人Lrp4抗原、人Lrp4抗体检测试剂盒及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了人Lrp4抗原、ELISA检测试剂盒及其制备方法与应用。人Lrp4抗原包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，还提供了七种分别含有上述七种人Lrp4抗原的检测试剂盒，以及1种同时含有上述七种人Lrp4抗原的检测试剂盒。该人Lrp4检测试剂盒，检测人血清中的Lrp4抗体，特异性强，反应灵敏度高，高通量、成本低，能够对对重症肌无力病症进行诊断，适于大规模推广应用。

Detection Kit of Human Lrp4 Antigen and Human Lrp4 Antibody and Its Preparation and Application

The invention provides human Lrp4 antigen, ELISA detection kit, preparation method and application. Human Lrp4 antigens include amino acid sequences shown in SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6 and SEQ ID NO:7. Seven test kits containing the seven human Lrp4 antigens mentioned above and one test kit containing the seven human Lrp4 antigens at the same time are also provided. The human Lrp4 detection kit has strong specificity, high sensitivity, high throughput and low cost. It can diagnose myasthenia gravis and is suitable for large-scale application.

【技术实现步骤摘要】
人Lrp4抗原、人Lrp4抗体检测试剂盒及其制备方法与应用
本专利技术涉及生物制药
，尤其涉及人Lrp4抗原、人Lrp4抗体检测试剂盒及其制备方法与应用。
技术介绍
重症肌无力(Myastheniagravis，MG)，是常见的肌肉神经接头(neuromuscularjunction，NMJ)疾病。在大多数患者中，MG可能来自一个对乙酰胆碱受体(AChRs)的自身免疫反应，能够在80％-85％的MG患者中检测到AChRs的自身抗体。然而，AChR抗体在大约20％的MG患者中没有被检测到。有证据表明，这些“血清反应阴性”的患者可以产生对NMJ形成或保持非常关键的蛋白抗体。从运动神经元释放的聚蛋白，结合到低密度脂蛋白受体相关的蛋白4(LRP4)，激活受体酪氨酸激酶MuSK来指导NMJ的形成。大约40％-70％的血清反应阴性患者有MuSK自身抗体。其余6％-12％的MG患者对AChR和MuSK抗体具有双血清阴性反应。LRP4是一个低密度脂蛋白受体(LDLR)家族成员，是对MuSK激活、AChR聚集和NMJ形成非常关键的蛋白的受体。研究者指出，LRP4可能是双血清反应阴性患者中的一种自本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人Lrp4抗原，其特征在于，包括以下任意一种片段或者七种片段：片段1：Lrp4‑26，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；片段2：Lrp4‑266，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；片段3：Lrp4‑431，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；片段4：Lrp4‑598，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；片段5：Lrp4‑805，氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；片段6：Lrp4‑1041，氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；片段7：Lrp4‑1381，氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。

【技术特征摘要】
1.一种人Lrp4抗原，其特征在于，包括以下任意一种片段或者七种片段：片段1：Lrp4-26，氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；片段2：Lrp4-266，氨基酸序列如SEQIDNO.2所示；片段3：Lrp4-431，氨基酸序列如SEQIDNO.3所示；片段4：Lrp4-598，氨基酸序列如SEQIDNO.4所示；片段5：Lrp4-805，氨基酸序列如SEQIDNO.5所示；片段6：Lrp4-1041，氨基酸序列如SEQIDNO.6所示；片段7：Lrp4-1381，氨基酸序列如SEQIDNO.7所示。2.一种权利要求1所述的人Lrp4抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、将Lrp4-26、Lrp4-266、Lrp4-431、Lrp4-598、Lrp4-805、Lrp4-1041、Lrp4-1381的7个片段的DNA序列分别进行基因合成，设计引物PCR扩增后，分别连接进表达载体，构建7个重组表达质粒；步骤2、将构建好的重组质粒分别转化进入表达菌，构建7个重组表达工程菌；步骤3、Lrp4-26、Lrp4-266、Lrp4-431、Lrp4-598、Lrp4-805、Lrp4-1041、Lrp4-1381的抗原片段的诱导表达及纯化。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1中所述7个片段的引物对分别为：Lrp4-26-P1：核苷酸序列如SEQIDNO.8所示；Lrp4-26-P2：核苷酸序列如SEQIDNO.9所示；Lrp4-266-P1：核苷酸序列如SEQIDNO.10所示；Lrp4-266-P2：核苷酸序列如SEQIDNO.11所示；Lrp4-431-P1：核苷酸序列如SEQIDNO.12所示；Lrp4-431-P2：核苷酸序列如SEQIDNO.13所示；Lrp4-598-P1：核苷酸序列如SEQIDNO.14所示；Lrp4-598-P2：核苷酸序列如SEQIDNO.15所示；Lrp4-805-P1：核苷酸序列如SEQIDNO.16所示；Lrp4-805-P2：核苷酸序列如SEQIDNO.17所示；Lrp4-1041-P1：核苷酸序列如SEQIDNO.18所示；Lrp4-1041-P2：核苷酸序列如SEQIDNO.19所示；Lrp4-1381-P1：核苷酸序列如SEQIDNO.20所示；Lrp4-1381-P2：核苷酸序列如SEQIDNO.21所示。4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1中PCR扩增的反应体系为：H2O38.7ul；Buffer5ul；dNTP3ul；上引物1ul；下引物1ul；DNA1ul；TaqE0.3ul；扩增程序为：94度变性5min；94度变性45sec、57度150sec、...

【专利技术属性】
技术研发人员：王颖，张崇珍，郝洪军，
申请(专利权)人：武汉明德生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42