杂交瘤细胞株、制备方法、单克隆抗体、应用及试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种杂交瘤细胞株、制备方法、单克隆抗体、应用及试剂盒，涉及动物基因工程技术领域。本发明专利技术提供的分泌抗Hp蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株为CCTCC NO：C2017119的杂交瘤细胞株和CCTCC NO：C201858的杂交瘤细胞株的组合。还公开了一种抗Hp蛋白的单克隆抗体，该单克隆抗体选自配对的CCTCC NO：C2017119的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体和CCTCC NO：C201858的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。两株杂交瘤细胞株所分泌的抗体用于制备奶牛早期妊娠检测ELISA试剂盒，该ELISA试剂盒敏感性好、特异性高，便于更早的检测早孕牛群。

Hybridoma cell lines, preparation methods, monoclonal antibodies, applications and kits

The invention provides a hybridoma cell line, a preparation method, a monoclonal antibody, an application and a kit, which relates to the field of animal genetic engineering technology. The hybridoma cell line secreting monoclonal antibody against Hp protein is a combination of the hybridoma cell line CCTCC NO: C2017119 and the hybridoma cell line CCCCCC NO: C201858. A monoclonal antibody against Hp protein is also disclosed. The monoclonal antibody is selected from the monoclonal antibody secreted by the matched hybridoma cell line CCTCC NO:C2017119 and the monoclonal antibody secreted by the hybridoma cell line CCCCCC NO:C201858. The antibodies secreted by two hybridoma cell lines were used to prepare ELISA kit for early pregnancy detection in dairy cows. The ELISA kit has good sensitivity and specificity, and is convenient for early pregnancy detection in cattle.

【技术实现步骤摘要】
杂交瘤细胞株、制备方法、单克隆抗体、应用及试剂盒
本专利技术涉及动物基因工程
，具体涉及一种杂交瘤细胞株、制备方法、单克隆抗体、应用及试剂盒。
技术介绍
目前在临床上应用较广泛的诊断方法有直肠检查和超声波检查。但直肠检查一般都在母牛配种60d进行，有的甚至时间更长才能做出诊断，这样不仅影响了母牛的繁殖周期，而且，还影响到母牛生产性能的发挥。而超声波检测法成本高，且易感染。有的牛场在使用但是尚未广泛推广的牛妊娠相关蛋白(PAG)ELISA试剂盒能在妊娠后28d做出较为可靠的判断。但这些方法均只能在奶牛人工授精三周后做出准确诊断。而研究表明，如果人工授精后一个情期内(三周)能排查出空怀牛，即可对其进行快速的同期发情处理，在第21-23d进行复配，减少空怀天数，提高奶牛的繁殖效率，因此从某种程度上来讲，能否于奶牛人工授精后一个情期内判断奶牛妊娠或者空怀，是缩短奶牛产犊间隔和提高繁殖率的关键。结合珠蛋白(Haptoglobin；Hp)又称触珠蛋白，是一种急性期蛋白广泛存在于人类和许多哺乳动物的血清及其他体液中，在妊娠初期能够在母体与胚胎之间传递信号。另外，有学者进一步研究发现妊娠期和非本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分泌抗Hp蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述杂交瘤细胞株为CCTCC NO：C2017119的杂交瘤细胞株和CCTCC NO：C201858的杂交瘤细胞株的组合。

【技术特征摘要】
1.一种分泌抗Hp蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述杂交瘤细胞株为CCTCCNO：C2017119的杂交瘤细胞株和CCTCCNO：C201858的杂交瘤细胞株的组合。2.一种如权利要求1所述的一种分泌抗Hp蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于：以奶牛RNA为模板扩增Hp基因片段；将扩增到的Hp基因插入到杆状病毒转移质粒PFastBacHTB的NcoI和HindIII位点构建为重组转移质粒PFastBacHTB-Hp；将该重组转移质粒PFastBacHTB-Hp转化至含有杆状病毒骨架质粒的DH10Bac感受态细胞，通过同源重组将Hp基因整合至杆状病毒骨架质粒Bacmid中；将筛选、纯化后的重组穿梭载体转染到sf9昆虫细胞中，待出现细胞病变后收集细胞上清即获得重组杆状病毒rBacmid-Hp；用重组杆状病毒rBacmid-Hp表达的Hp蛋白过柱纯化后作为免疫抗原免疫小鼠，将免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤融合，再经3次亚克隆筛选到能稳定分泌抗Hp蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别是：3B12、4F4、4F11、5D7、5G8、7E5、10C3、12F9；筛选出一对配对的杂交瘤细胞株：4F11和12F9；筛选出的杂交瘤细胞株4F11即为CCTCCNO：C2017119的杂交瘤细胞株，筛选出的杂交瘤细胞株12F9即为CCTCCNO：C201858的杂交瘤细胞株。3.一种分泌抗Hp蛋白的单克隆抗体，其特征在于：所述分泌抗Hp蛋白的单克隆抗体选自配对的两种单克...

【专利技术属性】
技术研发人员：向敏，程蕾，胡修忠，周源，余婕，刘晓华，王定发，夏瑜，陶弼菲，
申请(专利权)人：武汉市农业科学院，
类型：发明
国别省市：湖北,42