一种纳豆激酶和纳豆抗菌肽混合制剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种纳豆激酶和纳豆抗菌肽混合制剂的制备方法，属于生物医药技术领域，所述方法包括以下步骤：1)将纳豆和水混合，进行研磨，过滤，得到研磨滤液；2)在研磨滤液中加入固体硫酸铵，静置，取第一上清液，灭菌，得到纳豆抗菌肽溶液；3)将纳豆和磷酸盐缓冲液混合，进行研磨，得到的研磨物和磷酸盐缓冲液混合，浸提，离心，取第二上清液；4)在第二上清液中加入硫酸铵水溶液进行混合，静置，离心，取沉淀物，得到纳豆激酶；5)将纳豆抗菌肽溶液与纳豆激酶进行混合，过滤除菌，调节pH值至7.0，得到纳豆激酶和纳豆抗菌肽的混合制剂。本发明专利技术制备获得的混合制剂具有抑制细菌、提高机体免疫力以及提高兽用疫苗的免疫效果的作用。

A mixed preparation of Nattokinase and natto antimicrobial peptide and its preparation method and Application

The invention provides a preparation method of mixed preparation of Nattokinase and natto antimicrobial peptide, which belongs to the field of biomedical technology. The method comprises the following steps: 1) mixing natto and water, grinding, filtering, and obtaining grinding filtrate; 2) adding solid ammonium sulfate into grinding filtrate, stationary, taking the first supernatant, sterilizing, and obtaining natto antimicrobial peptide solution; 3) grinding natto and water to obtain grinding filtrate; The second supernatant is obtained by mixing the abrasive and phosphate buffer, extracting, centrifuging, and taking the second supernatant; 4) adding ammonium sulfate aqueous solution to the second supernatant for mixing, standing, centrifuging, and taking sediment to get nattokinase; 5) mixing the natto antimicrobial peptide solution with nattokinase, filtering and sterilizing, adjusting the pH value to 7.0, to get natto nattokinase. Mixed preparation of kinase and natto antimicrobial peptide. The mixed preparation prepared by the invention has the functions of inhibiting bacteria, improving body immunity and improving the immune effect of veterinary vaccine.

【技术实现步骤摘要】
一种纳豆激酶和纳豆抗菌肽混合制剂及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种纳豆激酶和纳豆抗菌肽混合制剂及其制备方法和应用。
技术介绍
