一种制备干眼症药物的应用及治疗干眼症的方法技术

一种制备干眼症药物的应用及治疗干眼症的方法，通过将眼内氧自由基（ROS）抑制剂靶向递送至线粒体内，通过提高外源抗氧化物跨细胞膜转运效率，并使氧自由基（ROS）抑制剂在线粒体，或线粒体周围富集，原位清除线粒体的ROS，从源头上抑制ROS失衡，进而阻断产生眼部炎症的信号通路最终可以有效抑制ROS失衡，从源头上抑制干眼的发生。

Application of a Drug for Dry Eye and a Method for the Treatment of Dry Eye

A method for the preparation of drugs for dry eye and the treatment of dry eye by targeting intraocular oxygen free radical (ROS) inhibitors to mitochondria, which can inhibit ROS imbalance from the source and block ROS imbalance by improving the transmembrane transport efficiency of exogenous antioxidants and enriching oxygen free radical (ROS) inhibitors around mitochondria or mitochondria in situ. The signal pathway that produces ocular inflammation can eventually effectively inhibit ROS imbalance and the occurrence of dry eye from the source.

【技术实现步骤摘要】
一种制备干眼症药物的应用及治疗干眼症的方法
本专利技术具体涉及干眼症
，具体涉及一种制备干眼症药物的应用及治疗干眼症的方法。
技术介绍
干眼症是临床上常见的眼部疾病，又称角结膜干燥症。流行病学研究显示，随着社会老龄化加剧、视频终端使用增加、环境污染日益严重、糖尿病发病率增高等因素，全球范围内干眼发病人数正在急剧上升。全球50岁及以上的中老年人群中，干眼发病率约为5.5%-33.7%干眼临床上常表现为眼睛干涩、易疲倦、眼痒、有异物感、痛灼热感、分泌物黏稠、怕风、畏光、对外界刺激敏感等；严重者会导致眼睛会红肿、充血、角质化、角膜上皮破皮而有丝状物黏附，可造成角结膜病变，并影响视力。由于眼球的结构特性，传统眼表给药生物利用率低，导致>90%。
技术实现思路
为了现有技术的缺陷，本专利技术提供了一种制备干眼症药物的应用及治疗干眼症的方法，提高外源抗氧化物跨膜（细胞膜）转运效率，并使MitoQ在线粒体，或线粒体周围富集，原位清除线粒体的ROS，从源头上抑制ROS失衡，进而阻断产生眼部炎症的信号通路。本专利技术采用的技术解决方案是：一种眼内氧自由基（ROS）抑制剂在制备干眼症药物上的应用。一种线粒体靶向抗氧化剂纳米制剂在制备眼内线粒体氧自由基（ROS）抑制剂上的应用，所述的线粒体靶向抗氧化剂纳米制剂通过将透明质酸（HA）和三苯基膦化艾地苯醌（MitoQ）在高温辅助电荷驱动自组装形成纳米粒子制得。一种治疗干眼症的方法，所述的方法为通过抑制眼内线粒体氧自由基（ROS）浓度，从而阻止氧自由基（ROS）诱导TRMP2激活NRPL3炎症小体，分泌IL-1β炎症因子，最终阻止干眼症的发生。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种制备干眼症药物的应用及治疗干眼症的方法，通过将眼内氧自由基（ROS）抑制剂靶向递送至线粒体内，通过提高外源抗氧化物跨细胞膜转运效率，并使氧自由基（ROS）抑制剂在线粒体，或线粒体周围富集，原位清除线粒体的ROS，从源头上抑制ROS失衡，进而阻断产生眼部炎症的信号通路最终可以有效抑制ROS失衡，从源头上抑制干眼的发生。本专利技术发现ROS可通过诱导TRMP2激活NRPL3炎症小体，分泌IL-1β等炎症因子，从而导致干眼的发生。线粒体是细胞的“动力工厂”，也是产生ROS的主要细胞器，因此也是受ROS损坏最严重的细胞器。线粒体内ROS失衡导致线粒体脂质、蛋白氧化，线粒体RNA/DNA破坏，Ca2+依赖通透性转换孔蛋白激活，细胞因子释放等，最终导致炎症的发生，和生物体不可逆的器质性损坏。因此，我们认为将抗氧化物靶向递送至线粒体内，原位清除线粒体内ROS，可以有效抑制ROS失衡，从源头上抑制干眼的发生。附图说明图1是本专利技术MitoQ/HA纳米粒子细胞毒性分析。图2是本专利技术MitoQ/HA纳米粒子抑制眼表炎症因子表达分析。图3是本专利技术MitoQ/HA纳米粒子抑制环境型干眼效果评价。图4是MitoQ/HA纳米粒子抑制眼表组织自由基产生的效果分析。