利用卵黄制备去除过敏成分的精制蜂毒的方法及通过所述方法制备的去除过敏成分的精制蜂毒技术

本发明专利技术涉及制备去除过敏成分的精制蜂毒的方法及通过所述方法制备的去除过敏成分的精制蜂毒，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)准备包含卵黄的缓冲溶液；(b)向所述步骤(a)中所准备的缓冲溶液中添加蜂毒后进行搅拌；(c)将所述步骤(b)的经过搅拌的反应物进行冷却的同时，加入经过冷却的乙醇，从而凝固反应物的蛋白质；(d)将所述步骤(c)的经过凝固的反应物进行离心分离，从而使凝固物沉淀；以及(e)取所述步骤(d)的凝固物沉淀的反应物中的上清液，并进行浓缩及干燥。

A method for preparing refined bee venom with egg yolk for removing allergic ingredients and a refined bee venom for removing allergic ingredients prepared by the said method

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】利用卵黄制备去除过敏成分的精制蜂毒的方法及通过所述方法制备的去除过敏成分的精制蜂毒
本专利技术涉及制备去除过敏成分的精制蜂毒的方法及通过所述方法制备的去除过敏成分的精制蜂毒，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)准备包含卵黄的缓冲溶液；(b)向所述步骤(a)中所准备的缓冲溶液中添加蜂毒后进行搅拌；(c)将所述步骤(b)的经过搅拌的反应物进行冷却的同时，加入经过冷却的乙醇，从而凝固反应物的蛋白质；(d)将所述步骤(c)的经过凝固的反应物进行离心分离，从而使凝固物沉淀；以及(e)取所述步骤(d)的凝固物沉淀的反应物中的上清液，并进行浓缩及干燥。
技术介绍
蜂毒是指蜜蜂所具有的毒，自古以来，蜂毒的医学上的治疗效果得到认证。根据最近的研究结果发现蜂毒除了具有诸如抗癌作用、缓解关节炎、缓解动脉硬化、缓解腰痛、治疗皮肤伤口、增强免疫的作用、抗炎症作用、降低血压并增加血液中的淋巴细胞及红血球的再生的医学功能之外，还具有改善皱纹、美白作用等以美容为目的的作用。观察蜂毒的主要组成成分及其药理功能如下述表1中所示。[表1]成分药理功能成分比(％)肽(蜂毒肽、蜂毒明肽)镇定作用、免疫作用50％左右蛋白质(磷脂酶A2)破坏细胞、过敏15％胺类(组胺)降低血压1～2％蜂毒包含肽、蛋白质及低分子活性胺等，由40种以上的物质组成，主要的有效成分如上述表中所示。蜂毒的组成中，蛋白质类是由具有13kDa以上的分子量的磷脂酶A2(PhospholipaseA2，PLA2)、透明质酸酶(Hyaluronidase)、磷酸酶(phosphatase)、α-葡萄糖苷酶(α-Glucosidase)等成分组成，主要具有破坏血液细胞膜、血液凝固、血管扩张及渗透、促进血液循环、促进蛋白质的水解等生理活性作用。尤其，磷脂酶和透明质酸酶为诱发强烈的过敏反应的蜂毒组成物质，对蜂毒具有过敏性的使用者而言，会引起非常严重的安全上的问题。因此，为了以治疗的目的使用蜂毒，可以说所述成分的失活或完全去除是必需的。据此，目前公知有从蜂毒中去除上述诱发过敏的物质的技术。例如，韩国授权专利第1382404号中记述了将蜂毒进行溶解以制备蜂毒溶液，并将该蜂毒溶液加入到乙二胺-N-丙基硅烷(primarysecondaryamine，PSA)吸附剂中制备混合物，之后将其进行精密过滤，从而大规模制备去除杂质的纯蜂毒的方法。