专利技术中将含有4-苯基丁酸的DME/F-12培养基置于空气中，使溶液碱性化，平衡酸性物质对细胞的损害，从而使制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液能够减小对细胞的毒性。同时，本专利技术制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液稳定性、重复性好，且操作简单。附图说明图1为预干预HepG2细胞后WesternBlot检测GRP78、CHOP结果图，其中从左到右四条条带依次为给予含10％胎牛血清的DME/F-12培养基、1μg/mL的衣霉素、2mmol/L的4-苯基丁酸溶液、2mmol/L的4-苯基丁酸溶液+衣霉素中预干预后的检测结果条带。具体实施方式本专利技术提供了一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液的制备方法，包括如下步骤：1)将4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基混合，将得到的共混物在48～52℃的水浴中涡旋8～12min，得到预处理液；2)将所述步骤1)的预处理液静置22～26h，得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。本专利技术将4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基混合，将得到的共混物在48～52℃的水浴中涡旋8～12min，得到预处理液。在本专利技术中，所述4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基的质量体积比优选为32.8mg:20mL。无血清DME/F-12培养基为HepG2培养的基础培养基，在本专利技术中，所述无血清DME/F-12培养基一方面可以培养细胞，另一方面作为溶剂溶解4-苯基丁酸。本专利技术对所述无血清DME/F-12培养基和4-苯基丁酸的来源没有特殊限定，采用本领域常规产品即可。本专利技术实施例中所述DME/F-12培养基在HyClone公司购买；所述4-苯基丁酸购买自sigma公司。在本专利技术中，所述水浴的温度为48～52℃，优选为50℃。在本专利技术中，所述涡旋的时间为8～12min，优选为10min。在本专利技术中，将得到的共混物在48～52℃的水浴中涡旋8～12min可以使4-苯基丁酸充分溶解。在溶解前共混物为红色，因DME/F-12培养基内含有酚红，故4-苯基丁酸溶解后，变为橙色的预处理液。得到预处理液后，本专利技术将所述预处理液静置22～26h，得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。在本专利技术中，所述静置的时间优选为24h。DME/F-12培养基置于空气中可以转化为碱性，在本专利技术中，将含有4-苯基丁酸的DME/F-12培养基置于空气中，使PBA溶液碱性化，以平衡酸性物质对细胞的损害，从而使制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液能够减小对细胞的毒性。在本专利技术中，所述静置优选在超净台紫外线照射条件下进行。在本专利技术中，在超净台紫外线下照射条件下进行静置可以进行杀菌，防止污染。在静置过程中，预处理液碱性化，橙色的预处理液变为红色的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。本专利技术在静置后，优选还包括过滤除菌。在本专利技术中，所述过滤除菌的方法优选为膜过滤除菌；所述膜的孔径优选为0.22μm。本专利技术提供了一种上述方案所述方法制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。在本专利技术中，当所述减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液进行稀释时，优选采用质量浓度为15％～20％的胎牛血清培养基进行稀释，更优选为16.67％的胎牛血清培养基。本专利技术提供了一种上述方案所述方法制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。在本专利技术中，所述减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液能够应用到诱导内质网的诱导反应中，减轻内质网进行诱导时产生的应激，并对细胞的毒害较小。在本专利技术中，所述减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液在应用到诱导内质网的诱导反应中时，所述减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液的浓度优选为1.5～2.5mmol/L，更优选为2mmol/L。为了进一步说明本专利技术，下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本专利技术保护范围的限定。实施例1称取32.8mg4-苯基丁酸，加入到20mL的无血清DME/F-12培养基中，在52℃的水浴中涡旋8min，变为橙色，得到预处本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种减轻内质网应激的4‑苯基丁酸溶液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将4‑苯基丁酸与无血清DME/F‑12培养基混合，将得到的共混物在48～52℃的水浴中涡旋8～12min，得到预处理液；2)将所述步骤1)的预处理液静置22～26h，得到减轻内质网应激的4‑苯基丁酸溶液。
【技术特征摘要】
1.一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基混合，将得到的共混物在48～52℃的水浴中涡旋8～12min，得到预处理液；2)将所述步骤1)的预处理液静置22～26h，得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基的质量体积比为32.8mg:20mL。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中涡旋的时间为10min。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤...
【专利技术属性】
技术研发人员：何毅怀，陈欢，唐永静，汪杰，沈访，
申请(专利权)人：遵义医学院附属医院，
类型：发明
国别省市：贵州,52
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