纳豆由黄豆通过纳豆菌(枯草杆菌)发酵制成豆制品，具有黏性，气味较臭，味道微甜，不仅保有黄豆的营养价值、富含维生素K2、提高蛋白质的消化吸收率，更重要的是发酵过程产生了多种生理活性物质，具有溶解体内纤维蛋白及其他调节生理机能的保健作用。纳豆提取物，指的是从纳豆中提取出的有效物质，包括纳豆激酶、纳豆异黄酮、皂青素和维生素K2等；其中皂青素，能改善便秘，降低血脂，预防大肠癌、降低胆固醇、软化血管、预防高血压和动脉硬化，抑制艾滋病病毒等功能；纳豆异黄酮可清除体内致癌物质、提高记忆力、护肝美容、延缓衰老等有明显效果，并可提高食物的消化率；纳豆激酶具有溶解血栓，降低血粘度，改善血液循环，软化和增加血管弹性等作用。但是，现有技术中对纳豆提取物的开发通常是对纳豆提取物中单一成分的提取与利用，而缺少对纳豆提取物的综合利用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种纳豆激酶和纳豆抗菌肽混合制剂及其制备方法和应用，该混合制剂能够提高兽用疫苗的免疫效果。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种纳豆激酶和纳豆抗菌肽混合制剂的制备方法，包括以下步骤：1)将纳豆和水混合，进行研磨，过滤，得到研磨滤液；2)在步骤1)所述研磨滤液中加入固体硫酸铵，静置，取第一上清液，灭菌，得到纳豆抗菌肽溶液；3)将纳豆和磷酸盐缓冲液混合，进行研磨，得到的研磨物和磷酸盐缓冲液混合，浸提，离心，取第二上清液；4)在步骤3)所述第二上清液中加入硫酸铵水溶液进行混合，静置，离心，取沉淀物，得到纳豆激酶；5)将步骤2)所述纳豆抗菌肽溶液与步骤4)所述纳豆激酶进行混合，过滤除菌，调节pH值至7.0，得到纳豆激酶和纳豆抗菌肽的混合制剂；所述步骤1)～2)和步骤3)～4)之间没有时间顺序限制。优选的，步骤1)所述纳豆和水的质量比为1～3:1。优选的，步骤3)中所述研磨的温度为1～5℃。优选的，步骤3)中所述磷酸盐缓冲液的温度为1～5℃；所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.5～8.0。本专利技术还提供了上述方案所述制备方法制备得到的纳豆激酶和纳豆抗菌肽混合制剂。本专利技术还提供了上述方案所述混合制剂在制备提高机体免疫力的药物中的应用。本专利技术还提供了上述方案所述混合制剂在抑制细菌中的应用。本专利技术还提供了上述方案所述混合制剂作为疫苗增强剂的应用。优选的，所述疫苗为禽类疫苗或畜类疫苗。优选的，所述混合制剂与畜类疫苗的比例为2～5mL:1～3头份；所述混合制剂与禽类疫苗的比例为0.1～1mL:1～3羽份。本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一种纳豆激酶和纳豆抗菌肽混合制剂的制备方法，该方法制备获得的纳豆激酶和纳豆抗菌肽混合制剂具有抑制细菌、提高机体免疫力以及提高兽用疫苗的免疫效果的作用。经过实验验证，本专利技术制备获得的纳豆激酶和纳豆抗菌肽的混合制剂对大肠杆菌、沙门氏菌抑菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌都具有抑菌效果，并且与庆大霉素相比，在抑制大肠杆菌和沙门氏菌的试验中抑菌效果相当。并且，本专利技术的纳豆激酶和纳豆抗菌肽的混合制剂，使用安全且有利于增强猪圆环病毒灭活疫苗和鸡大肠杆菌病灭活疫苗的免疫效果。具体实施方式本专利技术提供了一种纳豆激酶和纳豆抗菌肽混合制剂的制备方法，包括以下步骤：1)将纳豆和水混合，进行研磨，过滤，得到研磨滤液；2)在步骤1)所述研磨滤液中加入固体硫酸铵，静置，取第一上清液，灭菌，得到纳豆抗菌肽溶液；3)将纳豆和磷酸盐缓冲液混合，进行研磨，得到的研磨物和磷酸盐缓冲液混合，浸提，离心，取第二上清液；4)在步骤3)所述第二上清液中加入硫酸铵水溶液进行混合，静置，离心，取沉淀物，得到纳豆激酶；5)将步骤2)所述纳豆抗菌肽溶液与步骤4)所述纳豆激酶进行混合，过滤除菌，调节pH值至7.0，得到纳豆激酶和纳豆抗菌肽的混合制剂；所述步骤1)～2)和步骤3)～4)之间没有时间顺序限制。本专利技术将纳豆和水混合，进行研磨，过滤，得到研磨滤液；所述纳豆和水的质量比优选为1～3:1，更优选为2:1；所述研磨的时间优选为5～10min；本专利技术对所述研磨的温度没有特殊限制；所述研磨的设备优选为匀浆器或组织研磨仪；所述匀浆器优选为玻璃匀浆器，更优选为50mL玻璃匀浆器。本专利技术中，所述过滤优选为采用纱布过滤；所述纱布的滤孔孔径优选为0.4～0.5μm，更优选为0.45μm；所述纱布的层数优选为4～6层，更优选为5层。本专利技术在过滤后，优选的还包括将过滤得到的滤渣和水混合，浸提，过滤，得到浸提滤液后与上述方案所述研磨滤液合并，得到合并滤液；所述滤渣和水的质量比优选为1～3:1，更优选为2:1；所述浸提的温度优选为1～5℃，更优选为4℃；所述浸提的时间优选为0.5～1.5h，更优选为1h。