具体实施方式现结合图1、图2、图3、图4对本专利技术进行进一步说明，1）干眼模型4-6周龄、雌性，无眼表感染和炎症，无陈旧性的角膜白斑，角膜荧光素钠染色评分小于10分的健康C57BL/6小鼠72只（温州医科大学实验动物中心提供，经过温州医科大学实验动物伦理委员会的批准。）。64只小鼠饲养于智能环境控制系统（相对湿度15±3%，风速2.1±0.2m/s，温度21-23℃）作为实验组进行不同的干预措施(处理3天组每组6只，处理1周组每组2只)；8只小鼠饲养于正常环境中，不予任何处理作为正常对照组（NC）。饲养环境中光照从上方天花板向下方地面照射，光照度18lux。12/12h昼/夜循环交替光照。实验组小鼠通过智能环境控制系统（ICES）诱导产生单纯环境因素干眼。ICES饲养箱内环境湿度保持13.1±3.5%，风速范围为2.2±0.2米/秒，温度维持22±2℃；正常对照组动物饲养于湿度60%-80%，无空气对流，温度21-23℃的正常环境中。实验小鼠置于ICES饲养箱中，由于饲养箱内湿度维持较低水平，同时又存在过度空气流通的影响因素，小鼠将表现出与人类干眼时相似的眼表变化。ICES湿度和温度每天调校1-2次。）药物处理实验分为17组，分别是：1）置于正常环境并无干预措施的正常对照组；2）置于ICES中3天并无干预措施组；3）置于ICES中7天并无干预措施组；4-6）置于ICES中并同时双眼予HA稀释成0.3mM，0.1mM，0.05mM的MitoQ/HA纳米药物点眼3天组；7-9）置于ICES中并同时双眼予HA稀释成0.3mM，0.1mM，0.05mM的MitoQ/HA纳米药物点眼7天组；10-12）置于ICES中并同时双眼予生理盐水稀释成0.3mM，0.1mM，0.05mM的游离MitoQ点眼3天组；13-15）置于ICES中并同时双眼予生理盐水稀释成0.3mM，0.1mM，0.05mM的游离MitoQ点眼7天组；16）置于ICES中并同时双眼予药物载体HA点眼3天组；17）置于ICES中并同时双眼予药物载体HA点眼7天组。）角膜荧光素钠染色评估实验第0、7天，对全部实验小鼠进行裂隙灯及荧光素钠染色情况观察评估。角膜荧光素钠染色方法：1mg的荧光素钠溶解于0.5mL的0.9%生理盐水中，用移液枪取荧光素钠溶液0.5μL滴入小鼠结膜囊之中，2min后在裂隙灯显微镜钴蓝光下观察小鼠角膜荧光素钠染色情况并进行总体评分，通过角膜染色对药物治疗的安全性及副作用进行评估。选用美国国立眼科研究所标准分级作为评分标准：小鼠角膜分为上方、下方、鼻侧、颞侧和中央五个区域，每个区域染色情况分为0-4级（等级0：无点染；等级1：1-5点；等级2：6-15点；等级3：16-30点；等级4：30点及以上），各区域评分相加总分即为角膜荧光素染色评分。以固定人员，单盲方式评估并记录结果。结果如图1所示。）组织内ROS检测ROS包括超氧阴离子、过氧化氢、羟自由基或单线态氧等，其生成过多或清除不尽将导致细胞衰老或凋亡。氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯（6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluoresceindiacetate,acetylester；CM-H2DCFDA）是一种可以自由通过细胞膜，并在细胞内长期滞留高质染色剂。一旦被ROS氧化，便产生绿色荧光，据此可用于测定组织细胞内ROS的含量。小鼠眼球取出后，立即放入冰冻切片包埋剂OCT中，液氮冷冻，做10µm冰冻切片，将500μL预冷的GENMED清理液铺满切片表面，去除多余清理液，加200μL预热（室温）的染色工作液，置于37℃湿润培养箱里孵育20min；去除染色工作液（避光），用500μL清理液清洗后，用含DAPI的抗淬灭剂（DAPI：抗淬灭剂=1:1000）封片，立即在激光共聚焦显微镜下观察（激发波长490nm，散发波长520nm）。具体操作步骤参照上海杰美基因医药科技有限公司的冰冻切片ROS高质荧光测定试剂盒说明书。试验结果如图3、图4所示。结论本专利技术通过研究发现，ROS可通过诱导TRMP2激活NRPL3炎症小体，分泌IL-1β等炎症因子，从而导致干眼的发生。线粒体是细胞的“动力工厂”，也是产生ROS的主要细胞器，因此也本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种眼内氧自由基（ROS）抑制剂在制备干眼症药物上的应用。

【技术特征摘要】
1.一种眼内氧自由基（ROS）抑制剂在制备干眼症药物上的应用。2.一种线粒体靶向抗氧化剂纳米制剂在制备眼内线粒体氧自由基（ROS）抑制剂上的应用，其特征在于，所述的线粒体靶向抗氧化剂纳米制剂通过将透明质酸（HA）和三苯基膦化艾地苯醌（MitoQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈蔚，郑钦象，李玲，林森，葛超翔，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33