一株假交替单胞菌及其作为益生菌在水产上的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种假交替单胞菌及其作为益生菌在水产上的应用，属于菌种技术领域。一株假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp)20101015001株，所述菌株于2018年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为：CGMCC No.16067。该菌株对可引起对虾的急性肝胰腺坏死病的细菌具有拮抗作用；以携带有3种病原的对虾为对象，进行了该株菌的益生菌的应用效果评估，3种病原包括有白斑综合征病毒、可引起对虾急性肝胰腺坏死病原细菌，虾肝肠胞虫，结果发现本发明专利技术菌株添加饲料投喂对虾后，可显著提高对虾的成活率，并可提高生长率和单位水体产量，同时有降低饲料系数的效果。

A PseudoAlternaria strain and its application as probiotics in aquatic products

The invention relates to a pseudoalternating bacterium and its application in aquatic products as probiotics, belonging to the technical field of strains. A strain of Pseudoalteromonas sp, 201015001, was deposited in the General Microbial Center of the China Council for the Preservation and Management of Microbial Species on July 6, 2018. Its preservation number is CGMCC No. 16067. The strain has antagonistic effect on bacteria that can cause acute hepatopancreas necrosis of prawns. The application effect of probiotics of the strain was evaluated for prawns carrying three kinds of pathogens, including white spot syndrome virus, pathogenic bacteria that can cause acute hepatopancreas necrosis of prawns and shrimp hepatopancreas cystis. The results showed that the strain of the present invention was fed with feed to prawns. It can significantly improve the survival rate of shrimp, increase the growth rate and yield per unit water body, and reduce the feed coefficient.

