虎γ干扰素及其表达基因、制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种一种虎γ干扰素及其表达基因、制备方法和应用，属于基因工程技术领域。该虎γ干扰素包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。上述虎γ干扰素是通过分离培养虎外周血淋巴细胞，ConA诱导其分泌γ干扰素，从淋巴细胞中克隆获得的虎γ干扰素。并且为了更好地利用基因工程技术来开发重组虎干扰素γ制剂，本发明专利技术中，还将去除信号肽序列的虎干扰素γ基因序列根据毕赤酵母的偏嗜性进行密码子优化，插入到pPIC9K载体，构建成能分泌表达干扰素γ蛋白的重组表达载体，然后将其导入高效表达系统‑毕赤酵母中。培养毕赤酵母，表达虎γ干扰素蛋白，为后续制备用于增强虎免疫能力和/或抵抗病原微生物感染的药物中提供坚实的基础。

Tiger interferon gamma and its expression genes, preparation methods and Applications

The invention relates to a tiger gamma interferon and its expression gene, a preparation method and application, belonging to the field of genetic engineering technology. The tiger interferon gamma includes amino acid sequences such as SEQ ID NO.1. The tiger interferon-gamma (IFN-gamma) was isolated from peripheral blood lymphocyte of tiger and induced by ConA to secrete IFN-gamma, which was cloned from lymphocyte. In order to make better use of genetic engineering technology to develop recombinant IFN-gamma preparations, the codon of IFN-gamma gene sequence removing signal peptide sequence is optimized according to the preference of Pichia pastoris, inserted into pPIC9K vector, constructed a recombinant expression vector capable of secreting IFN-gamma protein, and then transferred into high-efficiency expression system Pichia pastoris. Medium. Pichia pastoris was cultured to express tiger interferon-gamma protein, which provided a solid basis for subsequent preparation of drugs for enhancing tiger immunity and/or resisting pathogenic microbial infection.

【技术实现步骤摘要】
虎γ干扰素及其表达基因、制备方法和应用
本专利技术涉及基因工程
，特别是涉及一种虎γ干扰素及其表达基因、制备方法和应用。
技术介绍
虎(Pantheratigris)是世界上公认的最濒危物种，被列为《华盛顿公约》CITES附录Ⅰ级保护动物，而在现存虎的6个亚种中，东北虎(Pantheratigrisaltaica)分布于俄罗斯远东地区、中国东北东部林区和朝鲜北部，华南虎野外已功能性灭绝，现存的华南虎仅分布于中国动物园及一些圈养保育机构中，数量仅170多只，是世界最濒危的一个虎亚种。近年来的一些研究表明，一些虎患有的细菌性、病毒性及寄生虫性疾病使野生东北虎和人工饲养的东北虎、华南虎、孟加拉虎和印支虎受到极大威胁，造成严重的损失，因此对这些疾病的防疫与治疗是不可忽视的。特别是华南虎，因其家族高度近亲，免疫能力低下，提高其非特异性免疫能力对于华南虎种群的健康具有重要的意义。干扰素(Interferon，IFN)是一种在特定诱生剂的作用下由单核细胞和淋巴细胞产生的具有抗病毒繁殖及免疫调节等功能的蛋白质。干扰素可分为Ⅰ型、II型和Ⅲ型。Ⅰ型干扰素又称病毒干扰素或白细胞干扰素，包括α、β、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种虎γ干扰素，其特征在于，包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种虎γ干扰素，其特征在于，包括如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列。2.一种编码权利要求1所述的虎γ干扰素的表达基因，其特征在于，所述表达基因的序列为：A)编码权利要求1的虎γ干扰素的核苷酸序列；或者B)与A)的核苷酸序列编码相同序列的蛋白质，但因遗传密码的简并性而与A)的核苷酸序列不同的序列；或者C)对上述A)或B)所示核苷酸序列进行一个或多个碱基的取代、缺失、添加修饰的核苷酸序列。3.根据权利要求2所述的虎γ干扰素的表达基因，其特征在于，所述A)中的核苷酸序列如SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示。4.一种pPIC9K表达载体，其特征在于，包含权利要求2或3所述的虎γ干扰素的表达基因。5.根据权利要求4所述的pPIC9K表达载体，其特征在于，包含SEQIDNO.4所示的核苷酸序列。6.一种重组毕赤酵母，其特征在于，包含权利要求4-5任一项所述的pPIC9K表达载体。7.一种权利要求1所述的虎γ干扰素的制备方法，其特征在于，通过诱导虎外周淋巴细胞获得所述虎γ干扰素，或者通过基因工程生产所述虎γ干扰素。8.根据权利要求7所述的虎γ干扰素的制备方法，其特征在于，通过诱导虎外周淋巴细胞获得所述虎γ干扰素，步骤如下：取虎外周血，分离其中淋巴细胞，以50-150μg/mL刀豆素诱导，于CO2...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈武，陈安妮，翟俊琼，程松，吴亚江，代军威，单芬，彭仕明，
申请(专利权)人：广州动物园，
类型：发明
国别省市：广东,44