一种引导组织修复的复合膜及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物医用材料领域，具体涉及一种引导组织修复的复合膜及其制备方法和应用。本发明专利技术提供的引导组织修复的复合膜包括一层由壳聚糖和聚乙二醇制成的起保护作用的防护层和一层由透明质酸、海藻酸钠、精氨酸‑甘氨酸‑天冬氨酸序列、纳米微球制成的引导组织细胞生长的组织修复层。本发明专利技术提供的防护层降解时间适宜，能有效保护其下方的组织修复层，并且含有壳聚糖和壳寡糖成分，可以很好地阻挡外界细菌侵扰；同时本发明专利技术含有的组织修复层能持续释放细胞因子，引导细胞向组织修复层生长，并且含有精氨酸‑甘氨酸‑天冬氨酸序列，能增加细胞的粘附，进而加速损伤组织的修复。

A Composite Membrane for Guiding Tissue Repair and Its Preparation Method and Application

The invention belongs to the field of biomedical materials, in particular to a composite film guiding tissue repair, a preparation method and application thereof. The composite membrane for guiding tissue repair provided by the invention comprises a protective layer made of chitosan and polyethylene glycol and a tissue repair layer made of hyaluronic acid, sodium alginate, arginine glycine aspartic acid sequence and nano-microspheres for guiding tissue cell growth. The protective layer provided by the invention has suitable degradation time, can effectively protect the tissue repair layer underneath it, and contains chitosan and chitosan oligosaccharide components, which can well prevent external bacterial invasion; meanwhile, the tissue repair layer contained in the invention can continuously release cytokines, guide cells to grow to the tissue repair layer, and contains arginine glycine aspartate sequence, and can increase. Adherence of cells accelerates the repair of damaged tissues.

【技术实现步骤摘要】
一种引导组织修复的复合膜及其制备方法和应用
本专利技术属于生物医用材料领域，具体涉及一种引导组织修复的复合膜及其制备方法和应用。
技术介绍
引导组织再生技术的雏形始于70年代末80年代初，研究者将引导组织再生技术应用于即刻牙种植，用其引导种植体周围骨再生，取得了理想的骨再生效果。现在，引导组织再生技术已被广泛应用在牙槽外科、牙周科和口腔种植、骨科等领域。目前临床可用的引导组织再生膜品种很多，按照是否可被吸收而分为两大类：可吸收膜和不可吸收膜；不可吸收膜在使用时必需二次手术取出，给病人带来极大痛苦，并且因其无生物活性，不能用于较大缺损面积的组织再生，限制了在临床使用的范围。可吸收性降解膜植入体内后不需取出，减少了患者的痛苦和手术难度，因此得到较广泛的应用。但是目前的再生膜虽然有优良的生物性能，但是细胞在组织修复的过程中不易在材料中粘附生长，其修复速度较慢，使得再生膜在应用过程中还未完成细胞的生长就已经降解，不能很好的起到修复功能。中国专利申请CN104474589A公开了一种引导组织再生膜，该膜为双层膜结构，其特征在于：一层为由降解时间较长的生物纤维制得的致密层，另一层为由降解时间不同的生物纤维混合制得的潜在疏松层。