一种基于透明质酸的线粒体靶向抗氧化剂Mito Q纳米制剂的制备方法及应用技术

一种基于透明质酸的线粒体靶向抗氧化剂Mito Q纳米制剂的制备方法及应用，本发明专利技术利用Mito Q带正电的特点，将他与带负电的透明质酸混合，探索通过高温辅助电荷驱动自组装的方法制备Mito Q/HA抗氧化物纳米粒子，利用纳米粒子包载的方法，提高药物跨膜转运效率，提高Mito Q线粒体靶向效果。

Preparation and application of mitochondrial targeting antioxidant Mito Q nanoparticles based on hyaluronic acid

The preparation method and application of a hyaluronic acid-based mitochondrial targeting antioxidant Mito Q nanoparticles are described. By using the positive charge characteristic of Mito Q, the Mito Q nanoparticles are mixed with negatively charged hyaluronic acid, and the high-temperature assisted charge-driven self-assembly method is explored to prepare Mito Q/HA antioxidant nanoparticles. The method of nanoparticles encapsulation is used to improve the drug transmembrane transport efficiency. To improve the targeting effect of Mito Q mitochondria.

【技术实现步骤摘要】
一种基于透明质酸的线粒体靶向抗氧化剂MitoQ纳米制剂的制备方法及应用
本专利技术具体涉及干眼症
，具体涉及一种基于透明质酸的线粒体靶向抗氧化剂MitoQ纳米制剂的制备方法及应用。
技术介绍
ROS失衡诱发的线粒体结构和功能丧失与多种年龄相关疾病相关。线粒体内ROS失衡导致线粒体脂质、蛋白氧化，线粒体RNA/DNA破坏，Ca2+依赖通透性转换孔蛋白激活，细胞色素C释放等，诱导形成凋亡小体，并进一步促进细胞凋亡，最终导致生物体（或细胞器）不可逆的器质性损坏。研究表明，线粒体的DNA比细胞核的DNA更容易受ROS的损害。MitoQ是一种线粒体靶向抗氧化剂，可以减缓线粒体的氧化应激损伤，激活细胞能量，从而支持器官功能，改善长期健康水平。线粒体作为一种胞内主要细胞器，MitoQ在线粒体靶向递送的过程中面临细胞膜屏障、线粒体膜屏障、和胞内代谢屏障等，使MitoQ递送效率降低。由于尺寸效应，纳米粒子通过內吞作用进入细胞，用它包载能够显著提高外源抗氧化物跨膜转运的效率和对代谢酶系的耐受性。理论研究表明不同尺寸的纳米粒子主要通过细胞内吞作用[包括网格蛋白介导的內吞（40nm<粒径<100nm）、胞饮(100nm<粒径<1000nm)、和细胞吞噬作用(粒径>1000nm)]进行跨膜转运。通常认为细胞对粒径为50-90nm左右的纳米粒子內吞作用效率最高，随粒子增大，內吞效率降低。当然，纳米粒子形貌、带电量、化学组成等因素也影响细胞对纳米粒子的內吞效率。通过纳米粒子包载，能够减少抗氧化物与胞内代谢酶系的接触，降低酶对抗氧化活性的破坏。专利技术内容为了现有技术的缺陷，本专利技术提供了一种基于透明质酸的线粒体靶向抗氧化剂MitoQ纳米制剂的制备方法及应用，将带正电的三苯基膦化抗氧化物与带负点的透明质酸在缓冲液体系中，高温辅助下，电荷驱动自组装形成稳定的纳米粒子。本专利技术采用的技术解决方案是：一种基于透明质酸的线粒体靶向抗氧化剂MitoQ纳米制剂的制备方法,包括以下步骤，（1）将透明质酸（HA）在室温下磁力搅拌直至完全溶解，将三苯基膦化艾地苯醌（MitoQ）溶于二甲基亚砜（DMSO）中，得到MitoQ/DMSO溶液；（2）取MitoQ/DMSO溶液在磁力搅拌下滴加至HA溶液中，透析除去DMSO，高温处理后即可得所述的MitoQ/HA抗氧化纳米粒子。所述的步骤（1）中的MitoQ/DMSO溶液浓度为10-90μg/mL。所述的步骤（2）中的MitoQ/HA抗氧化纳米粒子的浓度为0.18-1.2mg/mL。一种MitoQ/HA抗氧化纳米粒子在制备治疗干眼症药物上的应用。