【技术实现步骤摘要】
一株假交替单胞菌及其作为益生菌在水产上的应用
本专利技术涉及一种假交替单胞菌及其作为益生菌在水产上的应用，属于菌种

技术介绍
假交替单胞菌属(Pseudoalteromonassp.)是Gaulthier等1995年报道的新海洋细菌属，其分类地位属变形菌门(Proteobacteria)、γ-变形菌纲(γ-proteobacteria)、交替单胞菌目(Alteromonadales)、假交替单胞菌科(Pseudoalteromonadaceae)，是一类好氧异养型、不产芽胞、具有鞭毛的革兰氏阴性细菌。该属有别于假单胞菌属(Pseudomonassp.)和交替单胞菌属(Alteromonassp.)，目前鉴定到种的有南极洲假交替单胞菌(P.antarctica)、柠檬假交替单胞菌(P.citrea)、杀鱼假交替单胞菌(P.piscicida)和河豚毒素假交替单胞菌(P.tetraodonis)等30多种。假交替单胞菌目前均分离自海洋环境中，如海水、海冰、海洋沉积物环境，以及甲壳动物、海鞘、海绵、无脊椎动物幼虫和藻类等。该属细菌在水产养殖中多有为致病菌的报道。有研究报道表明，假交替单胞菌也与条斑紫菜(Porphyraeyezoensis)绿斑病、条斑紫菜丝状体黄斑病相关(闫咏等，2002；王洪斌等，2011)；王印庚等(2006)报道了假交替单胞菌(Pseudoalteromonasnigrifaciens)是刺参(Apostichopusjaponicus)“腐皮综合征”的致病菌；乔迁等(2010)从发病七带石斑鱼(Epinephelusseptemfasciatus)分离出具有致病性的Pseudoaheromonassp.BY0081株，该病原在较低的温度下仍有较强的毒力，也可感染淡水剑尾鱼(Xiphophorushelleri)；白雪松等(2013)从发病日本对虾(Penaeusjaponicas)蚤状幼体分离的Pseudoalteromonassp.XS-1株，可引起日本对虾蚤状幼体及仔虾的死亡；乔毅等(2015)报道了Pseudoalteromonassp.LSHD-Ⅰ株可引起黑鲷(Acanthopagrusschlegeli)皮肤溃烂病。但也有研究发现，该属细菌也能够分泌多种胞外的生物活性和酶活性物质，具有抗细菌、抗真菌和溶藻等活性(Bowman，2007；黄姿等，2008；Chenetal，2010；Holmstrometal，1998；Lucas-Elioetal，2005)。Rodrigues等(2015)报道了Pseudoalteromonassp.3J6株对可引起马尼拉蛤(Ruditapesphilippinarum)褐色边缘病(BrownRingDisease,BRD)的Vibriotapetis具有一定的抑制作用。近年来，水产病害已对水产养殖的健康可持续发展构成严重威胁，开发针对水产病原的有效防控方法的应用研究，是水产业健康可持续发展的迫切要求。以虾类养殖业为例，已知的虾类疫病多达10种，且近年呈现多病原感染的趋势。其中上个世纪90年代报道的白斑综合症(WhiteSpotSyndrome，WSS)，以及近些年来相继发现的肝胰腺微孢子虫病(Hepatopancreaticmicrosporidiosis，HPM)和急性肝胰腺坏死病(AcuteHepatopancreaticNecrosisDisease，AHPND)的3种疫病，分别是当前虾类产业中重要的病毒病、寄生虫病和细菌病，其病原分别是由白斑综合症病毒(Whitespotsyndromevirus，WSSV)、虾肝肠胞虫(Enterocytozoonhepatopenaei，EHP)和携带着编码毒力蛋白PirVP的质粒的细菌所引起的。该3种病原也是当前我国虾类疫病中有着很高阳性检出率及危害的重要病原，据《2016年中国水生动物卫生状况报告》报道，2016年我国开展的白斑综合症的主动监测范围包括天津等12个省(自治区、直辖市)，661个监测养殖场点的平均阳性养殖场点检出率为16.2％，997批次样品的平均阳性样品检出率为12.9％。而被动监测中，507批次样品中的虾肝肠胞虫阳性率为30.9％，501批次的急性肝胰腺坏死性病的阳性率为22.5％。益生菌(Probiotics)作为活体微生物制剂，具有促进营养物质的消化吸收而促生长，其本身也可作为营养物质而被机体吸收；分泌拮抗物质或争夺生态位抑制有害微生物而优化菌群结构；激发机体的非特异性免疫提高抗病力，其在水产养殖中的应用也为水产病害的防控提供了一种方法。我们在2010年10月，从健康大菱鲆肠道中分离鉴定到一株假交替单胞菌20101015001株，其保藏编号为：CGMCCNo.16067。人工感染实验结果表明，该菌株对凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)没有致病作用；该菌株具有胞外蛋白酶活性，抑菌实验结果表明，该菌株对可引起对虾急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌具有拮抗作用。该菌株添加到对虾饲料中，投喂携带有致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌、白斑综合症病毒、虾肝肠胞虫的凡纳滨对虾幼虾60天后，可不同程度提高实验对虾血清蛋白浓度，以及超氧化物歧化酶活力、过氧化物酶活力、溶菌酶和酸性磷酸酶活力等免疫酶活性，成活率、生长率和单位水体产量也较对照组有显著提高，并可有效降低饲料系数。上述结果说明本专利技术菌株可提高水生动物的抗病力和生长性能，具有水产益生菌的开发应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株假交替单胞菌及其作为益生菌在水产上的应用。一株假交替单胞菌(Pseudoalteromonassp)，菌株的分类命名为：假交替单胞菌(Pseudoalteromonassp)20101015001株；于2018年7月6号在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏；保藏编号为：CGMCCNo.16067；保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。所述假交替单胞菌(Pseudoalteromonassp)20101015001株于2010年分离自一尾健康大菱鲆(Scophthalmusmaximus)肠道中，经证实该菌株不具有致病性，凡纳滨对虾在浓度为1.0×108CFU/ml的该菌株中浸泡72h后也是安全的。所述假交替单胞菌20101015001株，可培养于2216E海水培养基，培养方法如下：从-80℃保存的菌种中挑取少量接种于液体培养基或固体平板，培养温度范围为20—37℃。其中液体培养中，180r/min摇瓶培养至OD600为0.5—0.6，即可获得该菌株的新鲜菌液。所述假交替单胞菌20101015001株的16srRNA和弧菌溶血素基因的碱基序列如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示，这些基因具有该菌株的特征性。所述假交替单胞菌20101015001株可产生胞外蛋白活性物质，具有胞外蛋白酶活性。所述假交替单胞菌20101015001株，以及该菌株的各类产物和/或其产物的改造物，对对虾类不具有致病性，对可引起致急性肝胰腺坏死病的细菌具有拮抗作用。所述的急性肝胰腺坏死病的细菌为携带具有编码PirA和/或PirB毒素的基因的质粒的弧本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp)，其特征在于所述菌株于2018年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为：CGMCC No.16067；所述菌株是从健康大菱鲆肠道中分离得到的野生假交替单胞菌株。

【技术特征摘要】
2018.12.19 CN 20181155535091.一株假交替单胞菌(Pseudoalteromonassp)，其特征在于所述菌株于2018年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为：CGMCCNo.16067；所述菌株是从健康大菱鲆肠道中分离得到的野生假交替单胞菌株。2.如权利要求1所述的假交替单胞菌CGMCCNo.16067株，其特征在于所述菌株的16srRNA和弧菌溶血素基因的碱基序列如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示，这些基因具有该菌株的特征性。3.如权利要求1所述的假交替单胞菌CGMCCNo.16067株，其特征在于所述菌株，具有胞外蛋白酶活性。4.如权利要求1所述的假交替单胞菌CGMCCNo.16067株，其特征在于所述菌株，以及该菌株的各类产物和/或其产物的改造物，对对虾类不具有致病性，对可引起对虾急性肝胰腺坏死病的细菌具有拮抗作用。5.如权利要求4所述的假交替单胞菌CGMCCNo.16067株，其特征在于所述可引起致急性肝胰腺坏死病的细菌为携带具有编码PirA和/或PirB毒素的基因的质粒的弧菌属细菌。...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄偼，谢国驷，朱开玲，练小军，万晓媛，张庆起，王会善，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，连云港市启明水产有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37