潜在疏松层植入体内后，部分生物纤维快速降解，使该膜的孔径增大，利于细胞的长入。致密层与潜在疏松层通过同一种降解时间较长的生物纤维相连接，确保双层膜不会出现分裂断层。本专利技术同时公开了引导组织再生膜的制备方法，以及作为组织修复制品在组织修复中的应用。该专利技术提供的组织再生膜可以抵御一定的外界细菌、可以解决胶原膜机械性能差易塌陷、体内降解过快的技术缺陷，但是该专利技术抵御细菌的效果不够理想，并且虽然能给细胞提供一定的生长环境，但细胞粘附状况不好。中国专利申请CN106110407A公开了一种引导性组织再生复合膜材料，其特征在于，其为双层膜结构，所述的双层膜结构包括底层的疏松层及上层的致密层。该专利技术第二方面提供了上述引导性组织再生复合膜材料的制备方法，该专利技术利用三维打印机打印可定制规格的具有组织整合活性、促进成骨细胞生长的生物膜材料，并结合静电纺丝技术制备具有促进牙周膜细胞粘附和骨膜细胞粘附的材料并结合兼具抗菌活性的药物，具有良好的生物相容性、骨修复和抗菌功能，可用于牙周引导性组织再生的治疗和骨膜缺损修复。但是该专利技术提供的再生复合膜不能很好的使细胞粘附，细胞本身在三维环境中的生长就叫慢，容易造成细胞的脱落死亡。目前现有的组织再生膜虽然能起到组织再生作用，但是其在生过程缓慢，不能很好地满足机体修复的需求，且由于组织的修复由细胞来完成，若细胞不能很好的在材料中粘附生长，则组织的再生过程将很难进行。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种引导组织修复的复合膜及其制备方法和应用。本专利技术提供的引导组织修复的复合膜能够有效防止外界细菌的侵入，并且防护层降解时间较慢，能起到长效保护作用；组织修复层能持续释放细胞因子，诱导细胞向组织内的迁移，并且还为细胞提供了适宜生长的环境和粘附位点，将加速组织的修复和再生。本专利技术的技术方案是：一种引导组织修复的复合膜，包括一层由壳聚糖和聚乙二醇制成的起保护作用的防护层和一层由透明质酸、海藻酸钠、精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列、纳米微球制成的引导组织细胞生长的组织修复层。进一步地，所述聚乙二醇的分子量为6000Da。本专利技术的另一目的在于提供一种引导组织修复的复合膜的制备方法，包括以下步骤：S1将壳聚糖溶于质量百分数为0.1％-3％的乙酸水溶液，得壳聚糖溶液，将聚乙二醇溶于去离子水，得聚乙二醇溶液，将所得壳聚糖溶液和聚乙二醇溶液混合搅拌24-30小时，得防护液；S2将壳寡糖溶于去离子水中，得浓度为1.5-1.75mg/mL的壳寡糖溶液；S3将肝素加到步骤S2所得壳寡糖溶液中，得混合液A；S4向步骤S3所得混合液A中边超声边滴加血小板衍生生长因子，离心，得纳米微球；S5分别将透明质酸和海藻酸钠溶于去离子水中，得透明质酸溶液和海藻酸钠溶液，将两种溶液混合得混合液B；S6将步骤S5所得混合液B中加入步骤S4所得纳米微球搅拌2-4分钟，冷冻干燥，得冻干粉A；S7将步骤S6所得冻干粉A加到质量百分数为5％-9％精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列溶液中浸泡20-30min，冻干，挤压成厚度为0.1-0.3mm的薄片，得组织修复层；S8将步骤S1所得防护液经静电纺丝技术喷涂于步骤S7所得组织修复层上，即得。进一步地，所述步骤S1所述壳聚糖溶液的质量百分数为1％-3％，所述聚乙二醇溶液的质量百分数为22％-32％，其中壳聚糖溶液和聚乙二醇溶液的体积比为4：3-9。进一步地，所述步骤S3所述肝素和壳寡糖的质量比为3-5：6。进一步地，所述步骤S4所述所述血小板衍生生长因子的浓度为50-60μg/mL，溶剂为磷酸缓冲盐溶液，超声时超声频率为600-800w，超声时间为8-15分钟；离心时离心转速为8000-12000r/min，离心时间为4-6min。进一步地，所述步骤S5所述透明质酸溶液的质量百分数为4％-7％，所述海藻酸钠溶液的质量百分数为3％-5％，其中透明质酸溶液和海藻酸钠溶液的体积比为5：2-4。进一步地，所述步骤S6所述冷冻干燥条件为在-45℃--35℃、真空度为8-10Pa下冷冻干燥7-9h。进一步地，所述步骤S8所述组织修复层和防护液的质量体积比为1-3：11。