得到合并滤液后，本专利技术在所述合并滤液中加入固体硫酸铵，静置，取第一上清液，灭菌，得到纳豆抗菌肽溶液；所述固体硫酸铵的加入量优选为使合并滤液中硫酸铵的饱和度达到60％～65％；所述静置的时间优选为12～18h，更优选为14～16h；所述静置的温度优选为1℃～5℃，更优选为4℃；所述灭菌的方式优选为高压灭菌和/或过滤除菌；所述高压灭菌的温度优选为115～121℃；所述高压灭菌的时间优选为15～20min；所述过滤除菌的滤膜孔径优选为0.1μm或0.22μm。本专利技术在得到第一上清液后，优选的还包括在第一上清液中加入固体硫酸铵，静置，再次取上清液，灭菌；所述固体硫酸铵的加入量优选为使第一上清液中硫酸铵的饱和度达到60％～65％。本专利技术将纳豆和磷酸盐缓冲液混合，进行研磨，得到的研磨物和磷酸盐缓冲液混合，浸提，离心，取第二上清液；所述磷酸盐缓冲液的pH值优选为7.5～8.0，更优选为7.8；所述磷酸盐缓冲液的温度优选为1～5℃，更优选为4℃。本专利技术中，所述磷酸盐缓冲液优选的由以下方法制备获得：将磷酸氢二钾5.59g，磷酸二氢钾0.41g溶于1000mL纯化水，依次过滤除菌，高压灭菌；本专利技术对所述过滤除菌和高压灭菌的参数没有特殊限制，采用本领域常规方法即可。本专利技术中，所述纳豆和磷酸盐缓冲液质量比优选为1～3:1，更优选为2:1；所述研磨的温度优选为1～5℃，更优选为4℃；所述研磨的时间优选为5～10min，更优选为8min；所述研磨的设备优选为研钵或组织研磨仪；所述研钵或组织研磨仪优选的预冷至4℃；本专利技术中设置研磨的温度为1～5℃的作用是避免酶失活。本专利技术中，所述研磨物和磷酸盐缓冲液的体积比优选为0.5～1.5:2，更优选为1:2；所述浸提的温度优选为1～5℃，更优选为4℃；所述浸提的时间优选为9～16h，更优选为12～14h；所述离心的转速优选为4000～6000r/min，更优选为5000r/min；所述离心的时间优选为5～10min。得到第二上清液后，本专利技术在第二上清液中加入硫酸铵水溶液进行混合，静置，离心，取沉淀物，得到纳豆激酶；所述硫酸铵水溶液中硫酸铵的饱和度优选为57％～63％，更优先为60％；所述加入硫酸铵水溶液的过程优选的伴随搅拌；所述静置的时间优选为1～5℃，更优选为4℃；所述静置的时间优选为9～16h，更优选为12～14h；所述离心的转速优选为4000～60本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种纳豆激酶和纳豆抗菌肽混合制剂的制备方法，包括以下步骤：1)将纳豆和水混合，进行研磨，过滤，得到研磨滤液；2)在步骤1)所述研磨滤液中加入固体硫酸铵，静置，取第一上清液，灭菌，得到纳豆抗菌肽溶液；3)将纳豆和磷酸盐缓冲液混合，进行研磨，得到的研磨物和磷酸盐缓冲液混合，浸提，离心，取第二上清液；4)在步骤3)所述第二上清液中加入硫酸铵水溶液进行混合，静置，离心，取沉淀物，得到纳豆激酶；5)将步骤2)所述纳豆抗菌肽溶液与步骤4)所述纳豆激酶进行混合，过滤除菌，调节pH值至7.0，得到纳豆激酶和纳豆抗菌肽的混合制剂；所述步骤1)～2)和步骤3)～4)之间没有时间顺序限制。

【技术特征摘要】
1.一种纳豆激酶和纳豆抗菌肽混合制剂的制备方法，包括以下步骤：1)将纳豆和水混合，进行研磨，过滤，得到研磨滤液；2)在步骤1)所述研磨滤液中加入固体硫酸铵，静置，取第一上清液，灭菌，得到纳豆抗菌肽溶液；3)将纳豆和磷酸盐缓冲液混合，进行研磨，得到的研磨物和磷酸盐缓冲液混合，浸提，离心，取第二上清液；4)在步骤3)所述第二上清液中加入硫酸铵水溶液进行混合，静置，离心，取沉淀物，得到纳豆激酶；5)将步骤2)所述纳豆抗菌肽溶液与步骤4)所述纳豆激酶进行混合，过滤除菌，调节pH值至7.0，得到纳豆激酶和纳豆抗菌肽的混合制剂；所述步骤1)～2)和步骤3)～4)之间没有时间顺序限制。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述纳豆和水的质量比为1～3:1。3.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖隆永，刘小龙，谭礼宁，叶盛聪，邱灵姗，刘楚楚，陈盛勇，徐磊，刘友霖，
申请(专利权)人：派生特福州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35