此外，韩国授权专利第1364506号中公开了使用截留(cut-off)分子量的大小为10kDa以上的超滤膜来去除蜂毒中的磷脂酶，使精制蜂毒中含有4重量％以上的蜂毒明肽、50重量％以上的蜂毒肽的方法。此外，韩国授权专利第1608045号中公开了利用阳离子交换树脂来去除蜂毒中的磷脂酶，并只分离蜂毒肽的技术。但是，还完全没有如同本专利技术的利用卵黄制备去除过敏成分的精制蜂毒的方法。
技术实现思路
要解决的技术问题本专利技术是根据如上所述的需求而提出的，本专利技术的目的在于提供制备精制蜂毒的方法，所述方法能够在完好地保留诸如蜂毒肽及蜂毒明肽的蜂毒的有效成分的同时，能够有效地完全去除蜂毒的过敏成分磷脂酶A2及透明质酸酶。技术方案为了解决上述技术问题，本专利技术提供制备去除过敏成分的精制蜂毒的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)准备包含卵黄的缓冲溶液；(b)向所述步骤(a)中所准备的缓冲溶液中添加蜂毒后进行搅拌；(c)将所述步骤(b)的经过搅拌的反应物进行冷却的同时，加入经过冷却的乙醇，从而凝固反应物的蛋白质；(d)将所述步骤(c)的经过凝固的反应物进行离心分离，从而使凝固物沉淀；以及(e)取所述步骤(d)的凝固物沉淀的反应物中的上清液，并进行浓缩及干燥。此外，本专利技术提供去除过敏成分的精制蜂毒，其通过所述方法制备。有益效果通过本专利技术的方法制备的精制蜂毒完全去除诱导强烈的过敏反应的磷脂酶A2及透明质酸酶，从而能够制备从根本上对过敏反应安全的精制蜂毒，并且完好地保留包含在蜂毒中的有效成分，因此具有为了各种药理功能能够更加安心使用的优点。具体实施方式为了实现本专利技术的目的，本专利技术提供制备去除过敏成分的精制蜂毒的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)准备包含卵黄的缓冲溶液；(b)向所述步骤(a)中所准备的缓冲溶液中添加蜂毒后进行搅拌；(c)将所述步骤(b)的经过搅拌的反应物进行冷却的同时，加入经过冷却的乙醇，从而凝固反应物的蛋白质；(d)将所述步骤(c)的经过凝固的反应物进行离心分离，从而使凝固物沉淀；以及(e)取所述步骤(d)的凝固物沉淀的反应物中的上清液，并进行浓缩及干燥。本专利技术的制备精制蜂毒的方法中，所述过敏成分可以是磷脂酶A2(PhospholipaseA2)及透明质酸酶(Hyaluronidase)，但并不受限于此。此外，本专利技术的制备精制蜂毒的方法中，所述步骤(a)的卵黄为源自鸡蛋、鸭蛋、鹌鹑蛋等禽类蛋的生卵黄，可以使用将蛋进行割卵并分离为蛋清和卵黄而得到的卵黄。此外，本专利技术的制备精制蜂毒的方法中，所述步骤(a)的缓冲溶液优选可以是包含1～10％(w/v)的卵黄的pH为7～9的缓冲溶液，更优选可以是包含5％(w/v)的卵黄的pH为8的缓冲溶液。将卵黄溶解在缓冲溶液中时，卵黄蛋白质、卵黄卵磷脂、中性脂质及胆固醇等被卵黄卵磷脂乳化，从而形成以胶体状态存在的乳化悬浮液。此外，本专利技术的制备精制蜂毒的方法中，所述步骤(b)优选可以为向缓冲溶液中添加0.5～1.5％(w/v)的蜂毒，然后在30～50℃下搅拌5～20分钟，更优选可以为向缓冲溶液中添加1％(w/v)的蜂毒，然后在35℃下搅拌10分钟。以如上所述的条件向缓冲溶液中添加蜂毒后进行搅拌时，能够使蜂毒中所含有的诱发过敏的物质有效地结合于卵黄脂蛋白。