本专利技术的再一目的在于所述的一种引导组织修复的复合膜的制备方法制得的引导组织修复的复合膜在制备皮肤损伤的材料中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有以下优势：(1)本专利技术的防护层含有壳聚糖，具有抗菌效果，将其与聚乙二醇联合使用后可以降低壳聚糖降解速度，提高防护层的保护效果。(2)本专利技术的组织修复层降解速度比防护层快，能有利于细胞的生长，加快组织的修复。(3)本专利技术的组织修复层含有纳米颗粒，纳米颗粒在持续释放因子的过程中可以引导细胞向膜内生长，同时精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列为细胞提供粘附位点，将有利于细胞的粘附生长，从而加速组织的修复。(4)本专利技术中的细胞因子为血小板衍生生长因子，该因子的加入能让细胞在迁移的同时促进受损组织处微血管的形成，从而为细胞提供更多养分，加快组织修复。(5)本专利技术中防护层和组织修复层通过壳聚糖和海藻酸钠间的离子键连接，在降解的过程中不断有新的离子键形成，因此不会造成脱落。具体实施方式以下通过具体实施方式的描述对本专利技术作进一步说明，但这并非是对本专利技术的限制，本领域技术人员根据本专利技术的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本专利技术的基本思想，均在本专利技术的范围之内。实施例1一种引导组织修复的复合膜一种引导组织修复的复合膜，包括一层由壳聚糖和聚乙二醇制成的起保护作用的防护层和一层由透明质酸、海藻酸钠、精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列、纳米微球制成的引导组织细胞生长的组织修复层。所述聚乙二醇的分子量为4000Da。所述引导组织修复的复合膜的制备方法，包括以下步骤：S1将10mg壳聚糖溶于质量百分数为1％的乙酸水溶液，得质量百分数为1％的壳聚糖溶液，将220mg聚乙二醇溶于去离子水，得质量百分数为22％的聚乙二醇溶液，将所得壳聚糖溶液和聚乙二醇溶液混合搅拌24小时，得防护液，其中壳聚糖溶液和聚乙二醇溶液的体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种引导组织修复的复合膜，其特征在于，包括一层由壳聚糖和聚乙二醇制成的起保护作用的防护层和一层由透明质酸、海藻酸钠、精氨酸‑甘氨酸‑天冬氨酸序列、纳米微球制成的引导组织细胞生长的组织修复层。

【技术特征摘要】
1.一种引导组织修复的复合膜，其特征在于，包括一层由壳聚糖和聚乙二醇制成的起保护作用的防护层和一层由透明质酸、海藻酸钠、精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列、纳米微球制成的引导组织细胞生长的组织修复层。2.根据权利要求1所述的一种引导组织修复的复合膜，其特征在于，所述聚乙二醇的分子量为4000-8000Da。3.根据权利要求1所述的一种引导组织修复的复合膜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1将壳聚糖溶于质量百分数为1％的乙酸水溶液，得壳聚糖溶液，将聚乙二醇溶于去离子水，得聚乙二醇溶液，将所得壳聚糖溶液和聚乙二醇溶液混合搅拌24-30小时，得防护液；S2将壳寡糖溶于去离子水中，得浓度为1.5-1.75mg/mL的壳寡糖溶液；S3将肝素加到步骤S2所得壳寡糖溶液中，得混合液A；S4向步骤S3所得混合液A中边超声边滴加血小板衍生生长因子，离心，得纳米微球；S5分别将透明质酸和海藻酸钠溶于去离子水中，得透明质酸溶液和海藻酸钠溶液，将两种溶液混合得混合液B；S6向步骤S5所得混合液B中加入步骤S4所得纳米微球搅拌2-4分钟，冷冻干燥，得冻干粉A；S7将步骤S6所得冻干粉A加到质量百分数为5％-9％精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列溶液中浸泡20-30min，冻干，挤压成厚度为0.1-0.3mm的薄片，得组织修复层；S8将步骤S1所得防护液经静电纺丝技术喷涂于步骤S7所得组织修复层上，即得。4.根据权利要求3所述的一种引导组织修复的复...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘少辉，车七石，李新霞，
申请(专利权)人：广州润虹医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44