一种从婴儿粪便中分离乳糖酶的方法技术

本发明专利技术公开了一种从婴儿粪便中分离乳糖酶的方法，步骤是溶解粪便样品、收集可溶性蛋白质；加入硫酸铵，冰浴，离心，去除漂浮物，收集液体；再加入氯仿抽提与蛋白质络合的油脂，利用高速离心收集沉淀；再加入磷酸盐缓冲液溶解沉淀并透析获得产物命名为粗酶液I；粗酶液I经过冷冻干燥、磷酸盐缓冲液溶解后得粗酶液II；粗酶液II经过阴离子交换色谱和凝胶过滤层析纯化，即获得初步纯化的乳糖酶。本发明专利技术方法易操作、目标产物得率高，有利于后续新型乳糖酶的质谱鉴定，酶产物可应用于食品生产领域。

A Method for Separating Lactase from Infant Feces

The invention discloses a method for separating lactase from infant excrement, which consists of dissolving excrement samples and collecting soluble proteins; adding ammonium sulfate, ice bath, centrifugation, removing floating matter and collecting liquids; adding chloroform to extract oil complexed with protein, collecting precipitation by high-speed centrifugation; and adding phosphate buffer solution to dissolve precipitation and dialysis to obtain the product name. Crude enzyme I; crude enzyme I after freeze drying, phosphate buffer solution dissolved crude enzyme II; crude enzyme II purification by anion exchange chromatography and gel filtration chromatography, that is, the initial purification of lactase. The method is easy to operate and the yield of the target product is high, which is conducive to the mass spectrometric identification of subsequent new lactase, and the enzyme product can be applied in the field of food production.

【技术实现步骤摘要】
一种从婴儿粪便中分离乳糖酶的方法
本专利技术涉及一种从复杂组分中分离酶蛋白的方法，尤其涉及一种从婴儿粪便中分离乳糖酶的方法，属于生物

技术介绍
乳糖酶(Lactase)即β-D-半乳糖苷酶(E.C.3.2.1.23,β-D-galactosidase)，可以水解乳糖产生葡萄糖和半乳糖被人或动物利用。当缺少乳糖酶或其酶活性差时，机体内的乳糖不能被水解和吸收，直接进入小肠下段和结肠，在肠道菌群的作用下产生短链脂肪酸、氢气、甲烷和二氧化碳，出现腹胀、腹痛和腹泻等临床症状，称为乳糖不耐症。在新生儿和婴儿时期，母乳或配方奶粉是婴儿的主要食物，其中含有大量乳糖；在这一时期，由于乳糖酶缺少所引起的腹泻最为常见，对婴儿的生长非常不利，因此临床上推荐食用乳糖酶制剂，用以缓解该症状。此外，乳糖酶还具有合成活性，可将半乳糖转变为低聚半乳糖，有助于婴儿建立健康的肠道菌群，还能够促进婴儿体内钙的吸收。乳糖酶多来源于微生物，包括细菌、霉菌和放线菌等，其中细菌占绝大多数，如乳杆菌(Lactobacillus)、双歧杆菌(Bifidobacterium)、芽孢杆菌(Bacillus)、大肠杆菌(Esche本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从婴儿粪便中分离乳糖酶的方法，以如下比例量、条件和步骤实施：(1)取新鲜婴儿粪便样品10g，加入100mL预冷的无菌水，在冰浴环境下间歇搅拌20min，使样品中的蛋白质充分溶解在无菌水中，得到混悬液；(2)将混悬液加入50mL离心管中，6000±500rpm/min离心5±2min，小心收集上清液；离心管中剩余的膏状物再次9000±500rpm/min离心5±2min，小心收集上清液；离心管中剩余的膏状物再次12000±500rpm/min离心5±2min，小心收集上清液；将三次收集的上清液混合，得到总上清液；(3)向步骤(2)中的总上清液中加入硫酸铵，去除液体表面的漂浮物，收集剩余液...

【技术特征摘要】
1.一种从婴儿粪便中分离乳糖酶的方法，以如下比例量、条件和步骤实施：(1)取新鲜婴儿粪便样品10g，加入100mL预冷的无菌水，在冰浴环境下间歇搅拌20min，使样品中的蛋白质充分溶解在无菌水中，得到混悬液；(2)将混悬液加入50mL离心管中，6000±500rpm/min离心5±2min，小心收集上清液；离心管中剩余的膏状物再次9000±500rpm/min离心5±2min，小心收集上清液；离心管中剩余的膏状物再次12000±500rpm/min离心5±2min，小心收集上清液；将三次收集的上清液混合，得到总上清液；(3)向步骤(2)中的总上清液中加入硫酸铵，去除液体表面的漂浮物，收集剩余液体；(4)向步骤(3)中收集的剩余液体中加入氯仿，去除油脂，收集沉淀物；(5)向步骤(4)的沉淀物中加入50mL、100mM、pH7.0的磷酸盐缓冲液，在冰浴环境中至沉淀完全溶解，然后用孔径为30kDa的透析袋过夜透析，产物命名为粗酶液I，透析液为100mM、pH7.0的磷酸盐缓冲液；(6)粗酶液I经过冷冻干燥后，加入2mL、100mM、pH7.0的磷酸盐缓冲液即制得粗酶液II；(7)粗酶液II经过阴离子交换色谱和凝胶过滤层析纯化，即获得初步纯化的乳糖酶；其特征在于，步骤(3)所述向步骤(2)中的总上清液中加入硫酸铵，去除液体表面的漂浮物，收集剩余液体的方法是：向步骤(2)中的总上清液中加入质量浓度为80...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔健，郭婷婷，辛永平，张奕，顾心怡，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东,37