一种基于磁珠法的无醇病毒核酸提取试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种基于磁珠法的无醇病毒核酸提取试剂盒，含有裂解液；磁珠溶液；蛋白酶K；polyA溶液；去蛋白液；洗涤液；缓冲液。本发明专利技术还提供了采用上述的试剂盒提取核酸的方法，先加入样本、裂解液和磁珠进行混匀，然后边裂解边捕获核酸分子，最后分别采用特有的无醇去蛋白液和洗涤液洗涤去除磁珠表面的蛋白质和盐离子等杂质。与常规的病毒核酸提取方法相比较，操作步骤简单，不需要单独加入结合液，实现了裂解和结合同时进行，DNA和RNA共提；整个操作过程中不加入乙醇或异丙醇，抑制物质残留少，实验步骤简便，整个流程下来仅需要40min左右；安全无污染，无氯仿苯酚等有毒试剂，既可以手工操作也可以用于自动化平台。

An Alcohol-Free Virus Nucleic Acid Extraction Kit Based on Magnetic Bead Method

The invention provides an alcohol-free virus nucleic acid extraction kit based on magnetic bead method, which contains pyrolysis solution, magnetic bead solution, protease K, polyA solution, deproteinized solution, detergent and buffer. The invention also provides a method for extracting nucleic acid by using the above kit. Samples, pyrolysis liquor and magnetic beads are added to mix, nucleic acid molecules are captured while pyrolysis is carried out, and protein and salt ion impurities on the surface of magnetic beads are removed by washing with specific alcohol-free deproteinizing liquor and washing liquor, respectively. Compared with the conventional method of virus nucleic acid extraction, the procedure is simple, and it does not need to add the binding solution alone, so that DNA and RNA can be extracted together when splitting and concluding contracts are realized; ethanol or isopropanol is not added in the whole operation process, and the inhibiting substance residues are less, the experimental procedure is simple, and the whole process only takes about 40 minutes; it is safe, pollution-free, and free of toxic reagents such as chloroform phenol. It can be operated manually or on an automated platform.

【技术实现步骤摘要】
一种基于磁珠法的无醇病毒核酸提取试剂盒
本专利技术属于生物工程领域涉及一种检测试剂盒，具体来说是一种基于磁珠法的无醇病毒核酸提取试剂盒。
技术介绍
病毒的结构相对简单，由外面的衣壳蛋白和内部的核酸物质组成，根据核酸物质可以将病毒分为DNA病毒或RNA病毒。随着分子生物学的发展，对疾病相关病毒进行检测和分型是分子检测的一个重要应用领域，而从生物材料中高效、简便的提取和纯化目的核酸是分子检测的关键技术。目前病毒核酸纯化技术主要分为三种，分别为传统法、柱膜法和磁珠法。传统的核酸纯化主要是利用变性剂和表面活性剂进行裂解，释放出核酸后用苯酚、氯仿进行抽提去除蛋白等杂质，然后用乙醇或异丙醇进行沉淀，去除上清后获得核酸沉淀，然后用TB或TE缓冲液进行溶解。该方法步骤繁琐，重复性差，耗时较长，并且使用了有剂试剂。煮沸法也是传统的病毒核酸提取方法之一，但是该方法提取的核酸纯度较低，对检测的灵敏度影响较大。柱膜法是用硅胶膜对核酸进行吸附和纯化，主要是用变性剂和表面活性剂裂解细胞，释放核酸分子，在低pH值、高盐以及醇的条件下结合核酸分子，然后用含有胍盐的乙醇溶液洗涤去除蛋白等杂质，用70％或80％的乙醇溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于磁珠法无醇病毒核酸提取试剂盒，其特征在于包括如下试剂：裂解液，所述的裂解液中含有浓度为25‑75 mM的Tris‑HCL，所述的Tris‑HCL的pH为8.0，浓度3‑5 M的异硫氰酸胍，质量百分比浓度为5‑15%的聚多卡醇，质量百分比浓度为5‑15% 的PEG6000；磁珠溶液，所述的磁珠溶液的浓度为50‑100mg/mL，所述的磁珠为硅羟基或羧基修饰的磁珠；蛋白酶K，所述的蛋白酶K的浓度为50‑100 mg/mL；polyA溶液，所述的polyA的浓度为10‑50 mM；去蛋白液，所述的去蛋白液中含有浓度为1‑3M 的异硫氰酸胍，浓度为的10‑20 mM Tris‑HCL，所述...

【技术特征摘要】
1.一种基于磁珠法无醇病毒核酸提取试剂盒，其特征在于包括如下试剂：裂解液，所述的裂解液中含有浓度为25-75mM的Tris-HCL，所述的Tris-HCL的pH为8.0，浓度3-5M的异硫氰酸胍，质量百分比浓度为5-15%的聚多卡醇，质量百分比浓度为5-15%的PEG6000；磁珠溶液，所述的磁珠溶液的浓度为50-100mg/mL，所述的磁珠为硅羟基或羧基修饰的磁珠；蛋白酶K，所述的蛋白酶K的浓度为50-100mg/mL；polyA溶液，所述的polyA的浓度为10-50mM；去蛋白液，所述的去蛋白液中含有浓度为1-3M的异硫氰酸胍，浓度为的10-20mMTris-HCL，所述的Tris-HCL的pH为8.0-9.0，质量百分比浓度为5-10%的PEG6000；洗涤液，所述的洗涤液中含有浓度为10-50mM的Tris-HCL，所述的Tris-HCL的pH为8.0-9.0，质量百分比浓度为5-10%的PEG6000，浓度为200-300mM的Nacl；缓冲液，所述的缓冲液为浓度为10-20mM的Tris-HCL，所述的Tris-HCL的pH为pH8.0-9.0。2.采用权利要求1所述的试剂盒提...

【专利技术属性】
技术研发人员：王金辉，方琴，张健，蒋淼，
申请(专利权)人：上海科华生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31