人微小miR-106b-5p干扰片段的构建方法及其应用技术

黑色素瘤死亡率高，研发抑制黑色素瘤细胞增殖的新分子治疗靶点，可为黑色素瘤临床治疗提供的实验室依据。MicroRNA(微小RNA，简称miRNA)是长约22个核苷酸的非编码小分子RNA，在细胞增殖进程中起着重要作用，且有高组织特异性，不易降解，易于检测等特性，是分子靶向治疗理想靶标。因此，本发明专利技术提出一种人微小miR‑106b‑5p(hsa‑miR‑106b‑5p)干扰片段构建方法及其在黑色素瘤细胞增殖中的应用，可为黑色素瘤基础研究及临床治疗提供新的实验证据。其中所述的miR‑106b‑5p全称为：人微小核糖核酸‑106b‑5`端(hsa‑miR‑106b‑5p)，曾用名hsa‑miR‑106b。

Construction of human microRNA-106 b-5p interference fragment and its application

Melanoma has a high mortality rate. The research and development of new molecular therapeutic targets to inhibit the proliferation of melanoma cells can provide a laboratory basis for clinical treatment of melanoma. MicroRNA (microRNA, referred to as microRNA) is a non-coding small molecule RNA with about 22 nucleotides. It plays an important role in the process of cell proliferation. It has high tissue specificity, is not easy to degrade, and is easy to detect. It is an ideal target for molecular targeted therapy. Therefore, the present invention proposes a method for constructing interference fragments of human microRNA 106 B 5p (hsa Mi 106 B 5p) and its application in melanoma cell proliferation, which can provide new experimental evidence for basic research and clinical treatment of melanoma. The full name of the microRNA 106b_5p mentioned above is: human microribonucleic acid 106b 5 terminal (hsa microRNA 106b 5p), and the name HSA microRNA 106b was used in the past.

【技术实现步骤摘要】
人微小miR-106b-5p干扰片段的构建方法及其应用
本专利技术属于生物技术及基因工程领域，具体涉及一种抑制黑色素瘤细胞增殖的人微小miR-106b-5p(hsa-miR-106b-5p)的干扰片段的构建方法及其应用。
技术介绍
MicroRNA(miRNA)是一类长约22个核苷酸的非编码小分子RNA，由约70～90个碱基大小的具发夹结构的单链RNA前体(pre-miRNA)经Dicer酶加工后生成。其通过与靶mRNA分子3`非编码区域(3’UTR)完全或不完全互补配对，降解mRNA或抑制其翻译，在个体发育、细胞凋亡、增殖及分化等生命活动中发挥重要作用。miRNA可在转录后水平调节多个蛋白表达，单个靶蛋白也可同时接受多个miRNAs共同调控，由此形成复杂而精细的调控网络，发挥多种生物学作用。恶性黑色素瘤死亡率高，放化疗不敏感，晚期患者5年生存率低于5％。我国黑色素瘤发病率及死亡率逐年上升，且发病年龄呈年轻化趋势。尽管分子靶向治疗药物的出现为黑色素瘤临床治疗带来突破性进展，但令人遗憾的是，CTLA-4单抗、PD-1单抗、BRAF抑制剂和MEK抑制剂等多种靶向治疗药物均未在国内上市，且本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.人微小miR‑106b‑5p干扰片段的构建方法，其包括如下步骤：S1，设计与成熟hsa‑miR‑106b‑5p互补的RNA单链序列(hsa‑miR‑106b‑5p干扰序列)引物，化学合成该引物；S2，设计可特异性干扰hsa‑miR‑106b‑5p的核苷酸序列，并合成其编码基因序列；S3，用PCR扩增及化学反应的方法，利用“模板序列”合成hsa‑miR‑106b‑5p的干扰序列；其特征在于，步骤S1中所述的miR‑106b‑5p引物序列为正向引物：TCGCTAAAGTGCTGACAGTGC，反向引物GTCGTATCCAGTG CAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACat...

【技术特征摘要】
1.人微小miR-106b-5p干扰片段的构建方法，其包括如下步骤：S1，设计与成熟hsa-miR-106b-5p互补的RNA单链序列(hsa-miR-106b-5p干扰序列)引物，化学合成该引物；S2，设计可特异性干扰hsa-miR-106b-5p的核苷酸序列，并合成其编码基因序列；S3，用PCR扩增及化学反应的方法，利用“模板序列”合成hsa-miR-106b-5p的干扰序列；...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋鑫，李真，孟旭东，宋登燕，
申请(专利权)人：信雅生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32