此外，本专利技术的制备精制蜂毒的方法中，所述步骤(c)优选可以将经过搅拌的反应物进行冷却至-5～-15℃的同时，加入冷却至-10～-20℃的乙醇，从而凝固反应物的蛋白质，更优选可以将经过搅拌的反应物进行冷却至-10℃的同时，加入冷却至-15℃的乙醇，从而凝固反应物的蛋白质。如上所述，将结合有诱发过敏的物质的卵黄脂蛋白进行凝固时，能够进行离心分离以使凝固物沉淀，从而容易去除诱发过敏的物质。就本专利技术的制备精制蜂毒的方法而言，更具体地，可以包括以下步骤：(a)准备包含1～10％(w/v)的卵黄的pH为7～9的缓冲溶液；(b)向所述步骤(a)中所准备的缓冲溶液中添加0.5～1.5％(w/v)的蜂毒，然后在30～50℃下搅拌5～20分钟；(c)将所述步骤(b)的经过搅拌的反应物进行冷却至-5～-15℃的同时，加入冷却至-10～-20℃的乙醇，从而凝固反应物的蛋白质；(d)将所述步骤(c)的经过凝固的反应物进行离心分离，从而使凝固物沉淀；以及(e)取所述步骤(d)的凝固物沉淀的反应物中的上清液，并进行浓缩及干燥。更加具体地，可以包括以下步骤：(a)准备包含5％(w/v)的卵黄的pH为8的缓冲溶液；(b)向所述步骤(a)中所准备的缓冲溶液中添加1％(w/v)的蜂毒，然后在35℃下搅拌10分钟；(c)将所述步骤(b)的经过搅拌的反应物进行冷却至-10℃的同时，加入冷却至-15℃的乙醇，从而凝固反应物的蛋白质；(d)将所述步骤(c)的经过凝固的反应物进行离心分离，从而使凝固物沉淀；以及(e)取所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.制备去除过敏成分的精制蜂毒的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)准备包含卵黄的缓冲溶液；(b)向所述步骤(a)中所准备的缓冲溶液中添加蜂毒后进行搅拌；(c)将所述步骤(b)的经过搅拌的反应物进行冷却的同时，加入经过冷却的乙醇，从而凝固反应物的蛋白质；(d)将所述步骤(c)的经过凝固的反应物进行离心分离，从而使凝固物沉淀；以及(e)取所述步骤(d)的凝固物沉淀的反应物中的上清液，并进行浓缩及干燥。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.06.24 KR 10-2016-00793701.制备去除过敏成分的精制蜂毒的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)准备包含卵黄的缓冲溶液；(b)向所述步骤(a)中所准备的缓冲溶液中添加蜂毒后进行搅拌；(c)将所述步骤(b)的经过搅拌的反应物进行冷却的同时，加入经过冷却的乙醇，从而凝固反应物的蛋白质；(d)将所述步骤(c)的经过凝固的反应物进行离心分离，从而使凝固物沉淀；以及(e)取所述步骤(d)的凝固物沉淀的反应物中的上清液，并进行浓缩及干燥。2.根据权利要求1所述的制备去除过敏成分的精制蜂毒的方法，其特征在于，所述过敏成分为磷脂酶A2及透明质酸酶。3.根据权利要求1所述的制备去除过敏成分的精制蜂毒的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：金容隨，朴恩映，金星均，朴孝鎭，白英美，崔诚桓，丁荣辰，金宗贤，李秀炯，高焕柱，金完泳，郑宅根，全容佑，金世兰，金大谦，苪贤玉，郑荣穆，沈泰庚，宋永吉，金旦颖，严在娟，崔元会，李在锡，曹珢菽，罗圣勋，申东河，金惠秀，李宰僖，
申请(专利权)人：金容隨，
类型：发明
国别省市：韩国,KR