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种基于透明质酸的线粒体靶向抗氧化剂MitoQ纳米制剂的制备方法及应用，本专利技术利用MitoQ带正电的特点，将他与带负电的透明质酸混合，探索通过高温辅助电荷驱动自组装的方法制备MitoQ/HA抗氧化物纳米粒子，利用纳米粒子包载的方法，提高药物跨膜转运效率，提高MitoQ线粒体靶向效果。附图说明图1是本专利技术纳米粒子的载药量和包封率示意图。图2是本专利技术不同时间及温度诱导下MitoQ/HANP的粒径、多分散指数（PDI）和Zeta电位的变化规律图。图3是本专利技术纳米粒子的形态观察电镜图。图4是本专利技术线粒体靶向效果分析图。具体实施方式现结合图1、图2、图3、图4对本专利技术进行进一步说明，1)MitoQ/HA纳米药物的构建HA室温下磁力搅拌直至完全溶解。将MitoQ溶于DMSO中。分别取不同量的MitoQ/DMSO溶液在磁力搅拌下滴加至HA溶液中。配置成浓度分别为10、30、50、70、90μg/mL的MitoQ/DMSO溶液。透析除去少量DMSO。高温（不同温度、时间）处理后即可得MitoQ/HA纳米粒子（MitoQ/HAnanoparticle，MitoQ/HANP）。MitoQ/HANP浓度为0.18mg/mL，0.3mg/mL，0.6mg/mL，1.2mg/mL四组。）MitoQ/HA纳米药物的粒径、电位及多分散指数使用马尔文粒度分析仪ZetasizerNanoS90（Malven，UK）分析测定高温对MitoQ/HA粒子粒径、Zeta电位和多分散指数（PDI）的影响。结果如图2所示。）MitoQ/HA纳米药物的形态观察TecnaiG2F20场发射透射电子显微镜（TEM）观察MitoQ/HA纳米粒子的形貌特征。TEM观察纳米药物形态方法：将样品配制成适当浓度的水溶液，将溶液滴在铜网上，在室温下干燥并用2%（w/v）的磷钨酸溶液染色后用TEM观察。如图3所示。）MitoQ/HANP的包载量、包封率应用酶标仪对MitoQ进行全波长扫描，确定MitoQ最大吸收峰，并在该波长下测定不同浓度（10、30、50、70、90μg/mL）的MitoQ溶液的吸光度，制作标准曲线。测量0.18mg/mL，0.3mg/mL，0.6mg/mL，1.2mg/mL的四组不同浓度的MitoQ/HANP的吸光度。根据标准曲线计算出相应浓度的MitoQ/HA溶液中的MitoQ浓度。载药量和包封率计算公式如下：载药量（%）=（载体内药物含量/载体和药物总量）×100包封率（%）=（包载药物量/给药量）×100结果如图1所示。）药物细胞摄取及线粒体靶向性评价使用线粒体制备试剂盒（MitochondriaIsolationKit，北京普利莱基因技术有限公司）提取细胞中的线粒体。对比分析MitoQ/HANP和游离MitoQ处理MitoQ在细胞、线粒体内的累积分布规律。根据测出的线粒体及细胞总蛋白浓度用超纯水配平成35ng/mL样品，过滤后用UPLC-MS-MS分析MitoQ含量。如图4所示。各位技术人员须知：虽然本专利技术已按照上述具体实施方式做了描述，但是本专利技术的专利技术思想并不仅限于此专利技术，任何运用本专利技术思想的改装，都将纳入本专利专利权保护范围内。以上所述仅是本专利技术的优选实施方式，本专利技术的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本专利技术思路下的技术方案均属于本专利技术的保护范围。应当指出，对于本
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于透明质酸的线粒体靶向抗氧化剂Mito Q纳米制剂的制备方法,其特征在于，包括以下步骤，（1）将透明质酸（HA）在室温下磁力搅拌直至完全溶解，将三苯基膦化艾地苯醌（Mito Q）溶于二甲基亚砜（DMSO）中，得到Mito Q/DMSO 溶液；（2）取Mito Q/DMSO 溶液在磁力搅拌下滴加至 HA溶液中，透析除去DMSO，高温处理后即可得所述的Mito Q/HA 抗氧化纳米粒子。

【技术特征摘要】
1.一种基于透明质酸的线粒体靶向抗氧化剂MitoQ纳米制剂的制备方法,其特征在于，包括以下步骤，（1）将透明质酸（HA）在室温下磁力搅拌直至完全溶解，将三苯基膦化艾地苯醌（MitoQ）溶于二甲基亚砜（DMSO）中，得到MitoQ/DMSO溶液；（2）取MitoQ/DMSO溶液在磁力搅拌下滴加至HA溶液中，透析除去DMSO，高温处理后即可得所述的MitoQ/HA抗氧化纳米粒子。2.根据权利要求1所述的一种基于透...

【专利技术属性】
技术研发人员：林森，南开辉，李玲，郑钦象，陈蔚，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33